O presente protocolo descreve um método simples e eficiente para a coleta dinâmica e em tempo real de sangue de coração de ratos utilizando a técnica de microdiálise.
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Artigo de método
Extração Contínua Dinâmica de Sangue do Coração de Rato via Técnica de Microdiálise Não Invasiva
Neste artigo
Resumo
Resumo
A análise dinâmica dos hemocomponentes é de grande importância na compreensão das doenças cardiovasculares e suas doenças relacionadas, como infarto do miocárdio, arritmia, aterosclerose, edema pulmonar cardiogênico, embolia pulmonar e embolia cerebral. Ao mesmo tempo, é urgente romper a técnica de amostragem contínua de sangue cardíaco em ratos vivos para avaliar a eficácia da terapia de medicina étnica distinta. Neste estudo, uma sonda de microdiálise sanguínea foi implantada na veia jugular direita de ratos em um procedimento cirúrgico preciso e não invasivo. Amostras de sangue cardíaco foram então coletadas a uma taxa de 2,87 nL/min a 2,98 mL/min conectando-se a um sistema on-line de coleta de amostras de microdiálise. Ainda mais momentaneamente, as amostras de sangue adquiridas podem ser temporariamente armazenadas em recipientes de microdiálise a 4 °C. O programa on-line de coleta contínua de sangue de coração de rato baseado em microdiálise tem garantido sobremaneira a qualidade das amostras de sangue, avançando e revigorando a racionalidade científica das pesquisas sobre doenças cardiovasculares sistêmicas e avaliando a terapia etnomédica sob a perspectiva da hematologia.
Introdução
Com a aceleração do ritmo de vida e o aumento da pressão psicológica, as doenças cardiovasculares (DCV) tendem a ocorrer em jovens, pessoas de meia-idade e idosos 1,2. A morbidade e a mortalidade das DCV são elevadas, com características de início agudo, rápida progressão e longo curso da doença, o que afeta seriamente a segurança dospacientes3. A ocorrência de DCV pode estar intimamente relacionada às alterações em alguns componentes sanguíneos, como colesterol, lipídios séricos, glicemia, enzimas miocárdicas e proteína quinase K 4,5....
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Protocolo
O protocolo animal foi aprovado pelo Comitê Administrativo da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Chengdu (Número de registro: 2021-11). Ratos Sprague Dawley (SD) machos livres de patógenos especificados (8-10 semanas, 260-300 g) foram criados em gaiolas de ventilação independente, mantendo o ambiente de laboratório a 22 °C e 65% de umidade relativa, e foram utilizados para o presente estudo. Os animais foram obtidos de fonte comercial (ver Tabela de Materiais). Todos os ratos foram habituados à alimentação adaptativa por 1 semana com água livre e dieta durante o período.
1. Preparação experimental
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Resultados
O presente protocolo permitiu a obtenção do sangue cardíaco de ratos conscientes de acordo com parâmetros de amostragem estabelecidos no equipamento de microdiálise. As amostras de sangue normais devem ser vermelhas brilhantes, enquanto os animais com hipóxia, potenciais coágulos sanguíneos ou doença anêmica podem ter roxo escuro ou vermelho escuro. As amostras obtidas pela técnica de microdiálise sanguínea são incolores, claras e transparentes, podendo ser utilizadas para analisar os marcadores séricos de diferentes doe.......
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Discussão
As DCV são uma doença crônica comum nas clínicas, com incidência gradativamente crescente na China, e a idade de início tende a ser mais jovem, causando preocupação e pânico na maioria dospacientes20,21. Sendo a principal causa de morte no mundo, as DCV podem induzir infarto cerebral e outras doenças de alta mortalidade, ameaçando seriamente a vida saudável dos pacientes22. As DCV, incluindo cardiopatia isquêmica, cardiomiopatia, ateroscle.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82104533), pela Fundação de Ciência Pós-Doutoral da China (2020M683273), pelo Departamento de Ciência e Tecnologia da província de Sichuan (2021YJ0175) e pelo projeto de P&D chave do Plano Provincial de Ciência e Tecnologia de Sichuan (2022YFS0438). Enquanto isso, os autores gostariam de agradecer ao Sr. Yuncheng Hong, engenheiro de equipamentos sênior da TRI-ANGELS D&H TRADING PTE. (cidade de Cingapura, Cingapura), para prestação de serviços técnicos para técnicas de microdiálise.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Sistema de anestesia animal | Rayward Life Technology Co., Ltd | R500IE | |
| Mantenedor de temperatura animal | Rayward Life Technology Co., Ltd | 69020 | |
| Sonda de microdiálise sanguínea | Cateter CMA Microdialysis AB | T55347 | |
| CMA Microdiálise AB | T55347 | ||
| Citrato | Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd | 251275 | |
| Barbeador elétrico | Rayward Life Technology Co., Ltd | CP-5200 | |
| Tubulação Fep | Tanque de Livre Circulação CMA Microdialysis AB | 3409501 | |
| para animais | CMA Microdiálise AB | CMA120 | |
| Glicose | Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd | G8270 | |
| Pinça hemostática | Rayward Life Technology Co., Ltd | F21020-16 | |
| Isofluran | Rayward Life Technology Co., Ltd | R510-22 | |
| Micro tesoura | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | FS221 | |
| Microdiálise tubo de coleta | Coletor de microdiálise CMA Microdialysis AB | 7431100 | |
| CMA Microdialysis AB | CMA4004 | ||
| Microdiálise in vitro stand | Bomba de microinjeção de microdiálise CMA Microdialysis AB | CMA130 | |
| CMA Microdialysis AB | 788130 | ||
| Seringa para microdiálise (1,0 mL) | Adaptador de tubo de microdiálise CMA Microdialysis AB | 8309020 | |
| CMA Microdiálise AB | 3409500 | ||
| Membrana filtrante microporosa | Merck Millipore Ltd. | ||
| Suturas cirúrgicas não absorvíveis | Shanghai Tianqing Biological Materials Co., Ltd | S19004 | |
| Mesa de operação | Yuyan Scientific Instrument Co., Ltd | 30153 | |
| Pinça oftálmica | Rayward Life Technology Co., Ltd | F12016-15 | |
| Citrato de sódio | Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd | 1613859 | |
| Sprague Dawley (SD) ratos | Chengdu Dossy Experimental Animals Co., Ltd | SYXK( )2019-049 | |
| Tesoura cirúrgica | Rayward Life Technology Co., Ltd | S14014-15 | |
| Tesoura cirúrgica | Shanghai Bingyu Fluid technology Co., Ltd | BY-103 | |
| Agulha de seringa | Líquido | ||
| Goote ultrassônico Co. de Guangdong Goote | KMH1-240W8101 |
Referências
- van Rensburg, W. J. J. Post-mortem evidence of a diverse distribution pattern of atherosclerosis in the South African population. Scientific Reports. 12 (1), 11366(2022).
- Katz, A. J., Chen, R. C., Usinger, D. S., Danus, S. M., Zullig, L. L.
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Reimpressões e permissões
