Bandas Aórticas O-Ring versus Constrição Aórtica Transversa Tradicional para Modelagem da Hipertrofia Cardíaca Induzida por Sobrecarga de Pressão

Summary

O presente protocolo descreve uma nova técnica de bandagem aórtica em camundongos para induzir hipertrofia cardíaca por sobrecarga pressórica. Para bandas, um anel de borracha com um diâmetro interno fixo é usado. Esta nova técnica promete menos variância e mais dados reprodutíveis para experimentos futuros.

Abstract

A banda aórtica em camundongos é um dos modelos experimentais mais comumente utilizados para hipertrofia cardíaca induzida por sobrecarga de pressão cardíaca e indução de insuficiência cardíaca. A técnica utilizada anteriormente é baseada em uma sutura rosqueada ao redor do arco aórtico amarrada sobre uma agulha 27 G embotada para criar estenose. Este método depende do cirurgião apertar manualmente a rosca e, assim, leva a uma alta variância no tamanho do diâmetro. Um método recém-refinado descrito por Melleby et al. promete menor variância e mais reprodutibilidade após a cirurgia. A nova técnica, a bandagem o-ring-aórtica (ORAB), usa um anel de borracha antiderrapante em vez de uma sutura com um fio, resultando em variação reduzida na sobrecarga de pressão e fenótipos reprodutíveis de hipertrofia cardíaca. Durante a cirurgia, o o-ring é colocado entre as artérias braquiocefálica e carótida esquerda. A constrição bem-sucedida é confirmada pela ecocardiografia. Após 1 dia, a colocação correta do anel resulta em um aumento da velocidade de fluxo na aorta transversal sobre a estenose induzida pelo anel o. Após 2 semanas, a função cardíaca prejudicada é comprovada pela diminuição da fração de ejeção e aumento da espessura da parede. É importante ressaltar que, além de menor variância no tamanho do diâmetro, o ORAB está associado a menores taxas de mortalidade intra e pós-operatórias em comparação com a constrição aórtica transversa (TAC). Assim, o ORAB representa um método superior à cirurgia TAC comumente utilizada, resultando em resultados mais reprodutíveis e uma possível redução no número de animais necessários.

Introduction

Embora a hipertrofia cardíaca fisiológica possa ser observada durante o desenvolvimento, o exercício e a gravidez, a hipertrofia cardíaca patológica responde a condições de estresse hemodinâmico, como hipertensão arterial, doença cardíaca valvar ou mutações genéticas. Inicialmente, o coração passa por um remodelamento caracterizado pelo aumento do tamanho dos cardiomiócitos e espessamento das paredes ventriculares para manter a função cardíaca ^1,2. Por outro lado, o remodelamento cardíaco patológico está associado a um risco aumentado de arritmia, morte súbita e alta mortalidade. Finalmente, com o tempo, resul....

Protocol

As experiências com animais foram realizadas sob os princípios do comité regional (Ministerium für Energiewende, Landwirtschaft, Umwelt, Natur und Digitalisierung des Landes Schleswig-Holstein, número de permissão: V242-21249/2020 [38-4/20]). Os camundongos utilizados para o presente estudo foram obtidos de uma fonte comercial (ver Tabela de Materiais). Os animais foram mantidos em condições padrão com um ciclo leve de 12 h e 12 h noturno; água e comida eram oferecidas ad libitum.

1. Cuidados com os animais

1. Hospede os ratos em gaiolas especializadas com roupas de cama, material de nidific....

Results

Geralmente, a banda aórtica imita a estenose aórtica humana e induz hipertrofia cardíaca em camundongos. Um procedimento bem-sucedido é caracterizado pelo remodelamento do tecido cardíaco refletido pela hipertrofia cardíaca e redução da função cardíaca ^5,6.

Diretamente 1 dia após a operação, o efeito da constrição do anel solar da aorta transversa pode ser determinado in vivo por ecocardiografia¹³. A in.......

