ज़ेब्राफिश सेल लाइनों के साथ साइटोटॉक्सिसिटी परख
Summary
यह प्रोटोकॉल आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले साइटोटॉक्सिसिटी परख (अलामर ब्लू [एबी], सीएफडीए-एएम, न्यूट्रल रेड और एमटीटी परख) को प्रस्तुत करता है जो 96-वेल प्लेटों में जेब्राफिश भ्रूण (जेडईएम 2 एस) और यकृत (जेडएफएल) सेल लाइनों में साइटोटॉक्सिसिटी के आकलन के लिए अनुकूलित है।
Abstract
इकोटॉक्सिसिटी अध्ययनों में मछली सेल लाइनों का तेजी से उपयोग किया गया है, और साइटोटॉक्सिसिटी परख को मछली तीव्र विषाक्तता की भविष्यवाणी करने के तरीकों के रूप में प्रस्तावित किया गया है। इस प्रकार, यह प्रोटोकॉल 96-वेल प्लेटों में ज़ेबराफिश (डेनियो रेरियो) भ्रूण (जेडईएम 2 एस) और यकृत (जेडएफएल) सेल लाइनों में सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन करने के लिए संशोधित साइटोटॉक्सिसिटी परख प्रस्तुत करता है। मूल्यांकन किए गए साइटोटॉक्सिसिटी समापन बिंदु माइटोकॉन्ड्रियल अखंडता (अलामार ब्लू [एबी] और एमटीटी परख), एस्टेरेज गतिविधि (सीएफडीए-एएम परख) के माध्यम से झिल्ली अखंडता, और लाइसोसोमल झिल्ली अखंडता (तटस्थ लाल [एनआर] परख) हैं। 96-वेल प्लेट में परीक्षण पदार्थों के संपर्क में आने के बाद, साइटोटॉक्सिसिटी परख का प्रदर्शन किया जाता है; यहां, एबी और सीएफडीए-एएम एक साथ किए जाते हैं, इसके बाद एक ही प्लेट पर एनआर होता है, जबकि एमटीटी परख एक अलग प्लेट पर किया जाता है। इन परखों के लिए रीडआउट एबी और सीएफडीए-एएम के लिए प्रतिदीप्ति द्वारा लिया जाता है, और एमटीटी और एनआर के लिए अवशोषण किया जाता है। इन मछली सेल लाइनों के साथ किए गए साइटोटॉक्सिसिटी परख का उपयोग मछली पर रासायनिक पदार्थों की तीव्र विषाक्तता का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है।
Introduction
रासायनिक पदार्थों को मानव स्वास्थ्य और पर्यावरण के लिए उनकी सुरक्षा के बारे में परीक्षण करने की आवश्यकता है। नियामक एजेंसियों और / या कानूनों (जैसे, रीच, ओईसीडी, यूएस ईपीए) 1,2 द्वारा जीवित जीवों पर प्रभाव की भविष्यवाणी करने के लिए सुरक्षा आकलन में आणविक और सेलुलर बायोमाकर्स पर तेजी से विचार किया गया है, क्योंकि वे विवो प्रतिकूल परिणाम (जैसे, अंतःस्रावी व्यवधान, प्रतिरक्षात्मक प्रतिक्रिया, तीव्र विषाक्तता, फोटोटॉक्सिसिटी) 3,4,5,6,7 से पहले हो सकते हैं। . इस संदर्भ में, साइटोटॉक्सिसिटी को मछली तीव्र विषाक्तता 5,8 की भविष्यवाणी करने के लिए एक माप के रूप में लिया गया है; हालांकि, इकोटॉक्सिसिटी अध्ययनों में इसके कई अन्य अनुप्रयोग हो सकते हैं, जैसे कि मछली पर प्रभावों के अपने सबसे विविध सेट का अध्ययन करने के लिए रासायनिक पदार्थों की उप-साइटोटोक्सिक सांद्रता को परिभाषित करना (जैसे, अंतःस्रावी-विघटनकारी प्रभाव)।
सेल कल्चर सिस्टम (इन विट्रो सिस्टम) में, रासायनिक पदार्थों की साइटोटॉक्सिसिटी को समापन बिंदुओं के प्रकारों में भिन्न तरीकों से निर्धारित किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, एक साइटोटॉक्सिसिटी विधि कोशिका मृत्यु प्रक्रिया के दौरान देखी गई विशिष्ट आकृति विज्ञान से संबंधित समापन बिंदु पर आधारित हो सकती है, जबकि दूसरा कोशिका मृत्यु, व्यवहार्यता और कार्यक्षमता, आकृति विज्ञान, ऊर्जा चयापचय और कोशिका लगाव और प्रसार के माप द्वारा साइटोटॉक्सिसिटी निर्धारित कर सकता है। रासायनिक पदार्थ विभिन्न तंत्रों के माध्यम से सेल व्यवहार्यता को प्रभावित कर सकते हैं, इस प्रकाररासायनिक प्रभावों की भविष्यवाणी करने के लिए विभिन्न सेल व्यवहार्यता समापन बिंदुओं को कवर करने वाला साइटोटॉक्सिसिटी मूल्यांकन आवश्यक है।
