एलर्जी संपर्क जिल्द की सूजन मूल्यांकन के लिए एक माउस कान मॉडल
Summary
यहां, हम 1-फ्लोरो-2,4-डाइनिट्रोबेंजीन (डीएनएफबी) द्वारा माउस कानों में एलर्जी संपर्क जिल्द की सूजन को प्रेरित करने के तरीकों का वर्णन करते हैं और एलर्जी संपर्क जिल्द की सूजन की गंभीरता का मूल्यांकन कैसे करें।
Abstract
त्वचा मानव शरीर की रक्षा की पहली पंक्ति है और पर्यावरणीय रसायनों के लिए सबसे अधिक उजागर अंगों में से एक है। एलर्जी संपर्क जिल्द की सूजन (एसीडी) एक सामान्य त्वचा रोग है जो स्थानीय दाने, लालिमा और त्वचा के घावों के रूप में प्रकट होता है। एसीडी की घटना और विकास आनुवंशिक और पर्यावरणीय दोनों कारकों से प्रभावित होते हैं। यद्यपि कई विद्वानों ने हाल के वर्षों में एसीडी के मॉडल की एक श्रृंखला का निर्माण किया है, इन मॉडलों के प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल सभी अलग-अलग हैं, जिससे पाठकों के लिए उन्हें अच्छी तरह से स्थापित करना मुश्किल हो जाता है। इसलिए, एटोपिक डर्मेटाइटिस के रोगजनन का आगे अध्ययन करने के लिए एक स्थिर और कुशल पशु मॉडल का बहुत महत्व है। इस अध्ययन में, हम चूहों के कानों में एसीडी जैसे लक्षणों को प्रेरित करने के लिए 1-फ्लोरो-2,4-डाइनिट्रोबेंजीन (डीएनएफबी) का उपयोग करके एक मॉडलिंग विधि का विस्तार करते हैं और मॉडलिंग के दौरान जिल्द की सूजन की गंभीरता का आकलन करने के लिए कई तरीकों का वर्णन करते हैं। इस प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल को कुछ प्रयोगों में सफलतापूर्वक लागू किया गया है और एसीडी अनुसंधान के क्षेत्र में एक निश्चित प्रचार भूमिका है।
Introduction
एलर्जी संपर्क जिल्द की सूजन (एसीडी) एक सामान्य त्वचा रोग है जो संपर्क स्थल पर एक्जिमा जैसे लक्षणों, मध्यम मामलों में एडिमा और एरिथेमा, औरगंभीर मामलों में पपुल, क्षरण, उत्सर्जन या यहां तक कि बड़े पैमाने पर निशान की विशेषता है। यह 20% आबादी को प्रभावित करता है और किसी भी उम्र के लोगों को प्रभावित कर सकताहै। एसीडी अक्सर उन व्यक्तियों में होता है जो बार-बार एलर्जी के संपर्क में आते हैं और अपने घर या कार्यस्थल में एक या अधिक एलर्जी के लिए व्यक्ति की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के कारण हो सकतेहैं। टाइप IV विलंबित अतिसंवेदनशीलता को एसीडी4 में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का मुख्य प्रकार माना जाता है। त्वचा के उन क्षेत्रों में जो बार-बार एलर्जी के संपर्क में आते हैं, परिसंचारी मेमोरी टी कोशिकाएं बड़ी संख्या में जमा होती हैं और प्रतिरक्षा और भड़काऊ प्रतिक्रियाओं को प्रेरित करती हैं 3,5,6. इस काम का उद्देश्य एसीडी के विकास में प्रतिरक्षाविज्ञानी और भड़काऊ प्रतिक्रियाओं की आगे की जांच के लिए एक विश्वसनीय प्रयोगशाला तकनीक का प्रस्ताव करना है।
