यह विधि संरचनात्मक और भौतिक गुणों के साथ बायोडिग्रेडेबल पॉलीमेरिक माइक्रोपार्टिकल्स में रेबीज एंटीजन के एनकैप्सुलेशन का वर्णन करती है जो पूर्व निर्धारित देरी के बाद पल्सटाइल रिलीज को सक्षम करती है। कण कोर से प्राप्त एंटीजन का एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) मूल्यांकन कण निर्माण के माध्यम से बरकरार ट्राइमेरिक रेबीज वायरस ग्लाइकोप्रोटीन की उपस्थिति की पुष्टि करता है।
रेबीज पोस्ट-एक्सपोजर प्रोफिलैक्सिस के लिए वर्तमान दिशानिर्देशों में कई हफ्तों में कई इंजेक्शन की आवश्यकता होती है। यह कम और मध्यम आय वाले देशों (LMICs) में रहने वाले लोगों के लिए असंगत रूप से बोझिल हो सकता है, जहां रेबीज के अधिकांश घातक जोखिम होते हैं। एंटीजन को पॉलीमेरिक कणों में एनकैप्सुलेट करके वैक्सीन रेजिमेन को एक इंजेक्शन में संघनित करने के लिए विभिन्न दवा वितरण रणनीतियों का पता लगाया गया है। हालांकि, एनकैप्सुलेशन प्रक्रिया के दौरान कठोर तनाव एनकैप्सुलेटेड एंटीजन के विकृतीकरण का कारण बन सकता है। यह लेख रेबीज वायरस (आरएबीवी) एंटीजन को बहुलक माइक्रोपार्टिकल्स में एनकैप्सुलेट करने की एक विधि का वर्णन करता है जो असमर्थ पल्सटाइल रिलीज प्रदर्शित करते हैं। यह विधि, जिसे पार्टिकल्स यूनिफॉर्मली लिक्विफाइड एंड सील्ड टू एनकैप्सुलेट ड्रग्स (स्पंदित) कहा जाता है, एक मल्टी-फोटॉन, 3 डी-प्रिंटेड मास्टर मोल्ड से व्युत्क्रम पॉलीडिमिथाइलसिलोक्सेन (पीडीएमएस) मोल्ड बनाने के लिए सॉफ्ट लिथोग्राफी का उपयोग करके माइक्रोपार्टिकल्स उत्पन्न करता है। पॉली (लैक्टिक-को-ग्लाइकोलिक एसिड) (पीएलजीए) फिल्मों को तब पीडीएमएस मोल्डों में संपीड़न-ढाला जाता है ताकि खुले चेहरे वाले सिलेंडर उत्पन्न किए जा सकें जो पीजोइलेक्ट्रिक डिस्पेंसिंग रोबोट का उपयोग करके केंद्रित आरएबीवी से भरे होते हैं। इन सूक्ष्म संरचनाओं को तब कणों के शीर्ष को गर्म करके सील किया जाता है, जिससे सामग्री को प्रवाह करने और एक निरंतर, गैर-छिद्रपूर्ण बहुलक बाधा बनाने की अनुमति मिलती है। निर्माण के बाद, एक एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) जो बरकरार ट्राइमेरिक रेबीज वायरस ग्लाइकोप्रोटीन का पता लगाने के लिए विशिष्ट है, का उपयोग माइक्रोपार्टिकल्स से इम्युनोजेनिक एंटीजन की उच्च वसूली की पुष्टि करने के लिए किया जाता है।