एमटीटी और अलामार ब्लू (एबी) परख हैं जो सेल चयापचय गतिविधि के आधार पर सेल व्यवहार्यता पर प्रभाव निर्धारित करते हैं। एमटीटी परख माइटोकॉन्ड्रियल एंजाइम सक्सिनेट डिहाइड्रोजनेज10 की गतिविधि का मूल्यांकन करता है। पीले रंग के 3-[4,5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2इल]-2,5-डिफेनिलटेट्राज़ोलियम ब्रोमाइड (एमटीटी) की फॉर्माज़ान ब्लू में कमी केवल व्यवहार्य कोशिकाओं में होती है, और इसका ऑप्टिकल घनत्व व्यवहार्य कोशिकाओं की संख्या10 के सीधे आनुपातिक होता है। एबी परख एक संवेदनशील ऑक्सीकरण-कमी संकेतक है, जो माइटोकॉन्ड्रियल एंजाइमों द्वारा मध्यस्थ है जो जीवित कोशिकाओं द्वारा रेसाज़ुरिन को रेसोरुफिन में कम करने पर रंग बदलताहै। हालांकि, साइटोसोलिक और माइक्रोसोमल एंजाइम भी एबी और एमटीटी12 की कमी में योगदान करते हैं। इन एंजाइमों में कई रिडक्टेस शामिल हो सकते हैं, जैसे कि अल्कोहल और एल्डिहाइड ऑक्सीडोरडक्टेस, एनएडी (पी) एच: क्विनोन ऑक्सीडोरडक्टेस, फ्लेविन रिडक्टेस, एनएडीएच डिहाइड्रोजनेज और साइटोक्रोम11।
न्यूट्रल रेड (एनआर) परख एक सेल व्यवहार्यता परख है जो व्यवहार्य कोशिकाओं के लाइसोसोम में इस डाई को शामिल करने पर आधारितहै। एनआर का उत्थान पीएच ग्रेडिएंट बनाए रखने के लिए कोशिकाओं की क्षमता पर निर्भर करता है। लाइसोसोम के अंदर प्रोटॉन ढाल साइटोप्लाज्म की तुलना में कम पीएच बनाए रखता है। सामान्य शारीरिक पीएच पर, एनआर लगभग शून्य का शुद्ध चार्ज प्रस्तुत करता है, जो इसे कोशिका झिल्ली में प्रवेश करने में सक्षम बनाता है। इस प्रकार, डाई चार्ज हो जाती है और लाइसोसोम के अंदर बनी रहती है। नतीजतन, बनाए गए एनआर की मात्रा जितनी अधिक होगी, व्यवहार्य कोशिकाओं की संख्याउतनी ही अधिक होगी। रासायनिक पदार्थ जो कोशिका की सतह या लाइसोसोमल झिल्ली को नुकसान पहुंचाते हैं, इस डाई के उत्थान को बाधित करते हैं।
सीएफडीए-एएम परख एक फ्लोरोमेट्रिक सेल व्यवहार्यता परख है जो 5-कार्बोक्सीफ्लोरेसिन डायसेटेट एसिटॉक्सीमिथाइल एस्टर (सीएफडीए-एएम) 15 के प्रतिधारण पर आधारित है। 5-सीएफडीए-एएम, एक एस्टरेज़ सब्सट्रेट, कार्बोक्सीफ्लोरेसिन में परिवर्तित हो जाता है, एक फ्लोरोसेंट पदार्थ जो जीवित कोशिकाओं के झिल्ली द्वारा ध्रुवीय और गैर-पारगम्य है15; इस प्रकार, यह एक बरकरार कोशिका झिल्ली के आंतरिक पक्ष में बरकरार रखा जाता है, जो व्यवहार्य कोशिकाओं का संकेत देता है।
हाल ही में, तीन साइटोटॉक्सिसिटी परख (सीएफडीए-एएम, एनआर, और एबी परख) को एक मान्य आईएसओ (मानकीकरण के लिए अंतर्राष्ट्रीय संगठन) दिशानिर्देश (आईएसओ 21115: 2019)16 और ओईसीडी (आर्थिक सहयोग और विकास संगठन) परीक्षण विधि (ओईसीडी टीजी 249) में संयुक्त किया गया था ताकि 24-वेल प्लेटों में आरटीगिल-डब्ल्यू 1 सेल लाइन (रेनबो ट्राउट [ऑन्कोरिन्चस मायकिस] गिल से स्थायी सेल लाइन) का उपयोग करके मछली तीव्र विषाक्तता का मूल्यांकनकिया जा सके। . यद्यपि मछली तीव्र विषाक्तता की भविष्यवाणी करने के लिए एक मौजूदा सेल-आधारित विधि है, अन्य मछली प्रजातियों के साथ समान तरीकों को विकसित करने और विधि के थ्रूपुट को बढ़ाने में प्रयास किए गए हैं। कुछ उदाहरणों में विशिष्ट विषाक्ततामार्गों 18,19 के लिए रिपोर्टर जीन के साथ स्थानांतरित जेडएफएल सेललाइनों का विकास, आरटीगिल-डब्ल्यू 1 सेल लाइन20 में फोटोटॉक्सिसिटी परीक्षण, और जेडएफएल और जेडएफ 4 सेल लाइनों (1 दिन पुराने भ्रूण से प्राप्त ज़ेब्राफिश फाइब्रोब्लास्टिक) का उपयोग शामिल है।