Discussion

A bandagem aórtica baseada em fio/sutura tem sido usada há muitos anos para induzir hipertrofia cardíaca por sobrecarga de pressão em camundongos. É um método estabelecido para investigar os patomecanismos de remodelamento cardíaco e progressão da doença in vivo. As limitações são a variância relativamente alta no grau de estenose e, consequentemente, o remodelamento. A técnica ORAB recentemente introduzida, descrita pela primeira vez por Melleby et ^al.10 , otimiza o método convencional .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 x fixadores longos, 6 cm		18200-01
2 x Afastadores Rombos, 5 mm de largura		18200-11
2 x Fixadores Curtos, 3 cm		18200-02
2 x ponta fina 45° pinça angular	FST (ferramentas de ciência fina)	11160-10
3 x Retratores Rombos, 2,5 mm de largura		18200-10
3 x Fios Retratores		18200-05
4-0 sutura absorvível (Vicryl)	ETHICON	SABBKLT0	Usado para suturar a pele
6-0 sutura (Prolene), tamanho da agulha:13 mm	ETHICON	JDP879	Usado para suturar o músculo do peito
8-0 sutura (Prolene), tamanho da agulha: 6.5 mm	ETHICON	RHBECH	Usado para jejuar o Anel
Caixa de anestesia	pequeno aparelho Havard	50-0108
Camundongos C57BL/6N	Charles River
Fluosorber Filtro de Carvão Ativado Canister	Aparelho Havard	34-0415	Usado para induzir e manter anestesia
Laringoscopia artesanal			Intubaçõesajudam
o aparelho Harvard Vaporizador anestésico	Aparelho Havard		Usado para induzir e manter anestesia
Almofada de aquecimento + sonda retal (LSI Letica Scientific Instruments: Unidade de controle de temperatura HB 101/2 )	Aparelho Panlab/ Havard		Usado para controlar e manter a temperatura corporal
cânula i.v. azul 22-gauge (Vasofix Braunü le 0.9 x 25 mm)	B/Braunsharing Expertise	4268091B	intubação
isofluran	Baxter		Anesthesia
Kodan (solução betadina)	Schü lke	20003960-A	Desinfecção
auxiliar de ligadura	FST (ferramentas de ciência fina)	18062-12	Usado para realizar a ligação com O-ring
Iluminação de Microscópio: Conjunto Schott VisiLED MC1500/S80-55 (+ controlador)	Microscópio SCHOTT		Ligth
câmera  (Leica IC80 HD)	Leica		Usado para campo operacional de visualização
Sistemas Completos de Anestesia MiniVac para pequenos roedores	Aparelho Havard	75-0233	Usado para induzir e manter anestesia
Ventilador de Mouse MiniVent Tipo 845	Aparelho Havard	73-0044	Usado para ventilação durante a cirurgia
Porta-agulhas	FST (ferramentas de ciência fina)	TE-10804
O-ring, borracha antiderrapante (0.0018 mm x 0.020 mm)	Produtos de Borracha Apple		Tesoura de Tesoura do Arco Aórtico
	FST (ferramentas de ciência fina)	14040-09	Usada para cortar a pele e os fios
Sistema de Retração de Pequenos Animais (Kit para Animais até 200 g)	FST (ferramentas de finos componentes)	18200-20
Placa de Base Pequena, 20 x 30 cm		18200-03
Mesa integrada com almofada de aquecimento + sonda retal + tripé de ECG e  transdutor	Sistema de Imagem		Ecocardiografia
Temgesic (Buprenorfina)	Indivior UK Limited	997.00.00	Pré-medicação para dor
torneira de parada de três vias (azul)
Tramal (Tamadol)	Grü Dor	pós-medicação nental
sonda transdutor MS400 (Visual Sonics)		de Imagem FujiFilm Visual Sonics	Ecocardiografia
Sistema de ultrassom com pacote cardioligy		de Imagem FujiFilm Visual Sonics	Ecocardiografia
Tesoura de Mola Vannas - 2.5 mm Cutting Edge	FST (ferramentas de ciência fina)	15000-08	Usado para cortar o músculo intercostal do peito
pomada veterinária	Bepanten		Usado para evitar que os olhos sequem