用于过敏性接触性皮炎评估的小鼠耳模型

Summary

在这里，我们描述了通过1-氟-2，4-二硝基苯（DNFB）诱导小鼠耳朵过敏性接触性皮炎的方法以及如何评估过敏性接触性皮炎的严重程度。

Abstract

皮肤是人体的第一道防线，也是最容易受到环境化学物质影响的器官之一。过敏性接触性皮炎（ACD）是一种常见的皮肤病，表现为局部皮疹、发红和皮肤病变。ACD的发生和发展受遗传和环境因素的影响。虽然近年来许多学者构建了一系列ACD模型，但这些模型的实验方案各不相同，这使得读者很难很好地建立它们。因此，稳定高效的动物模型对进一步研究特应性皮炎的发病机制具有重要意义。在这项研究中，我们详细介绍了一种使用1-氟-2，4-二硝基苯（DNFB）在小鼠耳朵中诱导ACD样症状的建模方法，并描述了几种在建模过程中评估皮炎严重程度的方法。该实验方案已在部分实验中成功应用，在ACD研究领域具有一定的促进作用。

Introduction

过敏性接触性皮炎（ACD）是一种常见的皮肤病，其特征是接触部位出现湿疹样症状，中度病例出现水肿和红斑，^{严重病例出现}丘疹、糜烂、渗出甚至大面积疤痕1。它影响多达 20% 的人口，并且可以影响任何年龄的人²。ACD通常发生在反复接触过敏原的个体中，可能是由个体对家中或工作场所的一种或多种过敏原的免疫反应引起的³。IV型迟发性超敏反应被认为是ACD⁴的主要免疫反应类型。在反复暴露于过敏原的皮肤区域，循环记忆T细胞大量积累并诱导免疫和炎症反应³，^5，6。这项工作的目的是提出一种可靠的实验室技术，用于进一步研究ACD发展中的免疫和炎症反应。

ACD 的发作通常是由于反复接触化学品引起的接触超敏反应。在过去的几十年中，许多研究人员在家鼠⁷，⁸，豚鼠⁹，¹⁰和其他动物中开发了各种ACD动物模型^，以模拟疾病的发作。大多数实验方法包括两个阶段：腹部致敏（诱导）和在背部或耳垂上提供刺激（刺激）。常用化学物质主要有1-氟-2，4-二硝基苯（DNFB）/1-氯-2，4-二硝基苯（DNCB）⁸，^9，11、噁唑啉酮12、漆酚¹³等。其中，DNFB和DNCB应用最广泛，首次报道于1958年10月¹⁰。镍敏化模型¹⁴和光过敏性接触性皮炎模型¹⁵也经常使用。

我们提出了一种构建ACD模型的实验方法。该方法在前人研究的基础上，与多个实验进行了对比，对该方法进行了总结和优化。与其他ACD模型相比，该模型具有一些优点，如个体差异小，实验周期短，化学刺激量小等。此外，本研究适用于小鼠，不仅经济，而且在基因敲除或转基因小鼠制备方面有更多的选择¹⁶。我们还描述了用于监测实验中ACD进展的各种方法，例如测量耳朵厚度，使用埃文斯蓝染料测量炎症渗出等。该模型不仅可以通过实验室手段分析小鼠耳朵、血液、脾脏等样本，探索ACD的发病机制，而且适用于新治疗方法的临床前评价，具有一定的推广意义。

Protocol

小鼠的所有护理和治疗均符合扬州大学机构动物护理和使用委员会制定的指导方针，并经机构动物护理和使用委员会批准，项目许可证为SYXK（SU）2022-0044。本研究使用6-8周龄的BALB / c雄性和雌性小鼠。每组由六只小鼠组成（见 材料表）。将笼子放置在温度受控室（22±2°C，12小时光照/黑暗循环）中，自由获取食物和水。实验流程图如图 1所示。 <p class="jove_title…

Representative Results

在反复的DNFB刺激下，DNFB组小鼠耳朵表现出与ACD相当的明显临床症状，敏感区域表现出发红、干燥甚至侵蚀渗出的典型症状。然而，耳部给予纯水（对照组）或溶剂对照（载体组）没有产生类似的症状（图4）。 同时，在DNFB组中，与未经治疗的右耳相比，DNFB刺激后左耳的厚度显着增加（图5A），而对照组和载体组没有显着差异（<str…

Discussion

这里描述的用于诱导小鼠耳朵中ACD样症状的方案可用于研究ACD的病理生理学，并作为开发新药的筛选工具。

建立ACD模型有两个关键步骤：初始致敏和随后的刺激。腹部通常是初始致敏的部位，但随后的刺激部位的选择略有不同。以往的研究表明，大多数学者选择使用DNFB/DNCB或恶唑酮等化学敏化剂在小鼠背部或颈部建立ACD模型，难免要使用刀片或修剪器来挖掘小鼠<sup class="xref"…

Materials

1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB)	Merck	200-734-3	1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99%
Acetone	Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD	10000418	≥99.5%
Aluminum foil	Cleanwrap	CF-2
Evans blue dye	Solarbio	314-13-6	Dye content approx. 80%
Mouse fixator	ZHUYANBANG	GEGD-SM1830
Olive oil	Solarbio	8001-25-0	500 ml
Pipet tip	Biofount	FT-200	10 – 200 μl
Pipettor	Eppendorf AG	3123000250	20 – 200 μl
Razor blade	Shanghai Gillette Co. LTD	74-S
Vernier calipers	Delixi Electric	DECHOTVCS1200