टीकाकरण एक अत्यंत प्रभावी स्वास्थ्य सेवा उपकरण है, जिसने 2000 और 2019 के बीच 37 मिलियन से अधिक मौतों को रोकाहै। इस प्रभावशीलता के बावजूद, वैक्सीन-रोकथाम योग्य बीमारियां वैश्विक स्वास्थ्य के लिए एक महत्वपूर्ण जोखिम पैदा करना जारी रखती हैं, विशेष रूप से निम्न और मध्यम आय वाले देशों (LMICs) में जहां गैर-और कम-टीकाकरण की उच्च दर सालाना 1.5 मिलियन वैक्सीन-रोकथाम योग्य मौतों में योगदान करतीहै। रेबीज इन असमानताओं का कोई अपवाद नहीं है। मानव जाति के लिए ज्ञात सबसे घातक बीमारी के रूप में इसकी स्थिति के बावजूद, लगभग सार्वभौमिक रूप से घातक होने के नाते, रेबीज पूरी तरह से इलाज योग्य है और कई उच्च आय वाले देशों में उन्मूलन के रूप में वर्गीकृत किया गया है। इसके बजाय, रेबीज का बोझ एशिया और अफ्रीका के कुछ हिस्सों में रहने वाले लोगों द्वारा असमान रूप से वहन किया जाता है, जहां बीमारी के मनुष्योंऔर पशुधन पर विनाशकारी परिणाम होते हैं।
रेबीज5 के वैश्विक प्रभाव के प्रबंधन के लिए टीकाकरण महत्वपूर्ण है। टीकाकरण की लागत रोग की समग्र कम घटनाओं को देखते हुए प्री-एक्सपोजर प्रोफिलैक्सिस (पीआरईपी) के व्यापक कार्यान्वयन को प्रतिबंधित करती है। इसके अलावा, एलएमआईसी में, पोस्ट-एक्सपोजर प्रोफिलैक्सिस (पीईपी) की उपयोगिता स्वास्थ्य देखभाल की मांग करने वाले रोगियों पर सामाजिक आर्थिक दबावों से सीमित है। तार्किक कारक, जैसे कि स्वास्थ्य देखभाल पहुंच बिंदुओं तक यात्रा की दूरी, उपचार प्राप्त करते समय मजदूरी में कमी, उपचार की लागत, दैनिक गतिविधियों में हस्तक्षेप करने वाली नियुक्तियां, और भूलने की बीमारी, के परिणामस्वरूप पीईपी पालन दर 60% 6,7 तक कम हो जाती है। यह उच्च रोगी एट्रिशन रेट बीमारी का मुकाबला करने के लिए रेबीज टीकाकरण में अंतराल को संबोधित करने के लिए दृष्टिकोण को परिष्कृत करने का अवसर प्रस्तुत करता है।
एकल-इंजेक्शन (एसआई) टीकाकरण प्रणाली जो एंटीजन की रिहाई को नियंत्रित करती है, को एक इंजेक्शन में पूर्ण टीकाकरण प्राप्त करने के तरीकों के रूप में खोजा गया है। एक स्वास्थ्य सेवा प्रदाता के लिए कई यात्राओं की आवश्यकता को समाप्त करना उन बोझ ों को कम करता है जो व्यक्तियों को पर्याप्त देखभाल की मांग करने से रोकते हैं। एसआई टीकाकरण प्राप्त करने के लिए, एक एंटीजन को आमतौर पर एक बायोडिग्रेडेबल पॉलीमेरिक मैट्रिक्स के भीतर समझाया जाता है जो अक्सर इंजेक्टेबल माइक्रोपार्टिकल्स का रूप लेता है। एक बार इंजेक्शन लगाने के बाद, बहुलक अवक्रमित एंटीजन को नीचा दिखाता है और जारी करता है। आज तक, एसआई टीकाकरण प्राप्त करने के लिए दो प्राथमिक रिलीज रणनीतियों का पालन किया गया है। एक दृष्टिकोण में, एंटीजन को समय की विस्तारित अवधि में लगातार जारी किया जाता है। यद्यपि एक इंजेक्शन की इम्युनोजेनेसिटी को बढ़ाने का इरादा है, यह स्पष्ट नहीं है कि यह दृष्टिकोण मनुष्यों में रेबीज