HPLC, Akasya Armandii Caulis'in Özgünlüğünü Tanımlamak için Çok Desen Tanıma için Kimyasal Parmak İzi ile Birleştirildi
Summary
Burada, Akasit Armandii Caulis ve zina maddelerinin gerçek çeşitlerini etkili bir şekilde tanımlamak için yeni bir strateji sağlayan kimyasal parmak izi çoklu desen tanıma ile birlikte yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.
Abstract
Çin tıbbi materyallerini ve ilgili zina maddelerini tanımlamak için bir yöntem, Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, evrensel olarak kullanılan geleneksel Çin tıbbı) örnek alınarak oluşturulmuştur. On parti gerçek Chuanmutong çeşidi ve beş parti ilgili zina yapan, küme analizi (CA), ana bileşen analizi (PCA) ve ortogonal kısmi en küçük kareler ayrım analizi (OPLS-DA) dahil olmak üzere kemometri ile birleştirilmiş yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) parmak izlerine dayanarak analiz edildi ve karşılaştırıldı. Ek olarak, β-sitosterol içeriği belirlendi. Chuanmutong’un kontrol kimyasal parmak izi kuruldu ve 12 ortak tepe noktası tespit edildi. 10 parti gerçek Chuanmutong çeşidinin parmak izi ile kontrol parmak izi arasındaki benzerlik 0.910-0.989 iken, beş parti zina yapanın benzerliği sadece 0.133-0.720 idi. Kromatogramdaki ortak zirvelere dayanarak, 15 parti numune PCA tarafından üç içerik seviyesine sınıflandırıldı ve CA tarafından dört kategoriye ayrıldı ve otantik Chuanmutong ile Chuanmutong’un zina maddeleri arasında net bir ayrım yapıldı. Ayrıca, otantik Chuanmutong’u ve Chuanmutong’un zina yapanlarını etkili bir şekilde tanımlayabilen yedi diferansiyel bileşen, OPLS-DA aracılığıyla bulundu. 10 parti gerçek Chuanmutong çeşidinin β-sitosterol içeriği 97.53-161.56 μg / g iken, beş zina partisinin β-sitosterol içeriği büyük ölçüde değişmiştir, bunların arasında Akasma peterae Hand’in β-sitosterol içeriği de bulunmaktadır.-Mazz. ve Akasma gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. ve Wils. otantik Chuanmutong çeşitlerinden önemli ölçüde daha düşüktü. Bu çalışmada oluşturulan HPLC indeks bileşeni içeriği ve kimyasal parmak izi çoklu desen tanıma yöntemi, otantik Çin tıbbi materyallerini ve ilgili zina maddelerini etkili bir şekilde tanımlamak için yeni bir strateji sunmaktadır.
Introduction
Chuanmutong, Akasma armandii Franch’ın kuru Caulis’i. veya Akasma montana Buch.-Ham.,kliniklerde yaygın olarak kullanılan geleneksel bir Çin tıbbıdır 1,2,3. İdrar problemlerinin, ödemin, dil ve ağızdaki yaraların, süt salgısının azalmasının, eklem sertliğinin ve nemli ısının neden olduğu kas ağrılarının tedavisinde kullanılır4. Chuanmutong her zaman, çoğunlukla güneybatı Çin’de, özellikle de en iyi kalitenin bulunabileceği Sichuan’da dağıtılan vahşi çeşitlerden elde edilmiştir 5,6. Otantik çeşitler ile yakından ilişkili zina yapanları, benzer özelliklerinden dolayı ayırt etmek zordur 7,8,9,10. Çin Farmakopesinin 2020 baskısındaki Chuanmutong’un kalite standardı, yalnızca içerik belirleme olmadan özellikleri, mikroskobik tanımlamayı ve ince tabaka tanımlamayı şart koşar, bu da zina yapanları etkili bir şekilde tanımlayamaz ve bu nedenle potansiyel riskleri vardır. Dahası, Chuanmutong ve ilgili bitkileri karşılaştıran ve tanımlayan az sayıda rapor vardır. Sonuç olarak, Chuanmutong’un özgünlüğünü sağlamak için bir kalite kontrol yöntemi daha fazla çalışmaya değer.
Chuanmutong’un kimyasal bileşenleri esas olarak oleanan tipi pentasiklik triterpenoidlerden ve bunların glikozitlerinden, flavonoidlerinden ve organik asitlerinden oluşur11,12,13,14. Bunlar arasında, oleanolik asit, β-sitosterol, stigmasterol ve ergosterol, diürezi teşvik etmek ve straanguriayı hafifletmek için potansiyel farmakodinamik maddeler olabilecek farklı yoğunluklarda diüretik etkilere sahiptir15,16. Kimyasal parmak izleri, numunelerde bulunan birçok kimyasal bileşenin yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), gaz kromatografisi (GC) vb. ile ayrılması ve algılanmasıyla elde edilir. Chuanmutong’un özelliklerini analiz etmek için uygun istatistiksel analiz yöntemlerinin benimsenmesi, geleneksel Çin tıbbının genel kalite kontrolünü ve bilimsel tanımlamasını belirleyebilir17,18,19.
