Noninvasive Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation in Mice
Summary
여기에서 우리는 비침습적 구인두 기관내 삽관을 통한 기관내 지질다당류(LPS) 전달을 위한 프로토콜을 제안합니다. 이 방법은 동물에 대한 수술 절차의 외상을 최소화하고 LPS를 기관으로 정확하게 전달한 다음 폐로 전달합니다.
Abstract
지질다당류(LPS) 또는 내독소에 의해 유도된 급성 폐 손상(ALI) 마우스 모델은 여전히 급성 폐 손상 또는 급성 염증에 대한 동물 연구에서 가장 일반적으로 사용되는 모델 중 하나입니다. 급성 폐 손상 마우스 모델에서 현재 가장 일반적으로 사용되는 방법은 LPS의 복강내 주사 및 LPS의 기관 주입을 위한 기관 절개술이다. 그러나 전자의 방법은 폐 표적이 부족하고 다른 장기를 손상시키며, 후자의 방법은 수술적 외상, 감염 위험 및 낮은 생존율을 유발합니다. 여기서는 생쥐에 LPS 점적을 위한 비침습적 구인두 기관내 삽관 방법을 권장합니다. 이 방법에서, LPS는 구강 인두강을 통해 비 침습적으로 기관 내로 도입되어 기관 내 삽관을위한 장치의 도움으로 폐에 주입된다. 이 방법은 폐 표적화를 보장할 뿐만 아니라 동물의 손상 및 사망 위험을 방지합니다. 우리는 이 접근법이 급성 폐 손상 분야에서 널리 사용될 것으로 기대합니다.
Introduction
급성 폐 손상(ALI)은 흔한 임상 증후군입니다. 다양한 병원성 요인 하에서 폐 상피 세포와 혈관 내피 세포의 생리적 장벽이 파괴되면 폐포 투과성이 증가하여 폐 순응도 감소, 폐부종 및 중증 저산소혈증을 유발합니다1. 급성 호흡곤란 증후군(ARDS)은 ALI의 가장 심각한 형태입니다. 조절되지 않는 염증 및 산화 스트레스 손상은 ALI와 더 심각한 ARDS2의 주요 원인으로 간주됩니다. 외상으로 인해 폐포 상피세포가 직접 손상되면 폐포 대식세포의 염증 반응 사슬이 활성화되어 폐에 염증을 일으킨다3. 전 세계적으로 연간 300만 명 이상의 급성 ARDS 환자가 있으며 중환자실 입원의 약 10%를 차지합니다. 또한 중증의 경우 사망률은 46%4,5,6에 달합니다. 따라서 ALI의 발병기전을 연구하기 위해 적합한 ALI 동물모델을 확립할 필요가 있다. 마우스는 ALI 연구에서 가장 일반적으로 사용되는 실험 동물로, 호흡기가 ALI 연구를 위해 인간의 호흡기를 잘 시뮬레이션할 수 있기 때문입니다. 또한 ALI는 대규모 염증 세포 침윤, 폐혈관 투과성 증가 및 폐부종으로 나타납니다. 혈청 내 염증성 사이토카인의 변화와 폐 건습식 중량비는 ALI7의 정도를 반영한다.
현재, 마우스에서 LPS 유도 ALI를 모델링하는 주요 방법은 비강내 및 외과적 기관 삽관을 포함한다8,9. 여기에서 우리는 비침습적 구인두 삽관을 통해 LPS를 기관으로 전달하는 새로운 방법을 제안합니다. 이 방법은 조명 삽관기를 사용하여 마우스의 기관을 찾은 다음 LPS를 기관과 폐로 전달합니다. 이 방법은 비강 내 전달 방법보다 더 정확하게 LPS를 폐에 전달합니다. 외과적 기관 삽관과 비교하여, 이 방법은 수술을 필요로 하지 않고, 상처를 유발하는 것을 피하며, 생쥐의 통증을 감소시킨다10. 따라서 이 방법을 사용하여 보다 설득력 있는 ALI 마우스 모델을 구축할 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
처음에는 기관19의 위치를 찾기 위해 구강 내부를 조사했습니다. 그러나, 이 과정 동안, C57/BL 마우스의 기관이 좁아서, 내시경(20)과 같은 장비의 도움 없이는 이 방법으로 정확한 위치를 찾기가 어렵다는 것을 발견하였다. 추가 탐사를 통해 삽관 램프의 빛이 신체 표면을 관통하여 작업자가 캐뉼라(21)의 위치를 결정할 수 있음을 발견했습니다.<…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작업은 중국 국립 자연 과학 재단 (No.: 81903902), 중국 박사후 과학 재단 (No.: 2019M663457), 쓰촨 과학 기술 프로그램 (No.: 2020YJ0172) 및 청두 중의학 대학의 Xinglin Scholar Research Premotion Project(No.: QJRC2022053)의 지원을 받았습니다.
Materials
| Lipopolysaccharide | MERK | L4130 | LPS |
| Microliter Syringes | SHANGHAI GAOGE INDUSTRY AND TRADE CO., LTD | 10028505008124 | To deliver LPS |
| Mouse cannula | RWD Life Science | 803-03008-00 | Mouse cannula |
| Mouse intubation kit | RWD Life Science | 903-03027-00 | Including a base, a riser, a intubator, a surgical forceps and some strings |
| Pasteur pipette | Biosharp life science | BS-XG-03 | To verify the success of intubation |
| Pentobarbital sodium | Beijing Chemical Co., China | 20220918 | To anesthetize mice |
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