वायरस (आरएबीवी) के खिलाफ सुरक्षात्मक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया प्राप्त करने के लिए पर्याप्त हैया नहीं। दूसरे में, एंटीजन को एक पारंपरिक और सिद्ध प्राइम-बूस्ट वैक्सीन रेजिमेन की नकल करने के लिए पूर्व निर्धारित देरी के बाद जारी किया जाता है। विलायक वाष्पीकरण-आधारित माइक्रोपार्टिकल निर्माण विधियां पूर्व रणनीति का प्रदर्शन करती हैं, और इसका उपयोग मॉडल वैक्सीन9 और अत्यधिक स्थिर एंटीजन, जैसे टेटनस टॉक्सॉइड10 दोनों को सफलतापूर्वक समाहित करने के लिए किया गया है। हालांकि, इन एनकैप्सुलेशन विधियों में गर्मी, विलायक बातचीत और भौतिक बलों सहित तनाव शामिल हैं, जो एंटीजन11 को विकृत कर सकते हैं।
कणों को समान रूप से द्रवित और सील करके एनकैप्सुलेट ड्रग्स (स्पंदित) एक हाल ही में विकसित निर्माण विधि है जिसे बायोडिग्रेडेबल माइक्रोपार्टिकल्स में जीवविज्ञान को समाहित करने के लिए नियोजित किया जा सकता है। माइक्रोमोल्डिंग का उपयोग उन कणों को उत्पन्न करने के लिए किया जाता है जो एक तरल पेलोड से भरे होते हैं और बहुलक को बायोडिग्रेडेबल बहुलक की एक सन्निहित परत के भीतर कार्गो के केंद्रीय डिपो को पुन: प्रवाह और पूरी तरह से समाहित करने की अनुमति देने के लिए गर्म किया जाता है। इस माइक्रोस्ट्रक्चर के परिणामस्वरूप पेलोड की पल्सटाइल रिलीज होती है, एक अवधि के बाद जो पॉलिमरिक शेल12 की गिरावट दर पर निर्भर होती है। यह पांडुलिपि पॉली (लैक्टिक-को-ग्लाइकोलिक एसिड) (पीएलजीए) से बने सूक्ष्म कणों के भीतर निष्क्रिय आरएबीवी के एनकैप्सुलेशन को प्रदर्शित करती है, जो कई एफडीए-अनुमोदित फॉर्मूलेशन13 में उपयोग किया जाने वाला एक बायोडिग्रेडेबल बहुलक है, जो एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) द्वारा मूल्यांकन के रूप में स्थिर आरएबीवी एंटीजन को समाहित करने के लिए स्पंदित निर्माण विधि का उपयोग करता है। पीएलजीए कणों को विभिन्न आणविक भार और / या अंतिम समूहों के साथ जोड़कर, इस दृष्टिकोण में एकल इंजेक्शन के बाद वर्तमान रेबीज टीकाकरण समय पाठ्यक्रम की नकल करने की क्षमता है।
विशिष्ट आवश्यकताओं के लिए कण ज्यामिति को बदलना संभव है; हालांकि, बेलनाकार संरचनाओं के लिए, लेखक प्रोटोकॉल में वर्णित ऊंचाई: व्यास: दीवार मोटाई के 5: 4: 1 अनुपात को बनाए रखने की सलाह देते हैं। यह पहलू अनुपात यह सुनिश्चित करता है कि कणों को सील करने के लिए पर्याप्त पीएलजीए सामग्री मौजूद है और हैंडलिंग के लिए यांत्रिक रूप से पर्याप्त मजबूत है। सीएडी प्रक्रिया के दौरान कण आयाम ों और आकृतियों को आसानी से बदला जा सकता है, जिससे असंख्य ज्यामिति उत्पन्न हो सकती है। 