通过蓝光LED照明技术 估算 TLC板上化合物的产量
Summary
本协议开发了一种使用蓝光LED照明技术估计TLC板上化合物产量的方法。这种方法的优点是安全、有效、便宜，并允许研究人员同时测量多个样品。
Abstract
薄层色谱（TLC）是一种可访问的分析技术，已广泛用于有机化学研究，以量化未知样品的产量。本研究开发了一种有效、廉价且安全的方法来使用蓝光LED照明器估计TLC板上样品的产量。从 土曲霉 中提取的洛伐他汀是本研究中使用的示例化合物。基于洛伐他汀标准的回归模型用于评估洛伐他汀的产量。比较了三种方法：生物测定，紫外线检测和蓝光LED照明。结果表明，蓝光LED照明方法比紫外检测和生物测定方法具有显著的时效性。此外，由于生物测定方法中的生物危害（例如微生物感染）和紫外线检测方法中的紫外线暴露，蓝光LED照明是一种相对安全的选择。与在独立工作之前需要专业仪器和长期培训的昂贵方法（如GC、HPLC和HPTLC）相比，使用蓝光LED照明器是估算TLC板样品产量的经济选择。
Introduction
薄层色谱（TLC）被广泛用作有机化学领域的定性和定量技术1，2，3。TLC的主要优点是检测速度快，样品要求灵活，不需要专用设备4.迄今为止，尽管已经建立了许多先进的方法，但TLC仍然是识别混合物中未知样品的主要方法。然而，这种方法的挑战是缺乏安全且廉价的设备来量化样品产量，特别是对于开发预算有限的实验室。因此，本研究旨在开发一种高效、安全且廉价的方法，结合TLC来估计样品的产量。
与高效TLC（HPTLC）、高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）不同，TLC具有严格的样品要求，耗时长，并且涉及样品制备的多步骤1，5，TLC表现出几个优点。首先，对于样品制备，HPLC和GC无法检测到粗提取物，因为粗提取物可能会堵塞HPLC和GC的色谱柱。其次，当样品不适合紫外线（对HPLC分析很重要）或挥发性低（对GC分析很重要）时，可以将TLC应用于这些样品，并且使用可视化试剂使分离的样品在薄层6，7，8上可见。第三，对于一般用户来说，与TLC相比，HPLC和GC在独立工作之前通常需要相对较长的预训练时间。此外，定量TLC分析，称为高性能TLC（HPTLC），可以使用高灵敏度扫描仪将TLC板上的信息数字化。然而，HPTLC系统的成本相对昂贵。因此，开发一种经济高效且快速的方法来定量TLC板上的样品是一个重要的主题。
已经开发了类似的TLC产量定量方法;例如，Johnson9 报告了一种技术，该技术允许使用连接到计算机的平板扫描仪对TLC板上的样品进行定量。2001年，El-Gindy等人10 开发了TLC-密度测定法，该方法用于检测具有光密度的化合物，该技术也被Elkady等人11应用。2007年，Hess2 提出了数字增强TLC（DE-TLC）方法，该方法用于使用结合紫外光的数码相机检测TLC板上化合物的产量。Hess还比较了HPTLC和DE-TLC方法之间的成本差异，并得出结论，DE-TLC方法由于其可承受的成本2而可用于高中和大学实验室。然而，TLC密度法的成本仍然昂贵，并且紫外线的操作需要足够的预培训，以防用户可能暴露于紫外线辐射。因此，与TLC兼容，开发一种高效，安全且廉价的方法来定量样品产量是可取的。
本研究描述了一种使用蓝光LED照明器检测TLC板上样品的协议，并开发了一种具有高可靠性（高R平方值）的回归模型来测量条带的尺寸，然后确定化合物产量。最后，发现蓝光LED照明方法相对安全（与紫外线检测方法），便宜（与GC、HPLC 和 HPTLC）以及用于产量定量的有效（与生物测定方法相比）。
Protocol
Representative Results
Discussion
本研究描述了一种新的方法，即蓝光LED照明器，无需使用昂贵和专门的设备（如HPTLC，HPLC和GC方法）即可定量化合物，并将该方法与生物测定和紫外检测方法进行比较以评估定量性能。因此，得出的结论是，蓝光LED照明方法是一种相对安全有效的方案，用于量化TLC板上目标化合物的产率。
以前的研究已经报道了几种不使用专用定量设备的定量方法，并且所有研究表明定量的准…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项研究得到了台湾科技部的支持（MOST 108-2320-B-110-007-MY3）。
Materials
| American bacteriological Agar | Condalab | 1802.00 | |
| Aspergillus terreus | ATCC 20542 | ||
| Blue-LED illuminator | MICROTEK | Bio-1000F | |
| Centrifuge | Thermo Scientific | HERAEUS Megafuge 8 | |
| Compact UV lamp | UVP | UVGL-25 | |
| Ethyl Acetate | MACRON | MA-H078-10 | |
| Filter Paper 125mm | ADVANTEC | 60311102 | |
| ImageJ | NIH | Freeware | https://imagej.nih.gov/ij/download.html |
| Lovastatin standard | ACROS | A0404262 | |
| MiBio Fluo | MICROTEK | V1.04 | |
| n-Hexane | C-ECHO | HH3102-000000-72EC | |
| OriginPro | OriginLab | 9.1 | https://www.originlab.com/origin |
| Potato dextrose broth H | STBIO MEDIA | 110533 | |
| Rotary evaporator | EYELA | SB-1000 | |
| Sulfuric acid | Fluka | 30743-2.5L-GL | |
| TLC silica gel 60 F254 | MERCK | 1.05554.0001 | |
| Trifluoroacetic acid | Alfa Aesar | 10229873 | |
| Ultrasonic vibration machine | DELTA | DC600 |
Referências
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