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Medicina

원발성 월경통이 있는 쥐에서 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법을 사용한 원시 및 처리된 Cyperi Rhizoma 샘플 분석

Published: December 23, 2022
doi:
10.3791/64691
, , , , ,
1Chongqing Engineering Research Center of Pharmaceutical Evaluation of Chinese Medicine,Chongqing Academy of Chinese Materia Medica

Summary

여기에서는 원발성 월경통이 있는 쥐에서 초고성능 액체 크로마토그래피-고분해능 탠덤 질량분석법(UPLC-MS/MS)을 사용하여 원시 및 가공된 Cyperi rhizoma(CR) 샘플의 비교 분석을 제시합니다. 대사 산물 및 샘플 성분의 혈중 농도 변화는 CR로 처리 된 쥐와 식초로 처리 된 CR (CRV) 사이에서 조사되었습니다.

Abstract

Cyperi rhizoma (CR)는 산부인과에서 널리 사용되며 중국의 여성 질병 치료를위한 일반 의약품입니다. 식초로 처리한 후 CR의 진통 효과가 향상되기 때문에 식초로 처리한 CR(CRV)은 일반적으로 임상적으로 사용됩니다. 그러나, 식초 가공에 의해 진통 효과가 향상되는 메커니즘은 불분명하다. 이 연구에서는 초고압 액체 크로마토그래피탠덤 질량분석법(UPLC-MS/MS) 기술을 사용하여 월경통이 있는 CR 처리 쥐와 CRV 처리 쥐 사이의 외인성 성분 및 대사 산물의 혈중 농도 변화를 조사했습니다. 그 결과 이 쥐의 혈액에서 15가지 성분과 2가지 대사 산물의 수준이 다른 것으로 나타났습니다. 그 중에서도 CRV 그룹의 (-)-myrtenol 및 [(1R, 2S, 3R, 4R) -3- 하이드 록시 -1,4,7,7- 테트라 메틸 사이클로 [2.2.1] 헵트 -2- 일] 아세트산의 수준은 CR 그룹보다 상당히 높았다. CRV는 전염증, 혈소판 응집 및 혈관 수축 활성이 있는 2 시리즈 프로스타노이드 및 4 시리즈 류코트리엔의 수준을 감소시키고 아라키돈산 및 리놀레산 대사와 불포화 지방산의 생합성을 조절하여 진통 효과를 제공했습니다. 이 연구는 식초 가공이 CR의 진통 효과를 향상시키고 CRV의 작용 메커니즘에 대한 우리의 이해에 기여한다는 것을 보여주었습니다.

Introduction

원발성 월경통(PD)은 임상 산부인과에서 가장 흔한 상태입니다. 생식 기관의 골반 병리 없이 월경 전이나 월경 중 요통, 부기, 복통 또는 불편함이 특징입니다1. 유병률에 대한 보고서에 따르면 학생의 85.7%가 PD2를 앓고 있습니다. 저용량 경구 피임약이 표준 치료법이지만 심부 정맥 혈전증과 같은 부작용이 점점 더 주목을 받고 있다3. 경구 피임약 사용자 중 심부 정맥 혈전증의 유병률은 여성 1,000명당 >1명이며, 위험은 처음 6-12개월과 40세 이상 사용자 사이에서 가장 높다4.

중국 전통 의학(TCM)에서 오랫동안 사용된 Cyperi rhizoma(CR)는 Cyperaceae 계통의 Cyperus rotundus L.의 말린 뿌리줄기에서 파생됩니다. CR은 월경 장애를 조절하고 우울증과 통증을 완화합니다5. CR은 산부인과에서 널리 사용되며 여성의 질병을 치료하는 일반 의학으로 간주됩니다6. 식초로 처리된 CR(CRV)은 일반적으로 임상적으로 사용됩니다. CR과 비교하여 CRV는 월경 및 통증 완화에 대한 강화된 조절을 보여줍니다. 현대 연구에 따르면 CR은 cyclooxygenase-2 (COX-2)와 프로스타글란딘 (PG)의 후속 합성을 억제하여 항 염증 효과를 얻습니다. 한편, CR은 부작용 없이 진통 효과를 나타내므로7 CR은 월경통 환자에게 좋은 선택이 된다. 그러나 CRV에 의한 월경 조절 및 통증 완화 제공의 기본 메커니즘은 불분명합니다. CR 연구는 주로 항염증제, 항우울제 및 진통 효과와 같은 활성 화학 성분 및 약리학적 활성의 변화에 중점을 두었습니다 8,9,10,11,12.