3 डी प्रिंटिंग के साथ सीएडी के लचीलेपन का संयोजन माइक्रोपार्टिकल डिजाइनों के तेजी से पुनरावृत्ति को सक्षम बनाता है। यद्यपि यह प्रोटोकॉल एक मल्टी-फोटॉन 3 डी प्रिंटर का उपयोग करता है, लेकिन एक उपयुक्त सामग्री में माइक्रोस्ट्रक्चर आयामों को प्रिंट करने में सक्षम विनिर्देशों के साथ किसी भी 3 डी प्रिंटर का उपयोग प्रारंभिक मास्टर मोल्ड उत्पन्न करने के लिए किया जा सकता है। इसके अलावा, फोटोलिथोग्राफी का उपयोग पहले इस प्रोटोकॉल में उत्पादित लोगों की तुलना में सरणियों में समान संरचनाओं को बनाने के लिए किया गया है; हालांकि, श्रम, कस्टम-निर्मित फोटोमास्क ऑर्डर करने में देरी, और उपकरण पहुंच पुनरावृत्ति डिजाइन प्रक्रियाको धीमा कर देगी। अंत में, मास्टर मोल्ड पीढ़ी को शुल्क-फॉर-सर्विस कंपनियों को आउटसोर्स किया जा सकता है यदि इन-हाउस मास्टर मोल्ड निर्माण संभव नहीं है। मास्टर मोल्डों को उत्पन्न करने के लिए उपयोग किए जाने वाले 3 डी प्रिंटर या विधि के बावजूद, सब्सट्रेट में प्रिंट का आसंजन डाउनस्ट्रीम चरणों के लिए महत्वपूर्ण है। विशेष रूप से, यदि पीडीएमएस मोल्ड पीढ़ी के दौरान आसंजन अपर्याप्त है, तो मुद्रित कण पीडीएमएस मोल्ड में दर्ज रहेंगे, जिससे मुद्रित कणों को मैन्युअल रूप से हटाने और मास्टर मोल्ड के विनाश की आवश्यकता होगी।
कण भरना विचार करने के लिए एक और महत्वपूर्ण पहलू है। माइक्रोपार्टिकल्स में सीमित भरने की क्षमता होती है, इसलिए निस्पंदन का उपयोग न केवल आरएबीवी एंटीजन को केंद्रित करने के लिए किया जाता है, बल्कि स्टॉक एक्सीपिएंट्स को हटाने के लिए भी किया जाता है जो अन्यथा माइक्रोपार्टिकल कोर वॉल्यूम के एक बड़े हिस्से पर कब्जा कर लेंगे। हालांकि, आरएबीवी एंटीजन (लगभग 60 एनएम बाय 180 एनएम) 17 के बड़े आकार को देखते हुए, सेंट्रीफ्यूजेशन चरणों के दौरान एंटीजन को आंशिक रूप से बाहर निकालना संभव है। इस कारण से, आरएबीवी एंटीजन की उच्च वसूली प्राप्त करने के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद पाइपिंग या भंवर द्वारा एंटीजन को फिर से निलंबित करना महत्वपूर्ण है। एक अत्यधिक केंद्रित समाधान वितरण के लिए आदर्श है, क्योंकि यह वितरण चक्रों को कम करता है और इस प्रकार भरने के दौरान एंटीजन गिरावट को सीमित करता है। हालांकि, चिपचिपाहट एक स्थिर बूंद बनाने वाले पीजोइलेक्ट्रिक डिस्पेंसिंग रोबोट की एक प्रमुख सीमा है, इसलिए बहुत अधिक एकाग्रता समाधान देना संभव या उचित नहीं हो सकता है। भरने के समाधान को पतला करना एक स्थिर ड्रॉप गठन प्राप्त करने का सबसे आसान तरीका है, लेकिन वांछित लोडिंग को प्राप्त करने के लिए आवश्यक अतिरिक्त भरने चक्रों पर एंटीजन स्थिरता और कणों को भरने के लिए आवश्यक समय की लंबी मात्रा पर विचार किया जाना चाहिए।
