Técnicas e práticas de cultura celular para evitar a contaminação por fungos e bactérias no laboratório de cultura de células de pesquisa

Resumo

Este protocolo apresenta técnicas e práticas essenciais de cultura de células a serem utilizadas no laboratório de cultura de células de pesquisa para evitar a contaminação por fungos e bactérias. Dentro da categoria de bactérias, será dada ênfase especial à prevenção da contaminação por micoplasmas.

Resumo

A cultura de células é uma habilidade delicada necessária para o crescimento de células humanas, animais e de insetos, ou outros tecidos, em um ambiente controlado. O objetivo do protocolo é enfatizar as técnicas corretas utilizadas em um laboratório de pesquisa para evitar a contaminação por fungos e bactérias. Ênfase especial é dada à prevenção da contaminação por micoplasma, uma grande preocupação na sala de cultura celular devido ao seu pequeno tamanho e resistência à maioria dos antibióticos usados para cultura celular. Essas mesmas técnicas garantem o crescimento contínuo e mantêm as células saudáveis. Para usuários de cultura de células novos e experientes, é importante aderir consistentemente a essas práticas recomendadas para mitigar o risco de contaminação. Uma vez por ano, os laboratórios devem rever as melhores práticas de cultura celular e fazer o acompanhamento com uma discussão ou treinamento adicional, se necessário. Tomar medidas precoces para evitar a contaminação em primeiro lugar economizará tempo e dinheiro, em comparação com a limpeza após a contaminação ocorrer. As melhores práticas universais mantêm as culturas de células saudáveis, reduzindo assim a necessidade de descongelar constantemente novas células, comprar meios de cultura de células caros e reduzir a quantidade de descontaminação e tempo de inatividade da incubadora.

Introdução

A cultura de células tem muitos usos no laboratório de pesquisa. Desde as origens da cultura de células no início do século 20, as linhagens celulares ajudaram a avançar a ciência. As linhagens celulares têm várias vantagens; Várias linhagens celulares podem ajudar os pesquisadores a estudar a biologia celular, produzir baculovírus para estudos posteriores ou produzir grandes quantidades de uma proteína de interesse, para citar alguns¹. Alguns usos adicionais incluem o estudo do crescimento tecidual, ajudando a avançar o desenvolvimento de vacinas, a pesquisa toxicológica, o estudo do papel de genes em organismos saudáveis e modelos

Protocolo

1. Preparações

1. Geral
   1. Use um jaleco limpo designado para ser usado apenas na sala de cultura de células e nenhuma outra parte do laboratório.
      NOTA: O jaleco não precisa ser estéril.
   2. Use luvas novas que não tenham tocado em nenhuma outra superfície. Certifique-se de que as luvas se encaixam bem. Luvas sem nitrilo e sem pó são as melhores.
      NOTA: As luvas não precisam ser estéreis.
   3. Para se preparar para o trabalho, borrife as luvas, as mangas do jaleco e o interior do armário de segurança biológica com 70% de EtOH. Limpe a superfície de trabalho e o painel de vidro com uma toalha de papel sem fiapos.
      OBS: O....

Resultados

Se as técnicas e práticas adequadas de cultura celular descritas neste trabalho não forem seguidas, a contaminação por fungos e bactérias pode ocorrer no laboratório de cultura de células de pesquisa. A Figura 2 mostra os frascos contendo contaminação tanto na suspensão quanto na cultura aderida.

Quando não segue técnicas assépticas, a contaminação por mofo pode ocorrer de 2 a 3 dias depois. Bolas fuzzy redondas flutuando na mídia são perceptíveis nas células de s.......

Discussão

Embora a contaminação seja uma das principais preocupações ao realizar o trabalho de cultura de células, as práticas e técnicas descritas neste manuscrito ajudarão a mitigar os riscos. As etapas críticas incluem o uso de um jaleco limpo, que só é usado na sala de cultura celular, o uso de luvas limpas e sem pó que são pulverizadas com 70% de EtOH com frequência e que são trocadas ao alternar entre linhas celulares, incentivando cada indivíduo a não compartilhar frascos de mídia, limpando o armário cuidadosamente antes e .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
DPBS	Gibco	14-190-144
DMEM F-12 Media	ATCC	30-2006
Frasco de vidro com defletores	Pyrex	09-552-40
Pipetas de Vidro	Fisher	13-678-6B
Auxiliar de Pipeta	Drummond	13-681-15A
Pipeta sorológica	Corning	07-200-573
Frasco T75	Corning	07-202-004
Tripsina	Gibco	25-300-054
*Os itens podem variar porque este vídeo é sobre técnicas

gerais de cultura de células