TCM의 성분은 복잡하지만 혈액에 흡수되어 특정 혈중 농도에 도달해야 효과가 있다13. TCM의 활성 성분을 스크리닝하는 범위는 혈액 내 성분 결정 전략을 활용하여 좁힐 수 있습니다. 시험관 내에서 화학 성분을 연구할 때 실명을 피할 수 있고, 개별 성분14을 연구할 때 일방성을 피할 수 있다. 혈액 내 CR과 CRV의 조성을 비교함으로써 처리된 CR의 활성 성분 변화를 효과적이고 빠르게 감지할 수 있습니다. 약물 효능은 약물이 신체에 영향을 미치는 과정입니다. 약물의 작용 메커니즘과 관련이있을 수있는 신체의 대사 반응으로 인한 약물 성분의 변화는 대사 학으로 결정할 수 있습니다. 대사노학(Metabonomics)은 중국 전통 의학의 전반적인 효능을 결정하는 것과 일치하는 전체적이고 역동적인 대사 반응을 측정하는 것을 목표로 한다15. 또한, 대사산물은 유전자 발현의 최종 산물이며, 이는 표현형과 가장 밀접한 관련이 있다16. 따라서, 대사노학은 PD의 치료에서 CR과 CRV 사이의 대사 경로의 차이를 탐색하는 데 적합할 수 있다. 액체 크로마토그래피-고분해능 탠덤 질량분석법(LC-MS/MS) 기반 비표적 대사체학은 높은 처리량, 높은 감도 및 고분해능을 특징으로 하며 다양한 소분자 성분을 측정하는 데 사용할 수 있다17,18 . 이 방법은 혈액에 흡수 된 내인성 대사 산물과 외인성 성분을 동시에 결정할 수 있습니다. 대사노학은 TCM19, 약물 독성학 20, 건강 관리 21, 스포츠22, 식품 23 및 기타 분야에 대한 연구에서 널리 사용되었습니다.

본 연구에서는 CRV의 진통 효과 기전을 밝히기 위해 LC-MS/MS 기반 비표적 대사체학을 사용하여 CR 처리된 월경통 모델 쥐와 CRV 처리된 월경통 모델 쥐 사이에서 혈액에 흡수된 외인성 성분과 내인성 대사산물의 차이를 측정했습니다.

Protocol

모든 동물 관련 실험은 충칭 중의학연구소 실험윤리위원회의 승인을 받아 수행되었다. 8-10주령이고 체중이 200g± 20g인 24마리의 암컷 Sprague Dawley 쥐(SD)를 이 실험에 사용했습니다. 1. 추출의 제조 계산CR 또는 CRV 추출물을 6마리의 Sprague-Dawley 쥐(10g/[kg∙day])의 처리군에 3일 동안 투여할 계획입니다. 1g/mL의 CR 또는 CRV 추출물 농도를 사용하십시오(추출물 1…

Representative Results

월경통 모델 실험 분석대조군에서는 30분 이내에 몸부림치는 반응이 없었는데, 이는 이 쥐들에게 통증을 유발하기 위해 옥시토신과 에스트라디올 벤조에이트를 복강 주사하지 않았기 때문입니다. 모델, CR 및 CRV 그룹의 쥐는 옥시토신 주사 후 상당한 몸부림 반응을 보였다. 이러한 결과는 월경통을 유발하는 에스트라디올 벤조에이트와 옥시토신 조합의 효능을 입증합니다. 모델과 …

Discussion

TCM의 다양하고 다양한 특성으로 인해 이러한 허브는 때때로 임상 실습에서 효과가 없으며 이는 TCM의 부적절한 가공 및 달임 때문일 수 있습니다. TCM의 메커니즘은 현대 과학 기술29,30의 사용으로 더욱 분명 해지고 있습니다. 이 연구는 CR과 CRV 모두 PD 모델 쥐에서 치료 효과가 있고 CRV의 치료 효과가 더 중요하다는 것을 보여줍니다. CRV의 작용 메커니즘?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작업은 충칭시 보건 및 가족 계획위원회 한의학 과학 기술 프로젝트 (프로젝트 번호 : ZY201802297), 충칭 자연 과학 재단 일반 프로젝트 (프로젝트 번호 : cstc2019jcyj-msxmX065), 충칭 현대 산악 지역 특성 고효율 농업 기술 시스템 혁신 팀 빌딩 계획 2022 [10] 및 충칭시 보건위원회 중국 재료의 핵심 분야 건설 프로젝트의 지원을 받았습니다. 메디카 프로세싱.

Materials

Acetonitrile  Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA 197164
BECKMAN COULTER Microfuge 20 Beckman Coulter, Inc. MRZ15K047
Estradiol benzoate Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd C10042616
formic acid Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA 177799
LC 30A system Shimadzu, Kyoto, Japan 228-45162-46
Olive oil Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd H25A11P111909
Oxytocin synthetic Zhejiang peptide biology Co., Ltd  2019092001
Rat PGF2α ELISA kit Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd 202101
Rat PGFE2 ELISA kit Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd EDL202006217
SPF Sprague-Dawley rats Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd Certificate number SCXK (Hunan) 2019-0004
Tecan Infinite 200 PRO   Tecan Austria GmbH, Austria 1510002987
Triple TOF 4600 system SCIEX, Framingham, MA, USA BK20641402
water Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA 152720
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Chen, Y., Li, N., Wang, D., Fan, J., Chu, R., Li, S. Analysis of Raw and Processed Cyperi Rhizoma Samples Using Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry in Rats with Primary Dysmenorrhea. J. Vis. Exp. (190), e64691, doi:10.3791/64691 (2022).
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