सीमाओं
इस विधि को प्रारंभिक मोल्डों का उत्पादन करने के लिए अत्यधिक विशिष्ट उपकरणों और माइक्रोपार्टिकल उत्पादन के लिए एक विशेष भरने वाले उपकरण की आवश्यकता होती है। यद्यपि प्रारंभिक मास्टर मोल्डों को उत्पन्न करने में सक्षम प्रिंटिंग रिज़ॉल्यूशन के साथ 3 डी प्रिंटर की आवश्यकता को शुल्क-फॉर-सर्विस दृष्टिकोण द्वारा नष्ट किया जा सकता है, लेकिन पीजोइलेक्ट्रिक डिस्पेंसिंग रोबोट तक पहुंच सीमित है। पीजोइलेक्ट्रिक डिस्पेंसिंग रोबोट की खरीद के लिए एक महत्वपूर्ण प्रारंभिक अग्रिम निवेश की आवश्यकता होती है, जो अक्सर ब्रांड, थ्रूपुट और क्षमताओं के आधार पर $ 80,000 से $ 200,000 की सीमा में होती है। यद्यपि कई अन्य भरने के तरीके संभावित विकल्प हैं, इन विधियों को आरएबीवी एंटीजन12 का उपयोग करके मान्य नहीं किया गया है।
भविष्य के अनुप्रयोग
सीलिंग प्रक्रिया के माध्यम से एनकैप्सुलेटेड आरएबीवी एंटीजन का एक बड़ा हिस्सा स्थिर रहा। सिद्धांत रूप में, इस एंटीजन को विभिन्न प्रकार के पीएलजीए से बने कणों में शामिल करके जो पोस्ट-एक्सपोजर प्रोफिलैक्सिस उपचार की प्रशासन समयरेखा की नकल करते हैं, सभी खुराक को एक ही इंजेक्शन में प्रशासित किया जा सकता है। अतिरिक्त खुराक देने के लिए बार-बार अस्पताल के दौरे की आवश्यकता को समाप्त करने से रोगी अनुपालन में वृद्धि होगी, जिसके परिणामस्वरूप बेहतर उपचार परिणाम होंगे। इसके अलावा, अत्यधिक जटिल निष्क्रिय रेबीज वायरस की एलिसा-प्रतिक्रिया को बनाए रखने की क्षमता का प्रदर्शन करने के बाद, यह संभावना है कि सबयूनिट टीकों सहित अन्य एंटीजन इस एनकैप्सुलेशन विधि के साथ संगत होंगे। स्पंदित माइक्रोपार्टिकल्स के साथ अन्य रोगनिरोधी एंटीजन का उपयोग करने से कम टीकाकरण वाली आबादी की टीकाकरण दर में वृद्धि करके एलएमआईसी में लाखों लोगों की जान बचाई जा सकती है। हालांकि, इसे पूरा करने के लिए, टीकों को न केवल एनकैप्सुलेशन के माध्यम से स्थिर रहना चाहिए, बल्कि रिलीज भी करना चाहिए, जो चुनौतीपूर्ण हो सकता है क्योंकि पेलोड को शरीर की गर्मी और पीएलजीएक्षरण उत्पादों के कारण ऊंचे तापमान और संभावित अम्लीय माइक्रोएन्वायरमेंट के अधीन किया जाएगा। भविष्य के काम रिलीज के माध्यम से एंटीजन की स्थिर रणनीतियों को आगे बढ़ाएंगे, जो एकल-इंजेक्शन टीकाकरण मंच की क्षमता को खोलेगा जो कई संक्रामक रोगों को रोकने के लिए व्यापक रूप से लागू है।
The authors have nothing to disclose.
