ब्लू-एलईडी रोशनी तकनीक के माध्यम से टीएलसी प्लेट पर यौगिकों की उपज का अनुमान लगाना
Summary
वर्तमान प्रोटोकॉल ने नीली-एलईडी रोशनी तकनीक का उपयोग करके टीएलसी प्लेट पर यौगिकों की उपज का अनुमान लगाने के लिए एक विधि विकसित की। इस दृष्टिकोण के फायदे यह हैं कि यह सुरक्षित, प्रभावी, सस्ती है, और शोधकर्ता को एक साथ कई नमूनों को मापने की अनुमति देता है।
Abstract
पतली परत क्रोमैटोग्राफी (टीएलसी) एक सुलभ विश्लेषणात्मक तकनीक है जिसका उपयोग अज्ञात नमूनों की उपज को निर्धारित करने के लिए कार्बनिक रसायन विज्ञान अनुसंधान में बड़े पैमाने पर किया गया है। वर्तमान अध्ययन ने ब्लू-एलईडी इलुमिनेटर का उपयोग करके टीएलसी प्लेट पर नमूनों की उपज का अनुमान लगाने के लिए एक प्रभावी, सस्ता और सुरक्षित तरीका विकसित किया। एस्परगिलस टेरियस से निकाला गया लवस्टैटिन वर्तमान अध्ययन में उपयोग किया जाने वाला उदाहरण यौगिक था। लवस्टैटिन मानक पर आधारित प्रतिगमन मॉडल का उपयोग लवस्टैटिन की उपज का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था। तीन तरीकों की तुलना की गई: बायोसेसे, यूवी डिटेक्शन और ब्लू-एलईडी रोशनी। परिणाम से पता चला कि ब्लू-एलईडी रोशनी विधि यूवी का पता लगाने और बायोसेसे विधियों की तुलना में काफी अधिक समय प्रभावी है। इसके अतिरिक्त, बायोसेसे विधि (जैसे, माइक्रोबियल संक्रमण) में जैविक खतरों और यूवी पहचान विधि में पराबैंगनी जोखिम की चिंता के कारण ब्लू-एलईडी रोशनी अपेक्षाकृत सुरक्षित विकल्प था। जीसी, एचपीएलसी और एचपीटीएलसी जैसे स्वतंत्र रूप से काम करने से पहले विशेष उपकरणों और दीर्घकालिक प्रशिक्षण की आवश्यकता वाले महंगे तरीकों की तुलना में, ब्लू-एलईडी इलुमिनेटर का उपयोग करना टीएलसी प्लेट से नमूनों की उपज का अनुमान लगाने के लिए एक किफायती विकल्प था।
Introduction
पतली परत क्रोमैटोग्राफी (टीएलसी) का व्यापक रूप से कार्बनिक रसायन विज्ञान 1,2,3 के क्षेत्र में गुणात्मक और मात्रात्मक तकनीक के रूप में उपयोग किया जाता है। टीएलसी के मुख्य लाभ यह हैं कि यह तेजी से पहचान, लचीली नमूना आवश्यकताओं को प्रदान करता है, और विशेष उपकरण4 की आवश्यकता नहीं होती है। आज तक, भले ही कई उन्नत दृष्टिकोण स्थापित किए गए हैं, टीएलसी अभी भी मिश्रण में अज्ञात नमूनों की पहचान करने का मुख्य तरीका है। हालांकि, इस दृष्टिकोण की चुनौती नमूना उपज को निर्धारित करने के लिए सुरक्षित और सस्ती उपकरणों की कमी है, खासकर सीमित बजट के साथ प्रयोगशालाओं के विकास के लिए। इसलिए, वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य नमूनों की उपज का अनुमान लगाने के लिए टीएलसी के साथ संयोजन करने वाली एक कुशल, सुरक्षित और सस्ती विधि विकसित करना है।
उच्च प्रदर्शन वाले टीएलसी (एचपीटीएलसी), उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी), और गैस क्रोमैटोग्राफी (जीसी) के विपरीत सख्त नमूना आवश्यकताओं, समय लेने वाली और नमूना तैयार करने के लिए मल्टीस्टेप की भागीदारी 1,5 के साथ, टीएलसी ने कई फायदे दिखाए। सबसे पहले, नमूना तैयार करने के लिए, एचपीएलसी और जीसी कच्चे अर्क का पता नहीं लगा सकते हैं क्योंकि क्रूड एक्सट्रैक्ट एचपीएलसी और जीसी के कॉलम को प्लग कर सकता है। दूसरा, जब नमूने यूवी-उपयुक्त नहीं होते हैं (एचपीएलसी विश्लेषण के लिए महत्वपूर्ण) या कम अस्थिरता (जीसी विश्लेषण के लिए महत्वपूर्ण) के साथ, टीएलसी को इन नमूनों पर लागू किया जा सकता है, और विज़ुअलाइज़ेशन अभिकर्मक का उपयोग पृथक नमूनों को पतली परतों 6,7,8 पर दिखाई देता है। तीसरा, सामान्य उपयोगकर्ताओं के लिए, एचपीएलसी और जीसी को आम तौर पर टीएलसी की तुलना में स्वतंत्र रूप से काम करने से पहले अपेक्षाकृत लंबे समय तक पूर्व-प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, मात्रात्मक टीएलसी विश्लेषण, जिसे उच्च प्रदर्शन टीएलसी (एचपीटीएलसी) के रूप में जाना जाता है, अत्यधिक संवेदनशील स्कैनर के साथ टीएलसी प्लेट पर जानकारी को डिजिटाइज़ कर सकता है। हालांकि, एचपीटीएलसी प्रणाली की लागत अपेक्षाकृत महंगी है। जैसे, टीएलसी प्लेट पर नमूनों की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक लागत प्रभावी और तेज़ दृष्टिकोण विकसित करना एक महत्वपूर्ण विषय है।
