मक्के के पत्तों के प्रिमोर्डिया को गहराई से घेरा और लुढ़का जाता है, जिससे उनका अध्ययन करना मुश्किल हो जाता है। यहां, हम प्रतिदीप्ति और कॉन्फोकल इमेजिंग के लिए अनुप्रस्थ खंड तैयार करने और मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया के पूरे माउंट को अनरोल करने के तरीके प्रस्तुत करते हैं।
मक्का (ज़िया मेस) और अन्य घासों (पोएसी) में, पत्ती प्रिमोर्डिया को पत्ती के भीतर गहराई से घेरा और घुमाया जाता है, जिससे पत्ती के शुरुआती विकास का अध्ययन करना मुश्किल हो जाता है। यहां, हम प्रतिदीप्ति और कॉन्फोकल इमेजिंग के लिए अनुप्रस्थ वर्गों और मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया के पूरे माउंट तैयार करने के तरीकों का वर्णन करते हैं। पहली विधि पुरानी पत्तियों के ऊपरी हिस्सों को हटाने के लिए एक तार स्ट्रिपर का उपयोग करती है, पत्ती प्रिमोडियम की नोक को उजागर करती है और अधिक सटीक अनुप्रस्थ खंड नमूनाकरण के लिए इसके माप की अनुमति देती है। दूसरी विधि इमेजिंग के लिए पूरे पत्ती प्रिमोर्डिया को अनरोल और माउंट करने के लिए स्पष्ट, डबल-साइडेड नैनो टेप का उपयोग करती है। हम मक्का में फ्लोरोसेंट प्रोटीन संवाददाताओं की कल्पना और विश्लेषण में दो तरीकों की उपयोगिता दिखाते हैं। ये विधियां मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया की विशिष्ट आकृति विज्ञान द्वारा प्रस्तुत चुनौतियों का समाधान प्रदान करती हैं और मक्का और अन्य घास प्रजातियों में पत्ती शारीरिक और विकासात्मक लक्षणों की कल्पना और मात्रा निर्धारित करने के लिए उपयोगी होंगी।
घास की फसलें वैश्विक आबादीके लिए भोजन और जैव ईंधन का एक प्रमुख स्रोत हैं1, और पत्ती शरीर रचना में सुधार से उनकी उत्पादकता 2,3 बढ़ाने की क्षमता है। हालांकि, घास में पत्ती शरीर रचना विज्ञान को कैसे विनियमित किया जाता है, इसकी हमारी वर्तमानसमझ सीमित है और पत्ती प्रिमोर्डिया के विश्लेषण की आवश्यकता है, क्योंकि पत्ती के कई शारीरिक और शारीरिक लक्षण विकास में पूर्वनिर्धारित हैं 5,6,7. सेलुलर इमेजिंग तकनीक, जैसे फ्लोरेसेंस और कॉन्फोकल इमेजिंग, घास पत्ती शरीर रचना विज्ञान और सेलुलर लक्षणों का अध्ययन करने के लिए अपरिहार्य हैं, लेकिन इन तकनीकों को घास पत्ती प्रिमोर्डिया पर लागू करना मुश्किल है क्योंकि वे पत्ती के भीतर गहराई से घिरे और लुढ़के हुए हैं। हमने इस मुद्दे को अनुप्रस्थ वर्गों को तैयार करने के तरीकों को विकसित करके संबोधित किया और मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया के प्रतिदीप्ति और कॉन्फोकल विश्लेषण के लिए पूरे पत्ते के माउंट को अनरोल किया, जो घास पत्ती शरीर रचना विज्ञान और विकास का अध्ययन करने के लिए एक मॉडल प्रणालीहै।
मक्का की पत्ती, सभी घास की पत्तियों की तरह, एक पट्टे जैसी ब्लेड से बनी होती है, जिसमें एक म्यान होता है जो तने के चारों ओर लपेटता है और 9,10,11,12,13 का विकास करता है। पत्तियां शूट एपिकल मेरिस्टेम (एसएएम) से एक डिस्टिकस पैटर्न में विकसित होती हैं, जहां प्रत्येक नई पत्ती पिछली पत्ती के विपरीत स्थिति में शुरू होती है, जिसके परिणामस्वरूप ऊर्ध्वाधर अक्ष (चित्रा 1 ए)14 के साथ पत्तियों के दो रैंक होते हैं। प्रत्येक पत्ती प्रिमोडियम के विकास चरण को एसएएम के सापेक्ष इसकी स्थिति से पहचाना जाता है, जिसमें निकटतम प्रिमोडियम को प्लास्टोक्रोन 1 (पी 1) के रूप में नामित किया जाता है और निम्नलिखित प्रिमोर्डिया को पी 2, पी 3, और इसी तरह (चित्रा 1 