Caracterização comportamental de um modelo de camundongo com síndrome de Angelman

Resumo

Este manuscrito apresenta um conjunto de testes comportamentais altamente reprodutíveis para validar um modelo de camundongo com síndrome de Angelman.

Resumo

Este manuscrito descreve uma bateria de testes comportamentais disponíveis para caracterizar fenótipos semelhantes à síndrome de Angelman (SA) em um modelo murino estabelecido de EA. Usamos o paradigma de aprendizado de rotarod, análise detalhada da marcha e teste de construção de ninhos para detectar e caracterizar deficiências motoras em animais. Testamos a emocionalidade dos animais em campo aberto e testes de labirinto em cruz elevados, bem como o efeito no teste de suspensão de cauda. Quando camundongos SA são testados no teste de campo aberto, os resultados devem ser interpretados com cuidado, uma vez que disfunções motoras influenciam o comportamento de camundongos no labirinto e alteram os escores de atividade.

A reprodutibilidade e eficácia dos testes comportamentais apresentados já foi validada em várias linhagens independentes de camundongos Uba3a com diferentes variantes knockout, estabelecendo este conjunto de testes como uma excelente ferramenta de validação em pesquisas de EA. Modelos com validade de construto e de face relevantes justificarão novas investigações para elucidar a fisiopatologia da doença e propiciar o desenvolvimento de tratamentos causais.

Introdução

A síndrome de Angelman (SA) é uma doença rara do neurodesenvolvimento. A origem genética mais comum da EA é uma grande deleção da região 15q11-q13 do cromossomo materno, que é encontrada em quase 74% dos pacientes¹. A deleção dessa região causa a perda de UBE3A, o principal gene causador da EA que codifica uma ubiquitina ligase E3. O alelo paterno do gene UBE3A em neurônios é silenciado em um processo conhecido como imprinting. Como consequência, o imprinting paterno do gene permite apenas a expressão materna no sistema nervoso central (SNC)². Portanto, a deleção do gene UBE3A do cromossomo mat....

Protocolo

Todos os animais e experimentos utilizados neste estudo foram submetidos à revisão ética e conduzidos de acordo com a Diretiva Europeia 2010/63/UE. O estudo foi aprovado pela Comissão Central Checa para o Bem-Estar Animal. Os camundongos foram alojados em gaiolas ventiladas individualmente e mantidos a uma temperatura constante de 22 ± 2 °C com um ciclo claro/escuro de 12 horas. Os camundongos receberam ração e água ad libitum. Os camundongos foram alojados em grupos de três a seis animais por gaiola. Nenhuma manipulação além da pesagem foi realizada antes dos testes. Consulte a Tabela de Materiais para obter detalhes sobre todos os materiais....

Resultados

Testes de labirinto em cruz elevado e em campo aberto
Os testes de EPM e FO utilizam a tendência natural dos roedores em explorar novos ambientes^18,19. A exploração é regida por um conflito de abordagem-evitação, onde os roedores escolhem entre a exploração de um novo ambiente e evitar possíveis perigos. Os animais exploram lugares desconhecidos em busca de abrigo, contato social ou forrageamento. No entanto, novos locais podem envolver fatore.......

Discussão

Modelos de EA criados em diferentes linhagens murinas são comumente validados com testes de estado emocional, funções motoras e habilidades cognitivas de animais para facilitar a comparação com sintomas humanos^31,32. Um déficit motor em modelos de EA é o achado mais consistente entre os laboratórios, seguido por um estado de emocionalidade inalterado dos mutantes e dificuldades na construção de ninhos^31,32,33

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Gaiolas, ventiladas individualmente	Techniplast
DigiGait	Mouse Specifics, Inc., 2 Central Street Level Unit 110 Framingham, MA 01701, USA	O equipamento foi licitado, nenhum número de catálogo foi fornecido, nem pôde ser encontrado no site da empresa	Análise detalhada da marcha do mouse, hardware e software fornecidos.
FDA Nestlet squares	Datesand Ltd., 7 Horsfield Way, Bredbury, Stockport SK6, Reino Unido	O material foi comprado do fornecedor Velaz por meio de solicitação direta por e-mail. A Velaz não fornece nenhum número de catálogo.	Nestlets de algodão para teste de construção de ninhos. Descrição do ninho: 2-3 g cada, com diâmetro em torno de 5 x 5 x 0,5 cm.
Ração para ratos	Altramion
Rotarod	TSE Systems GmbH, Barbara-McClintock-Str.4 12489 Berlim, Alemanha	O equipamento foi licitado, nenhum número de catálogo foi fornecido, nem foi possível encontrar no site da empresa	Rotarod para 5 mouses, hardware e software fornecidos. Dimensões do tambor: Diâmetro: 30 mm, largura por pista: 50 mm, distância de queda 147 mm.
Teste de Suspensão de Cauda	Bioseb, In Vivo Research Instruments, 13845 Vitrolles FRANÇA	Referência: BIO-TST5	Equipamento totalmente automatizado para avaliação do tempo de imobilidade de 3 ratos pendurados pela cauda, hardware e software fornecidos
Fita médica Transpore	Medical M, Ltd.	P-AIRO1291	A fita usada para prender um animal ao anzol pela cauda.
Visualizador - Sistema de Rastreamento de Vídeo	Biobserve GmbH, Wilhelmstr. 23 A 53111 Bonn, Alemanha	Equipamentos com software foram licitados, nenhum número de catálogo foi fornecido, nem foi possível encontrar no site da empresa	Software com hardware personalizado: labirinto, base IR, câmeras sensíveis a IR. Dimensões OF feitas sob medida: 42 x 42 cm de área, parede de 49 cm de altura, área da zona central: 39 cm2. Um EPM feito sob medida foi elevado 50 cm acima do chão, com um braço aberto de 79 cm de comprimento,  9 cm de largura e braço fechado com 77 cm de comprimento, 7,6 cm de largura.