एसीडी की शुरुआत आमतौर पर रसायनों के बार-बार संपर्क के कारण संपर्क अतिसंवेदनशीलता के कारण होती है। कई शोधकर्ताओं ने बीमारी की शुरुआत का अनुकरण करने के लिए पिछले कुछ दशकों के दौरान घर के चूहों7,8, गिनी सूअरों 9,10 और अन्य जानवरों में विभिन्न एसीडी पशु मॉडल विकसित किए हैं। अधिकांश प्रयोगात्मक विधियों में दो चरण होते हैं: पेट संवेदीकरण (प्रेरण) और पीठ या कान लोब (उत्तेजना) पर उत्तेजना प्रदान करना। आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले रासायनिक पदार्थों में मुख्य रूप से 1-फ्लोरो-2,4-डाइनिट्रोबेंजीन (डीएनएफबी)/1-क्लोरो-2,4-डाइनिट्रोबेंजीन (डीएनसीबी) 8,9,11, ऑक्साज़ोलोन 12, उरुशिओल 13, आदि शामिल हैं। उनमें से, DNFB और DNCB सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं, पहली बार अक्टूबर 195810 में रिपोर्ट किए गए थे। निकल संवेदीकरण मॉडल14 और फोटोएलर्जिक संपर्क जिल्द की सूजन मॉडल15 का भी अक्सर उपयोग किया जाता है।
हम एसीडी मॉडल के निर्माण के लिए एक प्रयोगात्मक विधि प्रस्तुत करते हैं। इस विधि को पिछले अध्ययनों के आधार पर और कई प्रयोगों के साथ तुलना पर संक्षेप और अनुकूलित किया गया है। अन्य एसीडी मॉडल की तुलना में, इस मॉडल के कुछ फायदे हैं, जैसे कि छोटे व्यक्तिगत अंतर, छोटी प्रयोगात्मक अवधि, रासायनिक उत्तेजना की एक छोटी मात्रा, आदि। इसके अलावा, यह अध्ययन चूहों पर लागू होता है, जो न केवल किफायती हैं, बल्कि जीन नॉकआउट या ट्रांसजेनिक चूहों की तैयारीके लिए अधिक विकल्प भी हैं। हम प्रयोग में एसीडी प्रगति की निगरानी के लिए उपयोग किए जाने वाले विभिन्न तरीकों का भी वर्णन करते हैं, जैसे कि कान की मोटाई मापना, भड़काऊ उत्सर्जन को मापने के लिए इवांस ब्लू डाई का उपयोग करना, आदि। यह मॉडल न केवल एसीडी के रोगजनन का पता लगाने के लिए प्रयोगशाला के माध्यम से माउस कान, रक्त, प्लीहा और अन्य नमूनों का विश्लेषण कर सकता है, बल्कि नए चिकित्सीय तरीकों के प्रीक्लिनिकल मूल्यांकन के लिए भी लागू होता है, जिसका एक निश्चित प्रचार महत्व है।
Protocol
Representative Results
Discussion
चूहों के कानों में एसीडी जैसे लक्षणों को प्रेरित करने के लिए यहां वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग एसीडी के पैथोफिज़ियोलॉजी का अध्ययन करने और नई दवाओं के विकास के लिए एक स्क्रीनिंग टूल के रूप में किया जा सकत?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (एनएसएफसी) द्वारा एन-एन द्वारा समर्थित किया गया था। वाई (81904212); जियांग्सू पारंपरिक चीनी चिकित्सा विज्ञान और प्रौद्योगिकी परियोजना (वाईबी 201995); और चीन में पोस्टडॉक्टरल शोधकर्ताओं के लिए विशेष वित्त पोषण परियोजना (2020T130562)।
Materials
| 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) | Merck | 200-734-3 | 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99% |
| Acetone | Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD | 10000418 | ≥99.5% |
| Aluminum foil | Cleanwrap | CF-2 | |
| Evans blue dye | Solarbio | 314-13-6 | Dye content approx. 80% |
| Mouse fixator | ZHUYANBANG | GEGD-SM1830 | |
| Olive oil | Solarbio | 8001-25-0 | 500 ml |
| Pipet tip | Biofount | FT-200 | 10 – 200 μl |
| Pipettor | Eppendorf AG | 3123000250 | 20 – 200 μl |
| Razor blade | Shanghai Gillette Co. LTD | 74-S | |
| Vernier calipers | Delixi Electric | DECHOTVCS1200 |
Referências
- Neale, H., Garza-Mayers, A. C., Tam, I., Yu, J. Pediatric allergic contact dermatitis. Part I: Clinical features and common contact allergens in children. Journal of the American Academy of Dermatology. 84 (2), 235-244 (2021).
