マウスにおける非侵襲的気管内リポ多糖点滴
Summary
ここでは、非侵襲的中咽頭気管内挿管 を介した 気管内リポ多糖(LPS)送達のプロトコルを提案します。この方法は、動物の外科的処置の外傷を最小限に抑え、LPSを気管、次に肺に正確に送達します。
Abstract
リポ多糖(LPS)またはエンドトキシンによって誘導される急性肺損傷(ALI)マウスモデルは、急性肺損傷または急性炎症の動物実験において依然として最も一般的に使用されているモデルの1つです。急性肺損傷マウスモデルにおいて現在最も一般的に使用されている方法は、LPSの腹腔内注射とLPSの気管注入のための気管切開である。しかし、前者の方法は肺の標的化を欠いて他の臓器に損傷を与え、後者の方法は手術外傷、感染リスク、および低い生存率を誘発します。ここでは,マウスへのLPS点滴に対する非侵襲的中咽頭気管内挿管法を推奨する.この方法では、LPSは、気管内挿管のための装置の助けを借りて肺に点滴される口腔咽頭腔を通して気管に非侵襲的に導入される。この方法は、肺の標的化を保証するだけでなく、動物の損傷や死亡のリスクを回避します。このアプローチは、急性肺障害の分野で広く使用されるようになることが期待されます。
Introduction
急性肺損傷(ALI)は一般的な臨床症候群です。さまざまな病原性因子の下で、肺上皮細胞および血管内皮細胞の生理学的障壁の破壊は、肺胞透過性の増加をもたらし、それによって肺コンプライアンスの低下、肺水腫、および重度の低酸素血症を引き起こします1。急性呼吸窮迫症候群(ARDS)は、ALIの最も重篤な形態です。制御されていない炎症と酸化ストレス損傷は、ALIとより重篤なARDSの主な原因であると考えられています2。外傷により肺胞上皮細胞が直接傷害を受けると、肺胞マクロファージの炎症反応連鎖が活性化し、肺に炎症が起こります3。世界的には、年間300万人以上の急性ARDS患者がおり、集中治療室の入院の約10%を占めています。さらに、重症例の死亡率は46%と高い4,5,6。したがって、その病因を研究するためにALIの適切な動物モデルを確立する必要がある。マウスは、その気道がALI研究のためにヒトの気道をうまくシミュレートできるため、ALIの研究で最も一般的に使用される実験動物です。さらに、ALIは、大量の炎症性細胞浸潤、肺血管透過性の増加、および肺水腫として現れます。血清中の炎症性サイトカインおよび肺乾燥湿潤重量比の変化は、ALI7の程度を反映する。
現在、マウスにおけるLPS誘発ALIをモデル化するための主な方法には、鼻腔内および外科的気管挿管が含まれます8,9。今回,非侵襲的中咽頭挿管によりLPSを気管内に送達する新しい手法を提案する.この方法は、照明付き挿管器を使用してマウスの気管を見つけ、LPSを気管と肺に送達します。この方法は、鼻腔内送達法よりも正確にLPSを肺に送達する。外科的気管挿管と比較して、この方法は手術を必要とせず、創傷を引き起こすことを回避し、マウスの痛みを軽減する10。したがって、この方法は、ALIのより説得力のあるマウスモデルを確立するために使用することができる。
Protocol
Representative Results
Discussion
最初に、気管19の位置を見つけるために口腔内を調べました。しかし、この過程で、C57/BLマウスの気管が狭く、内視鏡20などの機器の助けを借りずにこの方法で正しい位置を見つけることが困難であることを発見しました。さらなる調査の結果、挿管器ランプからの光が体の表面を透過し、オペレータがカニューレ21の位置を決定すること?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
本研究は、中国国家自然科学基金会(第81903902号)、中国ポスドク科学基金会(第2019M663457号)、四川省科学技術プログラム(第2020年版)及び成都大学興林奨学生研究プレモーションプロジェクト(第QJRC2022053号)の支援を受けた。
Materials
| Lipopolysaccharide | MERK | L4130 | LPS |
| Microliter Syringes | SHANGHAI GAOGE INDUSTRY AND TRADE CO., LTD | 10028505008124 | To deliver LPS |
| Mouse cannula | RWD Life Science | 803-03008-00 | Mouse cannula |
| Mouse intubation kit | RWD Life Science | 903-03027-00 | Including a base, a riser, a intubator, a surgical forceps and some strings |
| Pasteur pipette | Biosharp life science | BS-XG-03 | To verify the success of intubation |
| Pentobarbital sodium | Beijing Chemical Co., China | 20220918 | To anesthetize mice |
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