डेनियो रेरियो (ज़ेबराफिश) जलीय विषाक्तता अध्ययन में उपयोग की जाने वाली मुख्य मछली प्रजातियों में से एक है; इस प्रकार, मछली विषाक्तता परीक्षण के लिए ज़ेब्राफिश सेल लाइनों के साथ सेल-आधारित तरीके बेहद उपयोगी हो सकते हैं। जेडएफएल सेल लाइन एक ज़ेब्राफिश उपकला हेपेटोसाइट सेल लाइन है जो यकृत पैरेन्काइमल कोशिकाओं की मुख्य विशेषताओं को प्रस्तुत करती है और ज़ेनोबायोटिक्स 7,22,23,24,25 को चयापचय कर सकती है। इस बीच, जेडईएम 2 एस सेल लाइन ब्लास्टुला चरण से प्राप्त एक भ्रूण जेब्राफिश फाइब्रोब्लास्टिक सेल लाइन है जिसका उपयोग मछली26,27 पर विकासात्मक प्रभावों की जांच के लिए किया जा सकता है। इस प्रकार, यह प्रोटोकॉल चार साइटोटॉक्सिसिटी परख (एमटीटी, एबी, एनआर, और सीएफडीए-एएम परख) का वर्णन करता है, जिसमें 96-वेल प्लेटों में जेडएफएल और जेडईएम 2 एस सेल लाइनों के साथ किए जाने वाले संशोधन शामिल हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
साइटोटॉक्सिसिटी परख का व्यापक रूप से इन विट्रो विषाक्तता मूल्यांकन के लिए उपयोग किया जाता है, और यह प्रोटोकॉल लेख जेब्राफिश सेल लाइनों (यानी, 96-वेल प्लेट के लिए सेल घनत्व, एमटीटी परख में इनक्यूबेशन ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
मार्सियो लोरेनसिनी की याद में, इस काम के सह-लेखक, सौंदर्य प्रसाधन के क्षेत्र में एक उत्कृष्ट शोधकर्ता और ब्राजील में कॉस्मेटिक अनुसंधान को बढ़ावा देने के लिए समर्पित। लेखक उपकरणों की उपलब्धता के लिए फिजियोलॉजी विभाग (यूएफपीआर) में बहु-उपयोगकर्ता प्रयोगशाला के लिए और उच्च शिक्षा कर्मियों के सुधार के लिए समन्वय (सीएपीएस, ब्राजील) (वित्त कोड 001) और ग्रुपो बोटिकारियो के वित्तीय समर्थन के लिए आभारी हैं।
Materials
| 5-CFDA, AM (5-Carboxyfluorescein Diacetate, Acetoxymethyl Ester) | Invitrogen | C1345 | |
| Cell culture plate, 96 well plate | Sarstedt | 83.3924 | Surface: Standard, flat base |
| DMEM | Gibco | 12800-017 | Powder, high glucose, pyruvate |
| Ham's F-12 Nutrient Mix, powder | Gibco | 21700026 | Powder |
| HEPES (1 M) | Gibco | 15630080 | |
| Leibovitz's L-15 Medium | Gibco | 41300021 | Powder |
| Neutral red | Sigma-Aldrich | N4638 | Powder, BioReagent, suitable for cell culture |
| Orbital shaker | Warmnest | KLD-350-BI | 22 mm rotation diameter |
| Dulbeccos PBS (10X) with calcium and magnesium | Invitrogen | 14080055 | |
| Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL) | Gibco | 15140122 | |
| Resazurin sodium salt | Sigma-Aldrich | R7017 | Powder, BioReagent, suitable for cell culture |
| RPMI 1640 Medium | Gibco | 31800-014 | Powder |
| SFB – Fetal Bovine Serum, qualified, USDA-approved regions | Gibco | 12657-029 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | Powder, bioreagent for molecular biology |
| Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide 98% | Sigma-Aldrich | M2128 | |
| Trypan blue stain (0.4%) | Gibco | 15250-061 | |