बी, सी)2 के रूप में नामित किया जाता है। विकास के दौरान (चित्रा 1 डी), पत्ती प्रिमोडियम पहले एसएएम (पी 1) के आधार के चारों ओर अर्धचंद्राकार पुष्ट के रूप में दिखाई देता है, और फिर एक हुड के आकार के प्राइमोडियम में बढ़ता है जो मेरिस्टेम (पी 2) 9,10,11 पर फैला होता है। हुड के बेसल मार्जिन तब पार्श्व रूप से फैलते हैं और एक-दूसरे को ओवरलैप करते हैं क्योंकि नोक ऊपर की ओर बढ़ती है, जिससे शंकु के आकार का प्राइमोडियम (पी 3-पी 5)10 बनता है। प्रिमोडियम तब तेजी से लंबाई में बढ़ता है, और आधार पर शीथ-ब्लेड सीमा लिगुल के गठन के साथ अधिक प्रमुख हो जाती है, पत्ती के अक्षीय पक्ष (पी 6 / पी 7) पर फ्रिंज जैसा प्रक्षेपण। अंत में, स्थिर-अवस्था विकास के दौरान पत्ती खुलती है क्योंकि यह छिद्र से निकलती है, जिसमें विभाजित कोशिकाएं ब्लेड के छोटे बेसल क्षेत्र के भीतर प्रतिबंधित होती हैं, जिससे समीपस्थ-डिस्टल अक्ष (पी 7 / पी 8) 15 के साथ कोशिकाओं के विस्तार और अंतर के साथ एक ढाल बनती है। मक्का अंकुर के शूट एपेक्स में विकास के विभिन्न चरणों में कई प्रिमोर्डिया होते हैं, जिससे यह पत्ती के विकास का अध्ययनकरने के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल बन जाता है।
प्रारंभिक पत्ती के विकास के सटीक विश्लेषण के लिए अन्य विकास या रूपात्मक मापदंडों के संबंध में प्राइमोडियम विकास के अलग-अलग चरणों को परिभाषित करने के लिए स्टेजिंग या मानकीकृत मानदंडों के उपयोग की आवश्यकता होती है। चूंकि पत्ती प्रिमोर्डिया घास की शूटिंग के भीतर छिपी होती है, इसलिए जांचकर्ता आमतौर पर पौधे की उम्र या उभरती पत्तियों के आकार जैसे मापदंडों का उपयोग पत्ती प्रिमोर्डिया 9,16 के चरणों और आकारों के लिए भविष्यवाणियों के रूप में करते हैं। मक्का में, पौधे की कालानुक्रमिक आयु या तो रोपण या अंकुरण (डीएपी / डीएजी) 17,18 के बाद के दिनों की संख्या से निर्धारित की जाती है। वानस्पतिक अवस्था (वी चरण) को एक दृश्य कॉलर के साथ सबसे ऊपरी पत्ती द्वारा निर्धारित किया जाता है, ब्लेड और म्यान के बीच अक्षीय पक्ष पर एक पीली रेखा जो लिगुल और ऑरिकल्स की स्थिति से मेल खाती है, ब्लेड के आधार पर वेज के आकार के क्षेत्रों की एक जोड़ी (चित्रा 1 ए, बी) 17,19। 20 और 25 डीएजी के बीच, एसएएम एक पुष्पक्रम मेरिस्टेम में बदल जाता है औरनई पत्तियों का उत्पादन बंद कर देता है। मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया की वृद्धि दर पर्यावरण और पौधे के जीनोटाइप के आधार पर भिन्न हो सकती है। इस कारण से, पौधे की उम्र और उभरती पत्तियों का आकार पत्ती प्रिमोर्डिया के आकार की सटीक भविष्यवाणी नहीं कर सकता है; हालांकि, इन मापदंडों का उपयोग प्रयोगात्मक उद्देश्यों के लिए प्रिमोर्डिया चरणों और आकारों की सीमा की भविष्यवाणी करने में मदद कर सकता है।
अनुप्रस्थ खंड विश्लेषण मक्का और अन्य घासों में पत्ती शरीर रचना विज्ञान और विकास की जांच के लिए एक लोकप्रिय तरीका है क्योंकि यह शूट21,22,23 में एक ही खंड में कई प्लास्टोक्रॉन के नमूने की अनुमति देता है। यह विधि ताजा नमूनों की सेलुलर इमेजिंग के लिए भी सुविधाजनक है, क्योंकि आसपास की पत्तियां एक मचान के रूप में काम करती हैं जो सेक्शनिंग और माउंटिंग24 के दौरान लीफ प्रिमोर्डिया को जगह में रखती हैं। हालांकि, इस विधि का एक नुकसान यह है कि एक बरकरार शूट से अलग करते समय प्राइमोडियम के भीतर लक्ष्य प्लास्टोक्रोन और क्षेत्र का सटीक रूप से पता लगाना चुनौतीपूर्ण हो सकता है। इसके अलावा, क्योंकि पत्ती की वृद्धि प्लास्टोक्रोन में और समीपस्थ-डिस्टल अक्ष2,5 के साथ भिन्न होती है, इसलिए गलत नमूने के परिणामस्वरूप किसी दिए गए खंड में प्राइमोडियम के विकास चरण और क्षेत्र की गलत व्याख्या हो सकती है। इसलिए, घास पत्ती प्रिमोर्डिया के शारीरिक और विकासात्मक विश्लेषण की सटीकता और प्रजनन क्षमता सुनिश्चित करने के लिए सटीक अनुप्रस्थ अनुभाग नमूनाकरण के लिए एक विधि विकसित करना महत्वपूर्ण है।
