ラットモデルにおける尿道狭窄誘導とそれに続く頬粘膜移植尿道形成術
Summary
本プロトコルでは、Wistarラットで尿道狭窄誘導が開発され、続いて頬粘膜移植片による尿道再建が行われました。逆行性尿道造影とレーザードップラー評価を実施し、尿道再建(狭窄形成後)と移植片の留置を検証しました。
Abstract
尿道再建術は、泌尿器科医にとって重要な専門分野です。頬粘膜は、尿道移植が必要な場合に最適な選択肢と考えられていますが、場合によっては、不適切な場合や、特定の狭窄を修復するために最適化する必要があります。したがって、革新的な手順を開発し、実験モデルでそれらの推定上の成功を評価することは、臨床ニーズに適合するために重要です。この目標により、この研究では、Wistarラットの電気焼灼によって尿道狭窄が誘発されたプロトコルについて説明します。尿道再建は、1週間後に下唇から採取した頬粘膜移植片で行われ、腹側オンレー方式で配置されました。逆行性尿道造影では、尿道形成術後の尿道径が、狭窄導入後のそれぞれの値と比較して有意に改善したことが示されました。さらに、グラフトの配置は、レーザードップラーを使用した血液灌流分析によって評価されました。予想通り、濃い青色の領域は非血管新生頬粘膜移植片に対応しました。この手順は、尿道損傷と組織調節の正常な病態生理学的プロセスをうまくシミュレートし、頬粘膜移植片を使用して尿道再建を再現可能な方法でシミュレートし、組織工学または尿道移植に基づく将来の研究の基礎として役立ちます。
Introduction
尿道再建は、狭窄、外傷、または先天性欠損症の設定における尿道損傷の管理における泌尿器科外科医にとって大きな課題です1。治癒目的で、尿道形成術はほとんどの患者に選択される治療法であり、長い(>2 cm)および前部尿道欠損症には何らかの形の置換尿道形成術が必要です2。生殖器または生殖器外領域、膀胱壁粘膜、または広範囲の頬粘膜の全層または分割層の皮膚移植片など、多くの組織が尿道代替として使用されています2。頬粘膜移植片には、湿った無毛の環境から得られる、収穫しやすい、感染に強い、上皮が厚い、偽憩室形成の可能性が低い、薄層であるなど、いくつかの利点があり、早期の吸収と接種が可能です3。フラップとは対照的に、移植片には血液供給がなく、レシピエントの血管床に依存して生存します4。
移植片または皮弁の動物モデルは、外科的技術の開発または改良、組織生理学、根本的なメカニズム、および失敗の原因の研究と理解、および革新的な治療戦略の評価に広く使用されています5,6。大型の動物は技術的な実行を容易にしますが、ネズミやマウスなどのげっ歯類は、取り扱いと維持が容易で、病気に耐性があり、費用対効果が高く、重要なことに、革新的な治療法をテストするために不可欠な分子メカニズムを調査するツールを備えています5,6。皮弁と移植片のいくつかのモデルが、異なる組織、すなわち皮膚、骨、筋肉6、血管5、さらには固形臓器7を用いてラットで報告されている。しかし、尿道再建や組織工学のための移植片のマウスモデルに関する研究はほとんどありません。
それにもかかわらず、トランスレーショナルサイエンスの進歩は、病気を模倣する動物モデルに依存しています。これまでのところ、尿道再建は狭窄の直後に行われるため、局所的な病態生理学的環境は対処されていません。本研究では、頬粘膜移植片を用いた尿道再建を局所的な病態生理環境下で行うことを目的とする。この目的で、尿道狭窄は再建の1週間前に誘発されました。ラットで行われたこの実験モデルは、革新的な治療法をテストし、将来的にそれらの分子メカニズムと臨床的利点を調査することを可能にします。
Protocol
Representative Results
Discussion
頬粘膜移植による尿道形成術は、尿道再建の主要な基礎です。しかし、合併症や罹患率を減らすために、すでに説明されているものを最適化し、組織工学材料や生物学的移植片などの新しい手順を確立するための革新的な手順を開発する必要があります。前臨床モデルを確立し、手術技術を定義するために、いくつかの手順が発表されています。Souzaら1は、12匹のニュージーランドウサギを?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Centro Hospitalar Universitário Lisboa Norteの放射線科長であるJoão Leitão氏と、Centro Hospitalar Universitário Lisboa Norteの放射線科技師であるCatia Fernandes氏に、尿道造影の実現に協力していただいたことに感謝します。
Materials
| Atipamezole | OrionPharma | ANTISEDAN (atipamezole) is indicated for the reversal of the sedative and analgesic effects. | |
| Buprenorphine | RichterPharma | Buprenorphine is a derivative of the opioid alkaloid thebaine that is a more potent (25-40 times) and longer lasting analgesic than morphine. | |
| Carl Zeiss Opmi-1 FC Surgical Stereo Microscope | Carl Zeiss Microscopy, Germany | OPMI 1 FC from ZEISS symbolizes quality, precision and reliability. The manual system is easy to use and delivers high fidelity images with the legendary ZEISS optics. | |
| Carprofen | Zoetis | Carprofen is a non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAID) of the propionic acid class. | |
| Catheter 22 G. x 1'' | B Braun | Introcan Safety | IV Catheter of fluorinated ethylene propylene (FEP) with firmer construction for arterial access. |
| Enrofloxacin | Bayer | Enrofloxacin is a fluoroquinolone antibiotic. | |
| Fentanyl | Braun | 3644960 | Fentanyl is a powerful synthetic opioid analgesic. |
| Flumazenil | Fresenius Kabi | Benzodiazepine antagonist is used for the complete or partial reversal of the sedative effects caused by benzodiazepines. | |