हम आरएबीवी एंटीजन के साथ मानवता के लिए कण प्रदान करने के लिए चिरोन बेहरिंग और भारत बायोटेक इंटरनेशनल को धन्यवाद देते हैं। हम चार्ल्स रुपरेच्ट, वीएमडी, एमएस, पीएचडी, उनके अमूल्य मार्गदर्शन और तकनीकी योगदान के लिए भी स्वीकार करना चाहते हैं। रेबेका रिचर्ड्स-कॉर्टम की उदारता को धन्यवाद देना चाहते हैं कि उन्होंने अपने SciFLEXARRAYER S3 पिकोलिटर डिस्पेंसिंग उपकरण के उपयोग की अनुमति दी और डिवाइस का उपयोग करने पर डॉ चेल्सी स्मिथ के निर्देश दिए। हम रेबीज एंटीजन की माइक्रोस्कोपी छवियों को उत्पन्न करने के लिए मैसाचुसेट्स चैन मेडिकल स्कूल विश्वविद्यालय को भी स्वीकार करते हैं। अंत में, हम प्रस्तुत करने से पहले दस्तावेज़ की समीक्षा करने के लिए डॉन चिकरिंग और एरिन यूलियानो को धन्यवाद देते हैं। इस काम को बिल एंड मेलिंडा गेट्स फाउंडेशन से अनुदान (आईएनवी -004360) द्वारा समर्थित किया गया था।
0.22 µm PES filter | Cole-Parmer+B4B2:B63 | 04396-26 | |
0.25 mm Shims | McMaster Carr | 98090A935 | |
0.75 inch Binder Clips | Staples | 480114 | |
10 mL Syringe | Becton, Dickinson and Company | 309604 | |
10 mL Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe | Fisherbrand | 13-678-11E | |
101.6 mm C-Clamp | Amazon | PT-SD-CP01A | Black handle will eventually fall off. Use pliers to adjust once this happens. |
19 G needle | EXCELINT | 26438 | |
25 mL Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe | Fisherbrand | 13-678-11 | |
3-(Trimethoxysilyl) Propyl Methacrylate | Millipore Sigma | M6514-25ML | |
5 mL Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe | Eppendorf | 22431081 | |
50 mL Centrifuge Tubes | Corning | 352098 | |
50 mL Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe | Fisherbrand | 13-678-11F | |
Acetone | Fisher | AC268310010 | |
Aluminum Block | McMaster Carr | 9057K175 | |
Aluminum Foil | VWR | 89079-069 | |
Amicon Ultra 0.5 mL Centrifugal Filters, 100 kDa | Millipore Sigma | C82301 | |
Anti-Rabies Virus Antibody, Serum Free Antibody, clone 1112-1, 100 | Fisherbrand | 13-678-11D | |
Anti-Rabies Virus Mouse Monoclonal Antibody, Clone D1-25, biotinylated | Fisherbrand | 14-388-100 | |
Carboxymethyl Cellulose | Tokyo Chemical Industries | C0045 | |
ClipTip 300, Filter, Racked | Fisherbrand | 13-678-11 | |
Costar 0.65 mL Low Binding Snap Cap Microcentrifuge Tube | Corning | 3206 | |
Costar 1.7 mL Low Binding Snap Cap Microcentrifuge Tube | Corning | 3207 | |
Describe | Nanoscribe | Software used to define the printing parameters for Nanoscribe 3D printer is step 1.2. Software provided with the printer. |
|
Desiccator | Fisher Scientific | 10529901 | Or equivalent |
Double-Sided Tape | Staples | 649280 | |
DPBS (10x), No Calcium, No Magnesium | Gibco | 14200075 | |
Ethanol | VWR | 89370-084 | |
F1-ClipTip Multichannel Pipettes, 30 to 300 µL | Fisherbrand | 13-678-11E | |
Fisherbrand SureOne Aerosol Barrier Pipette Tips, 0.1 – 10 µL | Fisherbrand | 13-678-11F | |
Fisherbrand SureOne Aerosol Barrier Pipette Tips, 100 – 1000 µL | Fisherbrand | 03-448-17 | |
Fisherbrand SureOne Aerosol Barrier Pipette Tips, 2 – 20 µL | Fisherbrand | FB14955202 | |
Fisherbrand SureOne Aerosol Barrier Pipette Tips, 20 – 200 µL | Fisherbrand | 13-374-10 | |
Fisherbrand Elite Pipette Kit | Fisherbrand | 05-408-137 | |