Bu çalışmada, 10 parti Chuanmutong otantik çeşidi ve beş parti zina eden toplanmıştır. Kaliteleri, küme analizi (CA), ana bileşen analizi (PCA), ortogonal kısmi en küçük kareler ayrım analizi (OPLS-CA) ve farmakodinamik bileşenin içerik belirlemesi dahil olmak üzere çok desenli tanıma ile birleştirilmiş HPLC parmak izi yöntemi ile karşılaştırılmış ve analiz edilmiştir. Bu protokol, otantik çeşitleri yüksek özgüllükle tanımlamak için bir yöntem, otantik çeşitlerin ve Çin tıbbi malzemelerinin zina maddelerinin bilimsel olarak tanımlanması için yeni bir strateji oluşturur.
Protocol
Representative Results
Discussion
Araştırma için örnek koleksiyonu, Çin tıbbi malzemelerinin özgünlüğünü tanımlamada çok desenli tanıma oluşturmanın ilk önemli adımıdır. Pazar araştırması sayesinde, Sichuan Ya’an, Liangshan ve Leshan’ın Chuanmutong’un vahşi kaynaklarının ana üretim alanları olduğunu gördük. Aynı cinsin ilgili çeşitleri de aynı coğrafi dağılıma sahiptir 6,20; CC, DC, DE, XS ve SMT genellikle Chuangmutong16,21</s…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Sichuan Geleneksel Çin Tıbbı İdaresi Projesi (no. 2020JC0088, no. 2021MS203) tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Acetic acid | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2017381038 | |
| Acetonitrile | Sigma-Aldrich Trading Co., Ltd., Shanghai, China | WXBD5243V | |
| β-Sitosterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China | 20210201 | |
| C18 column | Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China | Welch Ultimate LP | |
| Chuanmutong | Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China | 19020103 | CMT-1 |
| Chuanmutong | Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 200701 | CMT-2 |
| Chuanmutong | Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 200701 | CMT-3 |
| Chuanmutong | Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 200901 | CMT-4 |
| Chuanmutong | Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 210701 | CMT-5 |
| Chuanmutong | Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 210401 | CMT-6 |
| Chuanmutong | Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 200901 | CMT-7 |
| Chuanmutong | Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China | 201201 | CMT-8 |
| Chuanmutong | Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China | 201001 | CMT-9 |
| Chuanmutong | Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 210501 | CMT-10 |
| Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang | Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China | – | CC |
| Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils. | Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China | – | DC |
| Clematis peterae Hand.-Mazz. | Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China | – | DE |
| Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils | Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China | – | XS |
| Clematis finetiana Levl. et Vaniot. | Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China | – | SMT |
| Electronic balance | Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai, China | FA1204 | |
| Ergosterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China | 20210201 | |
| Ethanol | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China | 2021112602 | |
| Ethyl acetate | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2017042043 | |
| Formic acid | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China | 2016062901 | |
| High performance liquid chromatography | Agilent, USA. | 1260 | |
| IBM SPSS Statistics version 26.0 | International Business Machines Corporation, USA | – | |
| Methanol | Sigma-Aldrich Trading Co., Ltd., Shanghai, China | WXBD6409V | |
| Methanol | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China | 202010302 | |
| n-butyl alcohol | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2020071047 | |
| Petroleum ether | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2020090125 | |
| Phosphoric acid | Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 20200110 | |
| SESCF-TCM version 2012 | National Pharmacopoeia Commission, China | – | http://114.247.108.158:8888/login |
| Stigmasterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China | 20210201 | |
| Trichloromethane | Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China | 20200214 | |
| Umetrics SIMCA version 14.1.0.2047 | Umetrics, Sweden | – | https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download |
| Ultrapure water machine | Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China | UPH-II-10T | |
| Ultrasonic cleaner | Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China | KH3200E |
Referências
- Chen, C. R. . Chinese Medicine Specimen Picture Book. , 116 (1935).
- Xiong, J., et al. Lignans from the stems of Clematis armandii ("Chuan-Mu-Tong") and their anti-neuroinflammatory activities. Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).
- Pan, L. L., et al. a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway. Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. . Pharmacopoeia of The People’s Republic of China: (Edition 2020). , 38 (2020).
- Wang, D. G., Guo, J. L. Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii. Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696 (2007).
- Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).
- Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. Study on the identification of Caulis Clematidis Armandii. Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).
- Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet. Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).
- Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii. Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).
- Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence. Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).
- Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham. Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).
- Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. Studies on four compounds from Clematis Montana. Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).
- Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I). Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).
- Li, X., et al. Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review. Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245 (2021).
- Ye, X., et al. Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats. China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).
- Kuang, Y., et al. Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy. Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).
- Li, Y., et al. Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).
- Li, Y., et al. Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).
- Li, H. H., et al. Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition. Chemistry & Biodiversity. 18 (8), 2100281 (2021).
- Dong, L. J., et al. Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii. Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).
- Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. Morphological and histological identification of Chuanmutong. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).
- Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. Quality Research of Chuanmutong. Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).
- Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. Research on the Quality Standard of Chuanmutong. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).
- Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).
- Qing, L. S., et al. Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).
- Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS. Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).
