Enxertia de mudas escalável, flexível e econômica

Summary

Este protocolo descreve um método robusto de enxertia de plântulas que não requer experiência ou treinamento prévio e pode ser executado a um custo muito baixo usando materiais de fácil acesso na maioria dos laboratórios de biologia molecular.

Abstract

A enxertia de plântulas em estágio inicial tornou-se uma ferramenta popular em genética molecular para estudar as relações raiz-parte aérea dentro das plantas. A enxertia de mudas em estágio inicial da pequena planta-modelo, Arabidopsis thaliana, é tecnicamente desafiadora e demorada devido ao tamanho e fragilidade de suas mudas. Uma coleção crescente de métodos publicados descreve essa técnica com diferentes taxas de sucesso, dificuldade e custos associados. Este trabalho descreve um procedimento simples para fazer um dispositivo de enxertia reutilizável in house usando mistura de elastômero de silicone, e como usar esse dispositivo para enxertia de plântulas. No momento desta publicação, cada dispositivo de enxertia reutilizável custa apenas US$ 0,47 em materiais consumíveis para produzir. Usando este método, os iniciantes podem ter suas primeiras mudas enxertadas com sucesso em menos de 3 semanas do início ao fim. Este procedimento altamente acessível permitirá que os laboratórios de genética molecular de plantas estabeleçam a enxertia de plântulas como parte normal de seu processo experimental. Devido ao total controle que os usuários têm na criação e design desses dispositivos de enxertia, essa técnica poderia ser facilmente ajustada para uso em plantas maiores, como tomate ou tabaco, se desejado.

Introduction

A enxertia é uma técnica hortícola antiga que se tornou uma prática agrícola estabelecida por volta de 500 a.C.¹. A enxertia de diferentes variedades de plantas cultivadas para melhorar a produtividade foi o primeiro uso dessa técnica, e continua sendo utilizada para esse fim até hoje. Na última década, a enxertia tem atraído cada vez mais atenção como ferramenta para biólogos moleculares estudarem a sinalização de longa distância em plantas 2,3,4,5. Enquanto enxertar plantas adultas é relativamente fácil, enxertar pl....

Protocol

1. Preparação do dispositivo

1. Fazer o dispositivo de enxertia de silicone fundindo a solução de elastômero de silicone em uma placa de Petri quadrada (100 mm x 100 mm). Preparar 15 mL da solução de elastômero, seguindo as orientações do fabricante.
   NOTA: Os kits de elastômero de silicone normalmente incluem um líquido à base de silicone e um agente de cura que, quando misturados, permitem que o silicone se solidifique.
2. Preparar a placa de Petri quadrada colocando quatro pedaços retos de fio 29 G na placa de Petri quadrada, equidistantes entre si (Figura 1A). Certifique-se de que o fio fique nivelado com o fundo d....

Results

Vários aspectos do desenho da tira de enxertia foram testados para identificar as condições ideais de enxertia que exigiam menor habilidade técnica (Tabela 1). Todos os ensaios de enxertia foram concluídos em meio MS de sacarose a 0,5%, que foi previamente relatado como um meio de enxertia ideal^11,12.

O crescimento ótimo das plântulas não pode ser alcançado com a germinação em faixa
Na primeira iter.......

Discussion

Resumo e significado
A formação de uma união do enxerto é crucial para o sucesso da enxertia, que requer contato direto e ininterrupto entre o porta-enxerto e a muda. O tamanho em miniatura e a fragilidade das mudas de pequenas plantas, como Arabidopsis, tornam tecnicamente desafiador atender a esse requisito. Uma técnica desenvolvida nos primeiros métodos de enxertia de plântulas de Arabidopsis foi inserir tanto a copa quanto o porta-enxerto em um colar curto de tubos de silicone pa.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tubos cónicos de 15 ml	VWR International Inc	10026-076
ACETONA (HPLC & Solvente Certificado ACS) 4 L	VWR	BJAH010-4
BactoAgar	Sigma	A1296-500g
Dow SYLGARD 184 Encapsulante de Silicone Transparente 0,5 kg Kit	Dow	2646340
D-Sacarose (Biologia Molecular), 1 kg	Fisher Scientific	BP220-1
Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Flex-Tube Tubes (1,5 mL), pacote de 500	Fisher Scientific	20901-551 / 05-402
Cabo de bisturi de alta precisão Fisherbrand #4 Estilo Fisher	Scientific	12-000-164
Fita de autoclave sem chumbo Fisherbrand Fisher	Scientific	15-901-111
Placas de Petri quadradas Fisher	Scientific	FB0875711A
Leica Zoom 2000 Microscópio Estéreo	Microscópio Central	L-Z2000
Fita Micropore	3M	B0082A9FEM
Murashige e Skoog Basal Medium	Sigma	M5519-10L
Parafilm	Genesee Scientific	16-101
hidróxido de potássio	VWR International Inc	AA13451-36
Redi-earth Plug e Mix de Mudas	Sun Gro Horticulture	SUN239274728CFLP
Scotts Osmocote Plus	Hummert International	7630600
Surgical Design No. 22 Lâmina de Bisturi de Carbono	Fisher Scientific	22-079-697
Tween 20, 500 mL	Fisher Scientific	BP337500
PINÇA DUMONT STYL55 DUMOXEL POLS 110 MM	VWR	102091-580