टीएलसी उपज परिमाणीकरण के लिए इसी तरह के तरीके विकसित किए गए हैं; उदाहरण के लिए, जॉनसन9 ने एक तकनीक की सूचना दी जो कंप्यूटर से जुड़े फ्लैटबेड स्कैनर का उपयोग करके टीएलसी प्लेट पर नमूनों की मात्रा का ठहराव करने की अनुमति देती है। 2001 में, एल-गिंडी एट अल.10 ने टीएलसी-डेंसिटोमेट्रिक विधि विकसित की, जिसका उपयोग ऑप्टिकल घनत्व के साथ यौगिक का पता लगाने के लिए किया गया था, और तकनीक को एल्काडी एट अल.11 द्वारा भी लागू किया गया था। 2007 में, हेस2 ने यूवी प्रकाश के साथ संयुक्त डिजिटल कैमरे का उपयोग करके टीएलसी प्लेट पर एक यौगिक की उपज का पता लगाने के लिए लागू डिजिटल रूप से एन्हांस्ड-टीएलसी (डीई-टीएलसी) विधि प्रस्तुत की। हेस ने एचपीटीएलसी और डीई-टीएलसी विधि के बीच लागत अंतर की भी तुलना की और निष्कर्ष निकाला कि डीई-टीएलसी विधि का उपयोग हाई स्कूल और कॉलेज प्रयोगशालाओं में इसकी सस्ती लागत2 के कारण किया जा सकता है। हालांकि, टीएलसी-डेंसिटोमेट्रिक विधि की लागत अभी भी महंगी थी, और पराबैंगनी प्रकाश के संचालन के लिए पर्याप्त पूर्व-प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है यदि उपयोगकर्ता पराबैंगनी विकिरण के संपर्क में आ सकते हैं। इसलिए, टीएलसी के साथ संगत, नमूना उपज को निर्धारित करने के लिए एक कुशल, सुरक्षित और सस्ती विधि विकसित करना वांछनीय है।
वर्तमान अध्ययन ने ब्लू-एलईडी इलुमिनेटर का उपयोग करके टीएलसी प्लेट पर नमूने का पता लगाने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन किया, और बैंड के आयामों को मापने के लिए उच्च विश्वसनीयता (उच्च आर-वर्ग मूल्य) के साथ एक प्रतिगमन मॉडल विकसित किया, और फिर यौगिक उपज निर्धारित की। अंत में, यह पाया गया कि नीली-एलईडी रोशनी विधि अपेक्षाकृत सुरक्षित है (बनाम। यूवी-डिटेक्शन विधि, सस्ता (बनाम। जीसी, एचपीएलसी, और एचपीटीएलसी, और उपज परिमाणीकरण के लिए प्रभावी (बनाम बायोएसे विधि) दृष्टिकोण।
Protocol
Representative Results
Discussion
वर्तमान अध्ययन ने एचपीटीएलसी, एचपीएलसी और जीसी विधि जैसे महंगे और विशेष उपकरणों का उपयोग किए बिना यौगिकों की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक नए दृष्टिकोण, ब्लू-एलईडी इलुमिनेटर का वर्णन किया, और विधि क?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस अध्ययन को विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय, ताइवान (मोस्ट 108-2320-बी-110-007-एमवाई 3) द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| American bacteriological Agar | Condalab | 1802.00 | |
| Aspergillus terreus | ATCC 20542 | ||
| Blue-LED illuminator | MICROTEK | Bio-1000F | |
| Centrifuge | Thermo Scientific | HERAEUS Megafuge 8 | |
| Compact UV lamp | UVP | UVGL-25 | |
| Ethyl Acetate | MACRON | MA-H078-10 | |
| Filter Paper 125mm | ADVANTEC | 60311102 | |
| ImageJ | NIH | Freeware | https://imagej.nih.gov/ij/download.html |
| Lovastatin standard | ACROS | A0404262 | |
| MiBio Fluo | MICROTEK | V1.04 | |
| n-Hexane | C-ECHO | HH3102-000000-72EC | |
| OriginPro | OriginLab | 9.1 | https://www.originlab.com/origin |
| Potato dextrose broth H | STBIO MEDIA | 110533 | |
| Rotary evaporator | EYELA | SB-1000 | |
| Sulfuric acid | Fluka | 30743-2.5L-GL | |
| TLC silica gel 60 F254 | MERCK | 1.05554.0001 | |
| Trifluoroacetic acid | Alfa Aesar | 10229873 | |
| Ultrasonic vibration machine | DELTA | DC600 |
Referências
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