| High temperature cautery | Fiab | F7244 | Disposable cautery, sterile, high temperature (1200 °C), 28 mm fine tip. |
| Instillagel gel | Farco-pharma | Cellulose-based lubricant with local anaesthetic and disinfecting properties. | |
| Iopromide | Bayer | Non-ionic injectable contrast medium, with iodine. | |
| Laser Doppler imaging system (perfusion imager moorLDI2-HIR and dedicated software) | MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, Axminster, UK | 5710 | The angiogenesis models uses Laser Doppler imaging to assess blood perfusion in the hind limbs, one of which is ligated surgically. Dedicated measurement and comparison software allows the definition of regions of interest for blood flow assessment on the ischaemic versus non-ischaemic limb to establish a "reperfusion ratio" which can be assessed as often as needed and over a number of days on the same subject. |
| Lubrithal Eye Gel | Dechra | Eye gel used in animals for prevention of dry eyes during anaesthesia. Lubricating and moisturising action on cornea and conjunctiva. | |
| Male Wistar Han IGS (Crl:WI(Han) rats | Charles River Laboratories, Spain | Twelve to fourteen-week-old | |
| Metedomidin | Virbac | 037/01/07RFVPT | Medetomidine is a synthetic drug used as surgical anesthetic. |
| Midazolam | Labesfal | Benzodiazepine medication is used for anesthesia and procedural sedation. | |
| Monoplan Angiography System | Philips Medical Systems | Azurion 7 M20 | A stationary diagnostic fluoroscopic x-ray system specifically designed to optimize the capability of users to visually and quantitatively evaluate the anatomy and function of blood vessels of the heart, brain and other organs, as well as the lymphatic system. |
| Mosquito forceps | Henry Schein | 102-4346 | Hartman-Mosquito Hemostatic Forcep Curved 3-1/2" Stainless Steel |
| Needle Holder | Henry Schein | 100-2570 | Needle holder Mayo-Hegar, stainless steel, 14 cm |
| Ophtalmic Needle Holder | Asico | AE-6143 | Needle holder barranquer most delicate without lock |
| Pentobarbital Sodium | Ecuphar | Pentobarbital Sodium is the sodium salt of pentobarbital used for euthanasia. | |
| Pointed Forceps | Aesculap | BD335R | Microforceps, 0.30 mm tip |
| Polysorb 6.0 | Medtronic (Covidien) | UL-101 | Coated Synthetic Absorbable Suture aimed to reduce the inflammatory reaction in tissues, followed by gradual encapsulation of the suture by fibrous connective tissue. |
| Providone-Iodine | Mylan | Povidone-iodine 10% is an antiseptic drug, used as a disinfectant before and after surgery. | |
| Scalpel Blade nº11 | B Braun | BB511 | Carbon steel, sterile |
| Spring Scissor | Henry Schein | 600-4826 | Surgical scissors 31 castroviejo |
| Surgical Forceps | Aesculap | BD33R | Microforceps, 0.20mm tip |
| Surgical Scissor | Aesculap | MA873R | Micro Iris Scissor, curved shrap tips |
| SurgiPro 7.0 | Medtronic (Coviden) | VP-702-X | Non-Absorbable Monofilament Polypropylene Suture indicated for use in general soft tissue ligation. |
Referências
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