Testando imunoterápicos contra o câncer em um modelo humanizado de camundongo com tumores humanos

Jordi M. Lanis; Matthew S. Lewis; Hannah Strassburger; Kristina Larsen; Stacey M. Bagby; Adrian T. A. Dominguez; Juan A. Marín-Jiménez; Roberta Pelanda; Todd M. Pitts; Julie Lang

doi:10.3791/64606

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Artigo de método

Testando imunoterápicos contra o câncer em um modelo humanizado de camundongo com tumores humanos

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DOI:

10.3791/64606

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16 de dezembro de 2022

Jordi M. Lanis^*¹ , Matthew S. Lewis^*¹ , Hannah Strassburger¹ , Kristina Larsen¹ , Stacey M. Bagby² , Adrian T. A. Dominguez² , Juan A. Marín-Jiménez³ , Roberta Pelanda¹ , Todd M. Pitts² , Julie Lang¹

¹Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus, ²Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus, ³Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L'Hospitalet)

^* These authors contributed equally

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Resumo

Este protocolo descreve a geração de camundongos do sistema imunológico humano (HIS) para estudos de imuno-oncologia. Instruções e considerações sobre o uso deste modelo para testes de imunoterápicos humanos em tumores humanos implantados neste modelo são apresentadas com ênfase na caracterização da resposta do sistema imune humano ao tumor.

Resumo

A reversão da natureza imunossupressora do microambiente tumoral é crítica para o sucesso do tratamento de cânceres com drogas imunoterápicas. Os modelos de câncer murino são extremamente limitados em sua diversidade e sofrem de má tradução para a clínica. Para servir como um modelo pré-clínico mais fisiológico para estudos de imunoterapia, este protocolo foi desenvolvido para avaliar o tratamento de tumores humanos em um camundongo reconstituído com um sistema imunológico humano. Este protocolo único demonstra o desenvolvimento de camundongos do sistema imunológico humano (HIS, "humanizados"), seguido pela implantação de um tumor humano, seja um xenoenxerto derivado de linhagem celular (CDX) ou um xenoenxerto derivado de paciente (PDX). Os camundongos HIS são gerados pela injeção de células-tronco hematopoéticas humanas CD34+ isoladas do sangue do cordão umbilical em camundongos neonatais BRGS (BALB/c Rag2-/- IL2RγC-^/- NOD^SIRPα) altamente imunodeficientes que também são capazes de aceitar um tumor xenogênico. Enfatiza-se a importância da cinética e das características do desenvolvimento do sistema imune humano e da implantação tumoral. Finalmente, uma avaliação aprofundada do microambiente tumoral usando citometria de fluxo é descrita. Em numerosos estudos utilizando este protocolo, verificou-se que o microambiente tumoral de tumores individuais é recapitulado em camundongos HIS-PDX; Tumores "quentes" exibem grande infiltração imunológica, enquanto tumores "frios" não. Este modelo serve como um campo de testes para imunoterapias combinadas para uma ampla gama de tumores humanos e representa uma ferramenta importante na busca por medicina personalizada.

Introdução

Modelos de câncer em camundongos são importantes para estabelecer mecanismos básicos de crescimento tumoral e escape imunológico. No entanto, estudos de tratamento de câncer em modelos murinos têm produzido tradução finita para a clínica devido a modelos singênicos limitados e diferenças espécie-específicas ^1,2. O surgimento das imunoterapias como abordagem dominante para o controle de tumores tem reiterado a necessidade de um modelo in vivo com sistema imune humano funcional. Os avanços em camundongos do sistema imunológico humano (camundongos HIS) na última década tornaram possível o estudo da imuno....