| Trypsin-EDTA (0.5%), no phenol red | Gibco | 15400054 | |
| ZEM2S cell line | ATCC | CRL-2147 | This cell line was kindly donated by Professor Dr. Michael J. Carvan (University of Wisconsin, Milwaukee, USA) |
| ZFL cell line | BCRJ | 256 |
Referências
- ECHA. Non-Animal Approaches-Current Status of Regulatory Applicability Under the REACH, CLP and Biocidal Products Regulations. ECHA. , (2017).
- Alternative Methods Accepted by US Agencies. National Toxicology Program, and US Department of Health and Human Services Available from: https://ntp.niehs.nih.gov/whatwestudy/niceatm/accept-methods/index.html (2022)
- Schirmer, K. Proposal to improve vertebrate cell cultures to establish them as substitutes for the regulatory testing of chemicals and effluents using fish. Toxicology. 224 (3), 163-183 (2006).
- Scholz, S., et al. Alternatives to in vivo tests to detect endocrine disrupting chemicals (EDCs) in fish and amphibians-screening for estrogen, androgen and thyroid hormone disruption. Critical Reviews in Toxicology. 43 (1), 45-72 (2013).
- Tanneberger, K., et al. Predicting fish acute toxicity using a fish gill cell line-based toxicity assay. Environmental Science & Technology. 47 (2), 1110-1119 (2013).
- Roesler, R., Lorencini, M., Pastore, G. Brazilian cerrado antioxidant sources: cytotoxicity and phototoxicity in vitro. Food Science and Technology. 30, 814-821 (2010).
- Ruyra, A., et al. Zebrafish liver (ZFL) cells are able to mount an anti-viral response after stimulation with Poly (I:C). Comparative Biochemistry and Physiology. Part B, Biochemistry & Molecular Biology. 182, 55-63 (2015).
- Natsch, A., Laue, H., Haupt, T., von Niederhäusen, V., Sanders, G. Accurate prediction of acute fish toxicity of fragrance chemicals with the RTgill-W1 cell assay. Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (3), 931-941 (2018).
- Freshney, R. I. Cytotoxicity. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique. , (2005).
- Mosmann, T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).
- O’Brien, J., Wilson, I., Orton, T., Pognan, F. Investigation of the Alamar Blue (resazurin) fluorescent dye for the assessment of mammalian cell cytotoxicity. European Journal of Biochemistry. 267 (17), 5421-5426 (2000).
- Gonzalez, R. J., Tarloff, J. B. Evaluation of hepatic subcellular fractions for Alamar blue and MTT reductase activity. Toxicology In Vitro. 15 (3), 257-259 (2001).
- Borenfreund, E., Puerner, J. A. Toxicity determined in vitro by morphological alterations and neutral red absorption. Toxicology Letters. 24 (2-3), 119-124 (1985).
- Repetto, G., del Peso, A., Zurita, J. L. Neutral red uptake assay for the estimation of cell viability/cytotoxicity. Nature Protocols. 3 (7), 1125-1131 (2008).
- Kamiloglu, S., Sari, G., Ozdal, T., Capanoglue, E. Guidelines for cell viability assays. Food Frontiers. 1 (3), 332-349 (2020).
