Medindo o diâmetro do vaso retiniano a partir de imagens de angiografia fluorescente de camundongo

Resumo

A vasculatura da retina de camundongos é particularmente interessante na compreensão dos mecanismos de formação do padrão vascular. Este protocolo mede automaticamente o diâmetro dos vasos retinianos de camundongos a partir de imagens de fundo de angiografia fluorescente a uma distância fixa do disco óptico.

Resumo

É importante estudar o desenvolvimento da vasculatura retiniana em retinopatias nas quais o crescimento anormal dos vasos pode levar à perda da visão. Mutações no gene do fator de transcrição associado à microftalmia (Mitf) mostram hipopigmentação, microftalmia, degeneração da retina e, em alguns casos, cegueira. A imagem in vivo da retina do camundongo por meios não invasivos é vital para a pesquisa ocular. No entanto, devido ao seu pequeno tamanho, a imagem do fundo do olho do camundongo é difícil e pode exigir ferramentas especializadas, manutenção e treinamento. Neste estudo, desenvolvemos um software exclusivo que permite a análise do diâmetro dos vasos retinianos em camundongos com um programa automatizado escrito em MATLAB. As fotografias de fundo de olho foram obtidas com um sistema comercial de câmera de fundo de olho após uma injeção intraperitoneal de uma solução de sal de fluoresceína. As imagens foram alteradas para aumentar o contraste, e o programa MATLAB permitiu extrair o diâmetro vascular médio automaticamente a uma distância pré-definida do disco óptico. As alterações vasculares foram examinadas em camundongos do tipo selvagem e camundongos com várias mutações no gene Mtf , analisando o diâmetro do vaso retiniano. O programa MATLAB personalizado desenvolvido aqui é prático, fácil de usar e permite que os pesquisadores analisem o diâmetro médio e o diâmetro total médio, bem como o número de vasos da vasculatura da retina do camundongo, de forma conveniente e confiável.

Introdução

Possivelmente, o leito vascular mais pesquisado no corpo é a vasculatura retiniana. Com sofisticação técnica cada vez melhor, a vasculatura retiniana é facilmente fotografada em pacientes vivos e usada em muitos campos de pesquisa¹. Além disso, a vasculatura da retina do camundongo durante o desenvolvimento provou ser um sistema modelo muito eficaz para pesquisas sobre a biologia fundamental do crescimento vascular. O objetivo principal da vasculatura retiniana é fornecer suporte metabólico à porção interna da retina por meio de uma malha capilar laminar que permeia o tecido neural². No entanto, a condição da retina e, c....

Protocolo

Todos os experimentos foram aprovados pela Autoridade Alimentar e Veterinária da Islândia (licença MAST nº 2108002). Todos os estudos em animais foram conduzidos de acordo com a Declaração da Associação para Pesquisa em Visão e Oftalmologia (ARVO) para o Uso de Animais em Pesquisa Oftálmica e Visual. Camundongos C57BL/6J machos e fêmeas e Mitf^mi-vga9/+ foram utilizados neste estudo. Camundongos C57BL/6J (n = 7) foram usados como controle. Os tipos selvagens foram obtidos comercialmente (ver Tabela de Materiais), mas todos os camundongos mutantes (n = 7) foram criados e criados em instalações para animais no Centro Biomédico da Univ....

Resultados

A Figura 1 mostra o processo utilizado para analisar a vasculatura retiniana, que é aplicado às imagens FFA de camundongos de todos os camundongos testados. Um raio duas vezes maior que o disco óptico é usado para medir a intensidade dos pixels em uma direção circular no sentido horário a partir do centro do disco óptico. Ele marca pixels com um ponto inicial ou final quando se depara com pontos acima e abaixo de um limite especificado pelo usuário, respectivamente. Isso é repetido 30 vezes,.......

Discussão

O presente artigo é o primeiro a apresentar um método para analisar o diâmetro dos vasos retinianos e a vasculatura retiniana a partir de imagens de AF de camundongos. Como apenas a imagem do fundo de olho foi utilizada para capturar imagens da vasculatura retiniana, o método apresenta várias desvantagens, uma das quais é que só se pode inferir alterações nas camadas superficiais da vasculatura retiniana nos camundongos examinados neste estudo; Quaisquer diferenças nas camadas mais profundas ainda são desconhecidas.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
1% Tropicamida (Mydriacyl)	Alcon Inc Laboratories		Agente midriático
2% Methocel	OmniVision Eye Care		Gel de hidroxipropril metilcelulose
C57BL / 6J	Jackson Laboratory	000664	Camundongos do tipo selvagem
Excel para Microsoft 365	Microsoft Inc		Pacote de software
Sal de sódio fluoresceína	Angiografia fluorescente Sigma-Aldrich	28803-100G
Matlab 8.0	The MathWorks, Inc.		Pacote de software
Micron IV câmera de fundo de roedor	Phoenix-Micron	40-2200	Fotografia de fundo
fenilefrina 10% w / v	Bausch & Lomb		Mydriatic
agent Phosphate Buffered Saline - 100 comprimidos	Gibco	18912-014	Diluição
Sigmaplot 13	Jandel Scientific Software		Pacote de software
S-Cetamina, 25 mg/mL	Pfizer Inc.	PAA104470	Anestesia IP

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