- Koppes, S. A., et al. Current knowledge on biomarkers for contact sensitization and allergic contact dermatitis. Contact Dermatitis. 77 (1), 1-16 (2017).
- Martin, S. F., et al. Mechanisms of chemical-induced innate immunity in allergic contact dermatitis. Allergy. 66 (9), 1152-1163 (2011).
- Kimber, I., Basketter, D. A., Gerberick, G. F., Dearman, R. J. Allergic contact dermatitis. International Immunopharmacology. 2 (2-3), 201-211 (2002).
- Vocanson, M., Hennino, A., Rozieres, A., Poyet, G., Nicolas, J. F. Effector and regulatory mechanisms in allergic contact dermatitis. Allergy. 64 (12), 1699-1714 (2009).
- Gamradt, P., et al. Inhibitory checkpoint receptors control CD8+ resident memory T cells to prevent skin allergy. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 143 (6), 2147.e9-2157.e9 (2019).
- Fraginals, R., Blasi, N. A., Lepoittevin, J. P., Benezra, C. A successful murine model for contact sensitization to a sesquiterpene-alpha-methylene-gamma-butyrolactone: sensitization to alantolactone in four strains of mice. The Journal of Investigative Dermatology. 97 (3), 473-477 (1991).
- Knop, J., Riechmann, R., Neumann, C., Macher, E. Modulation of suppressor mechanisms in allergic contact dermatitis: 5. Evidence that inhibition of suppressor T lymphocytes by Corynebacterium parvum is mediated by interferon. The Journal of Investigative Dermatology. 79 (6), 385-388 (1982).
- Polak, L., Scheper, R. J. Antigen-specific T-cell lines in DNCB-contact sensitivity in guinea pigs. The Journal of Investigative Dermatology. 80 (5), 398-402 (1983).
- Witten, V. H., March, C. H. Studies of the mechanism of allergic eczematous contact dermatitis. II. Use of C14 labelled 2:4-dinitrochlorobenzene in guinea pigs. The Journal of Investigative Dermatology. 31 (2), 97-102 (1958).
- Knop, J., Riechmann, R., Macher, E. Modulation of suppressor mechanism in allergic contact dermatitis. IV. Selective inhibition of suppressor T-lymphocytes by serum obtained from Corynebacterium parvum treated mice. The Journal of Investigative Dermatology. 77 (6), 469-473 (1981).
- Rubic-Schneider, T., et al. GPR91 deficiency exacerbates allergic contact dermatitis while reducing arthritic disease in mice. Allergy. 72 (3), 444-452 (2017).
- Stampf, J. L., Benezra, C., Byers, V., Castagnoli Jr, N. Induction of tolerance to poison ivy urushiol in the guinea pig by epicutaneous application of the structural analog 5-methyl-3-n-pentadecylcatechol. The Journal of Investigative Dermatology. 86 (5), 535-538 (1986).
- Dhingra, N., et al. Molecular profiling of contact dermatitis skin identifies allergen-dependent differences in immune response. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 134 (2), 362-372 (2014).
- Maguire Jr, H. C., Kaidbey, K. Experimental photoallergic contact dermatitis: a mouse model. The Journal of Investigative Dermatology. 79 (3), 147-152 (1982).
- Qiu, Z., et al. A dysregulated sebum-microbial metabolite-IL-33 axis initiates skin inflammation in atopic dermatitis. The Journal of Experimental Medicine. 219 (10), e2021397 (2022).
- Kim, H., et al. Anti-inflammatory activities of Dictamnus dasycarpus Turcz., root bark on allergic contact dermatitis induced by dinitrofluorobenzene in mice. Journal of Ethnopharmacology. 149 (2), 471-477 (2013).
- Zhou, P., et al. Effect of 6′-acetylpaeoniflorin on dinitrochlorobenzene-induced allergic contact dermatitis in BALB/c mice. Immunologic Research. 64 (4), 857-868 (2016).
- Donglang, G., et al. Comparative study on different skin pruritus mouse models. Frontiers in Medicine. 8, 630237 (2021).
- Yang, N., Shao, H., Deng, J., Liu, Y. Network pharmacology-based analysis to explore the therapeutic mechanism of Cortex Dictamni on atopic dermatitis. Journal of Ethnopharmacology. 304, 116023 (2023).