- Water Quality-Determination of Acute Toxicity of Water Samples and Chemicals to a Fish Gill Cell Line (RTgill-W1) (ISO 21115:2019). International Organization for Standardization Available from: https://www.iso.org/standar/69933.html (2019)
- Organisation for Economic Co-operation and Development. . Test Guideline No. 249: Fish Cell Line Acute Toxicity-The RTgill-W1 Cell Line Assay. OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2. Effects on Biotic Systems. , (2021).
- Lungu-Mitea, S., Lundqvist, J. Potentials and pitfalls of transient in vitro reporter bioassays: interference by vector geometry and cytotoxicity in recombinant zebrafish cell lines. Archives of Toxicology. 94 (8), 2769-2784 (2020).
- Lungu-Mitea, S., Han, Y., Lundqvist, J. Development, scrutiny, and modulation of transient reporter gene assays of the xenobiotic metabolism pathway in zebrafish hepatocytes. Cell Biology and Toxicology. , 1-23 (2021).
- Schirmer, K., Chan, A. G., Greenberg, B. M., Dixon, D. G., Bols, N. C. Methodology for demonstrating and measuring the photocytotoxicity of fluoranthene to fish cells in culture. Toxicology In Vitro. 11 (1-2), 107-119 (1997).
- Lungu-Mitea, S., et al. Modeling bioavailable concentrations in zebrafish cell lines and embryos increases the correlation of toxicity potencies across test systems. Environmental Science & Technology. 55 (1), 447-457 (2021).
- Cavalcante, D. G. S. M., et al. Cytotoxic, biochemical and genotoxic effects of biodiesel produced by different routes on ZFL cell line. Toxicology In Vitro. 28 (6), 1117-1125 (2014).
- Meng, Q., Yeung, K., Chan, K. M. Toxic effects of octocrylene on zebrafish larvae and liver cell line (ZFL). Aquatic Toxicology. 236, 105843 (2021).
- Kwok, M. L., Chan, K. M. Oxidative stress and apoptotic effects of copper and cadmium in the zebrafish liver cell line ZFL. Toxicology Reports. 7, 822-835 (2020).
- Yang, J., Chan, K. M. Evaluation of the toxic effects of brominated compounds (BDE-47, 99, 209, TBBPA) and bisphenol A (BPA) using a zebrafish liver cell line, ZFL. Aquatic Toxicology. 159, 138-147 (2015).
- Bradford, C. S., Sun, L., Collodi, P., Barnes, D. W. Cell cultures from zebrafish embryos and adult tissues. Journal of Tissue Culture Methods. 16 (2), 99-107 (1994).
- He, S., et al. Genetic and transcriptome characterization of model zebrafish cell lines. Zebrafish. 3 (4), 441-453 (2006).
- Mansoury, M., Hamed, M., Karmustaji, R., Al Hannan, F., Safrany, S. T. The edge effect: A global problem. The trouble with culturing cells in 96-well plates. Biochemistry and Biophysics Reports. 26, 100987 (2021).
- Funk, D., Schrenk, H. -. H., Frei, E. Serum albumin leads to false-positive results in the XTT and the MTT assay. BioTechniques. 43 (2), 178 (2007).
- Dayeh, V. R., Bols, N. C., Tanneberger, K., Schirmer, K., Lee, L. E. J. The use of fish-derived cell lines for investigation of environmental contaminants: An update following OECD’s fish toxicity testing framework no. 171. Current Protocols in Toxicology. 1, (2013).
- Stepanenko, A. A., Dmitrenko, V. V. Pitfalls of the MTT assay: Direct and off-target effects of inhibitors can result in over/underestimation of cell viability. Gene. 574 (2), 193-203 (2015).
- Ulukaya, E., Colakogullari, M., Wood, E. J. Interference by anti-cancer chemotherapeutic agents in the MTT-tumor chemosensitivity assay. Chemotherapy. 50 (1), 43-50 (2004).
- Sebaugh, J. L. Guidelines for accurate EC50/IC50 estimation. Pharmaceutical Statistics. 10 (2), 128-134 (2011).
- Weimer, M., et al. The impact of data transformations on concentration-response modeling. Toxicology Letters. 213 (2), 292-298 (2012).
- Green, J. W., Holbech, T. A., Henrik, Chapter 4: Analysis of Continuous Data (Regression). Statistical Analysis of Ecotoxicity Studies. , (2018).
- Proença, S., et al. Effective exposure of chemicals in in vitro cell systems: A review of chemical distribution models. Toxicology In Vitro. 73, 105133 (2021).
