Apresentado aqui é um método para alimentar carrapatos no sangue in vitro através de um sistema de membrana artificial para permitir o ingurgitamento parcial ou total de uma variedade de estágios de vida do carrapato.
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Artigo de método
Carrapato Alimentação por Membrana Artificial para Ixodes scapularis
Neste artigo
Resumo
Resumo
Os carrapatos e suas doenças associadas são um importante tópico de estudo devido à sua saúde pública e carga veterinária. No entanto, as necessidades de alimentação dos carrapatos durante o estudo e a criação podem limitar as questões experimentais ou a capacidade dos laboratórios de pesquisar carrapatos e seus patógenos associados. Um sistema de alimentação por membrana artificial pode reduzir esses problemas e abrir novos caminhos de pesquisa que podem não ter sido possíveis com os sistemas tradicionais de alimentação animal. Este estudo descreve um sistema de alimentação por membrana artificial que foi refinado para o sucesso da alimentação e ingurgitamento para todos os estágios de vida de Ixodes escapulares . Além disso, o sistema de alimentação por membrana artificial descrito neste estudo pode ser modificado para uso com outras espécies de carrapatos através do simples refinamento da espessura de membrana desejada. Os benefícios de um sistema de alimentação por membrana artificial são contrabalançados pela intensidade do trabalho do sistema, os fatores ambientais adicionais que podem afetar o sucesso da alimentação e a necessidade de refinar a técnica para cada nova espécie e estágio de vida dos carrapatos.
Introdução
As doenças transmitidas por carrapatos afetam fortemente a saúde de humanos e animais em todo o mundo, sendo responsáveis por mais de dois terços de todas as doenças associadas a vetores nos EUA de 2004 a 20161. Além disso, o número de casos vem crescendo nos últimos anos, com mais pessoas e gado sendo afetados por carrapatos e suas doenças associadas 2,3. Embora existam provavelmente inúmeras causas para a tendência ascendente no número de casos, a mudança climática é um fator importante 3,4. O aumento contínuo previsto no núme....
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Protocolo
1. Preparação da câmara de membrana do carrapato
- Prepare uma superfície plana e não porosa, como um plano de vidro ou base metálica revestida de cerâmica de um suporte de braço, limpando-a com etanol a 70% e, em seguida, cubra-a com uma única camada de filme plástico, certificando-se de que o filme plástico é plano e sem bolhas ou rugas (ver Figura 1A).
- Tape 100% de papel de limpeza da lente rayon para a superfície preparada. Certifique-se de que está plano e ligeiramente tenso com fita adesiva em todos os quatro lados do papel. Dois pedaços de 4 em x 6 em papel de lente podem ser transformados em memb....
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Resultados
Uma alimentação bem-sucedida depende se um ingurgitamento parcial ou total é desejado. Alimentado com sucesso I. scapularis virar um tom de cinza gunmetal para adultos e se desprender por conta própria da membrana. No entanto, se eles são pelo menos do tamanho de ervilha, eles podem ser separados da membrana ao terminar a alimentação. Para estágios imaturos de I. scapularis , o tamanho para carrapatos totalmente ingurgitados varia, e porque, ao contrário dos adultos, eles não exibem uma mudança de cor, .......
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Discussão
A alimentação artificial por membrana de carrapatos fornece uma ferramenta útil para uma variedade de procedimentos experimentais, mas não é provável que substitua a alimentação animal para todas as aplicações. Manter grandes colônias de carrapatos em todos os estágios da vida sem alimentação animal é geralmente insustentável. Em vez disso, o sistema de alimentação artificial é valioso para outros fins, como infectar carrapatos com patógenos não suportados por hospedeiros modelo, avaliar os impactos de dosagens controlad.......
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 00-10 Dureza Silicone | Smooth-On | Ecoflex 00-10 | Tamanho de teste da Loja Smooth-On |
| 00-50 Dureza Silicone | Smooth-On | Ecoflex 00-50 | Tamanho de teste da Loja Smooth-On |
| 30 Dureza Silicone | Smooth-On | Mold Star 30 | Tamanho de teste da Loja Smooth-On |
| Placas de cultura de células de 6 poços | Corning Incorporated | 3516 | |
| Trifosfato de adenosina (ATP) | Millipore Sigma | A1852-1VL | Usado para fazer uma solução aquosa de 3 mM ATP que foi filtrada esterilizada via filtro de 0,2 micômetro |
| Sangue bovino | HemoStat | DBB500 | Mecanicamente desfibrinado; 500 mL é geralmente suficiente para um experimento |
| Clingwrap | Fisherbrand | 22-305654 | |
| Papel de filtro | Fisherbrand | 09-790-2C | Autoclave e deixe esfriar antes de usar. Pode usar qualidade fina em vez de média também |
| Fluon (politetrafluoretileno aquoso) | Bioquip | 2871 | Disponível de outras fontes, como https://canada-ant-colony.com/products/fluon-ptfe-10ml |
| Glicose | Millipore Sigma | G8270-100G | |
| Hexano | Millipore Sigma | 139386-100ML | |
| Papel para lentes | Fisherbrand | 11-995 | 100% rayon |
| Nistatina | Gold Biotechnology | N-750-10 | |
| Parafilm | Fisherbrand | S37440 | |
| Penicilina/estreptomicina/fungizona | Gibco | 15240-096 | Ou genérico equivalente com concentração como segue (10.000 unidades/mL de penicilina, 10.000 µ g/mL de estreptomicina e 25 µ g/mL de Anfotericina B) |
| Fagoestimulante | Feito em Casa | Coletado de alimentações anteriores de carrapatos | |
| Tubo de Policarbonato | McMaster-Carr | 8585K204 | Corte em 45 mm de comprimento, 1,25 polegada de diâmetro externo, 1 polegada de diâmetro interno. O corte requer um rebolo de serra de corte. |
| Anéis de Borracha | McMaster-Carr | 9452K38 | 5 mm de espessura, 1,25 pol de diâmetro interno |
| Pinça de toque suave | VWR | 470315-238 | |
| Super cola | de cianoacrilato cola | ||
| Papel Unryu | O material de arte armazena | fibra de amoreira 10 g / m < sup>2< / sup>. Comprado na loja de materiais de arte Wet Paint, St. Paul, MN, EUA |
Referências
- Rosenberg, R., et al. Vital signs: trends in reported vectorborne disease cases - United States and territories, 2004-2016. Morbidity and Mortality Weekly Report. 67 (17), 496-501 (2018).
- Busch, J. D., et al.
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Reimpressões e permissões