Fisherbrand Pipet Controller | Fisherbrand | FB14955202 | |
Glass Petri Dish, 90 mm | VWR | 470313-346 | |
Glass Slides | Globe Scientific | 1380-10 | |
Helicon Focus 8 | HeliconSoft | Software used to focus stack images | |
IP-Q Resin | Nanoscribe | Printer resin is compatable with the 10x lens and is used for printing large microstructures on the Nanoscribe Photonic Professional GT2 | |
Lascar EL-USB-TC-LCD Thermocouple | Amazon | 5053485896236 | Or equivalent |
Microscope Slide Box | Millipore Sigma | Z374385-1EA | Or equivalent |
Nanoscribe Photonic Professional GT2 with 10X Objective | Nanoscribe | ||
NanoWrite | Nanoscribe | Software used to interface with nanoscrive 3D printer. Software provided with printer. |
|
Nunc MaxiSorp Flat-Bottom 96-well Plate | Invitrogen | 44-2404-21 | |
OPD Substrate Tablets (o-Phenylenediamine Dihydrochloride) | Fisherbrand | 02-707-432 | |
Parafilm M Wrapping Film, 4 in. | Fisherbrand | 13-374-10 | |
PDC 60 with Type 3 Coating | Scienion | P-2020 | |
PDMS Particle Molds | Rice University | n/a | N/A- Particles are 400 μm in diameter with a wall thickness of 100 μm, and a height of 500 μm, resulting in an inner diameter of 200 μm. The arrays are 14 x 22 particles spaced 600 μm apart from each other. 4- and 5-point stars are used as fiducials, positioned 600 μm to the right and left of the top right and top left particles on the array. |
Petri Dish | Fisher Scientific | 08-757-100D | |
Pierce Stable Peroxide Substrate Buffer (10x) | Fisherbrand | 02-707-430 | |
Plastic Cups | Fisher Scientific | S04170 | |
PLGA Film, 502H | Sigma | 502H: 719897-1G | |
Propylene Glycol Monomethyl Ether Acetate | Millipore Sigma | 484431 | |
Rabies Antigen | Chiron Behring and Bharat Biotech International | Material was acquired by entering into a materials transfer agreement with the company. | |
Razor Blades | VWR | 55411-050 | |
Scalpel | VWR | 21899-530 and 76457-512 | |
SciFLEXARRAYER S3 with PCD 60 | Scienion | Or equivalent | |
Sealing Tape for 96-Well Plates | Thermo Scientific | 15036 | |
Silicon Wafer | University Wafer | 1025 | |
Spring Clamps | IRWIN | VGP58100 | |
Stainless Steel Block | McMaster Carr | 9083K12 | |
Streptavidin−Peroxidase Polymer, Ultrasensitive | Fisherbrand | 02-707-404 | |
Sylgard 184 | DOW | 2646340 | |
Teflon Sheet | McMaster Carr | 9266K12 | Used to make PLGA films. Must be cut into appropriately sized pieces. |
Teflon Sheet, 0.8 mm-thick | McMaster Carr | 9266K81 | |
Trichloro(1H, 1H, 2H, 2H-Perfluorooctyl) Silane | Sigma | 448931-10G | |
Tweezers | Pixnor | ESD-16 | |
UltraPure Distilled Water | Fisher Scientific | 10977015 | |
UV Oven, CL-1000S UV Crosslinker | UVP | 95-0174-01 | Or equivalent |
Vacuum Desiccator | Bel-Art | F420100000 | Note you will need two of these. One will be used exclusively to pre-treat samples with trichloro(1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) silane to prevent contamination. |
Vacuum Oven Capable of Reaching 120 °C | VWR | 97027-664 | Or equivalent |
Vacuum, CRVpro4 | Welch | 3041-01 | Or equivalent |
Wooden Tongue Depressors | Electron Microscopy Sciences | 72320 |