- Guidony, N. S., et al. ABC proteins activity and cytotoxicity in zebrafish hepatocytes exposed to triclosan. Environmental Pollution. 271, 116368 (2021).
- da Silva, N. D. G., et al. Interference of goethite in the effects of glyphosate and Roundup® on ZFL cell line. Toxicology In Vitro. 65, 104755 (2020).
- Yang, Y., et al. Temperature is a key factor influencing the invasion and proliferation of Toxoplasma gondii in fish cells. Experimental Parasitology. 217, 107966 (2020).
- Lopes, F. M., Sandrini, J. Z., Souza, M. M. Toxicity induced by glyphosate and glyphosate-based herbicides in the zebrafish hepatocyte cell line (ZF-L). Ecotoxicology and Environmental Safety. 162, 201-207 (2018).
- Lachner, D., Oliveira, L. F., Martinez, C. B. R. Effects of the water soluble fraction of gasoline on ZFL cell line: Cytotoxicity, genotoxicity and oxidative stress. Toxicology In Vitro. 30, 225-230 (2015).
- Morozesk, M., et al. Effects of multiwalled carbon nanotubes co-exposure with cadmium on zebrafish cell line: Metal uptake and accumulation, oxidative stress, genotoxicity and cell cycle. Ecotoxicology and Environmental Safety. 202, 110892 (2020).
- Dognani, G., et al. Nanofibrous membranes for low-concentration Cr VI adsorption: kinetic, thermodynamic and the influence on ZFL cells viability. Materials Research. , 24 (2021).
- ZEM2S (ATCC®CRL-2147™). American Type Culture Collection Available from: https://www.atcc.org/products/crl-2147 (2023)
- Chen, Y., et al. Acute toxicity of the cationic surfactant C12-benzalkonium in different bioassays: how test design affects bioavailability and effect concentrations. Environmental Toxicology and Chemistry. 33 (3), 606-615 (2014).
- Pomponio, G., et al. In vitro kinetics of amiodarone and its major metabolite in two human liver cell models after acute and repeated treatments. Toxicology In Vitro. 30, 36-51 (2015).
- Mori, M., Wakabayashi, M. Cytotoxicity evaluation of chemicals using cultured fish cells. Water Science and Technology. 42 (7-8), 277-282 (2000).
- Caminada, D., Escher, C., Fent, K. Cytotoxicity of pharmaceuticals found in aquatic systems: comparison of PLHC-1 and RTG-2 fish cell lines. Aquatic Toxicology. 79 (2), 114-123 (2006).
- Giltrap, M., et al. In vitro screening of organotin compounds and sediment extracts for cytotoxicity to fish cells. Environmental Toxicology and Chemistry. 30 (1), 154-161 (2011).
- Hollert, H., Duerr, M., Erdinger, L., Braunbeck, T. Cytotoxicity of settling particulate matter and sediments of the Neckar River (Germany) during a winter flood. Environmental Toxicology and Chemistry. 19 (3), 528-534 (2000).
- Pannetier, P., et al. Toxicity assessment of pollutants sorbed on environmental sample microplastics collected on beaches: Part I-adverse effects on fish cell line. Environmental Pollution. 248, 1088-1097 (2019).
- Ternjej, I., Srček, V. G., Mihaljević, Z., Kopjar, N. Cytotoxic and genotoxic effects of water and sediment samples from gypsum mining area in channel catfish ovary (CCO) cells. Ecotoxicology and Environmental Safety. 98, 119-127 (2013).
- Hamid, R., Rotshteyn, Y., Rabadi, L., Parikh, R., Bullock, P. Comparison of alamar blue and MTT assays for high throughput screening. Toxicology In Vitro. 18 (5), 703-710 (2004).
- Vistica, D. T., et al. Tetrazolium-based assays for cellular viability: a critical examination of selected parameters affecting formazan production. Pesquisa do Câncer. 51 (10), 2515-2520 (1991).
- Knauer, K., Lampert, C., Gonzalez-Valero, J. Comparison of in vitro and in vivo acute fish toxicity in relation to toxicant mode of action. Chemosphere. 68 (8), 1435-1441 (2007).
- Stadnicka-Michalak, J., Tanneberger, K., Schirmer, K., Ashauer, R. Measured and modeled toxicokinetics in cultured fish cells and application to in vitro-in vivo toxicity extrapolation. PLoS One. 9 (3), 92303 (2014).