होल-लीफ माउंट विश्लेषण ऊतक और सेलुलर प्रक्रियाओं की व्यापक और एकीकृत जांच को सक्षम बनाता है जो पूरे अंग के पैमाने पर होते हैं, जैसे कि प्रोलिफेरेटिव ग्रोथ25 और नसपैटर्निंग 26,27,28। विधि पत्ती का एक पैराडर्मल अवलोकन प्रदान करती है, जिससे अलग-अलग प्रक्रियाओं और पैटर्न की खोज होती है जो अन्यथा अनुप्रस्थ अनुभाग विश्लेषण24,27 का उपयोग करके पता लगाना मुश्किल होगा। एराबिडोप्सिस के विपरीत, जहां29,30 के पूरे पत्ते के माउंट की इमेजिंग के लिए पहले से ही स्थापित तरीके हैं, वर्तमान में घास में अनरोल्ड होल-लीफ माउंट की इमेजिंग के लिए कोई मानक विधि नहीं है। पृथक मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया को उतारने के लिए एक पिछले प्रोटोकॉल में असामान्य सामग्री शामिल थी और सेलुलर इमेजिंग31 के लिए उपयुक्त नहीं थी। उन्नत इमेजिंग तकनीक, जैसे कि कंप्यूटेड टोमोग्राफी (सीटी) और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई), प्रिमोर्डिया 11,32,33 को अलग और अनरोल किए बिना 3 डी शारीरिक जानकारी प्राप्त कर सकते हैं, लेकिन वे महंगे हैं और विशेष उपकरणों की आवश्यकता होती है। मक्का और अन्य घासों में पत्ती प्रिमोर्डिया के लुढ़के और शंक्वाकार आकृति विज्ञान द्वारा लगाए गए बाधाओं को दूर करने के लिए एक तकनीक विकसित करना उनके शारीरिक और विकासात्मक लक्षणों में जांच को आगे बढ़ाएगा।
यहां, हम प्रतिदीप्ति और कॉन्फोकल इमेजिंग के लिए अनुप्रस्थ खंड तैयार करने और मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया के पूरे माउंट को अनरोल करने के तरीके प्रस्तुत करते हैं। हमने इन तरीकों का उपयोग नस संख्या को मापने और फ्लोरोसेंट प्रोटीन (एफपी) 24 के साथ मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया में स्थानिक-अस्थायी हार्मोन वितरण को मैप करने के लिए किया। पहली विधि में तार स्ट्रिपर (चित्रा 1 ई) के साथ मक्का के पौधों से पुरानी पत्तियों के ऊपरी हिस्से को हटाना शामिल है। प्राइमोडियम (पी 5-पी 7) की नोक को उजागर करके, पुराने आसपास के पत्तों को पूरी तरह से हटाने के बिना इसकी लंबाई निर्धारित करना संभव हो जाता है, इस प्रकार आसान और सटीक सेक्शनिंग सक्षम होती है। दूसरी विधि में स्पष्ट, डबल-पक्षीय नैनो टेप (चित्रा 1 एफ) के साथ पूरे पत्ती प्रिमोर्डिया (पी 3-पी 7) को अनरोलिंग और माउंट करना शामिल है। ये विधियां विभिन्न एफपी24 की कल्पना करने के लिए उपयुक्त हैं, लेकिन फ्लोरोसेंट रंजक और समाशोधन अभिकर्मकों का उपयोग करने के लिए अनुकूलन की आवश्यकता है। इसके अलावा, हम इमेजजे / फिजी34 में चपटे जेड-स्टैक, सिलाई छवियों और विलय चैनलों के लिए कुछ प्रक्रियाओं की रूपरेखा तैयार करते हैं, जो दो तरीकों द्वारा उत्पादित छवियों पर लागू होते हैं। ये विधियां मक्का के पत्तों की नियमित प्रतिदीप्ति या कॉन्फोकल इमेजिंग के लिए उपयोगी हैं, लेकिन उन्हें अन्य मॉडल घास प्रजातियों, जैसे चावल, सेतारिया और ब्रैकीपोडियम के लिए भी अनुकूलित किया जा सकता है।
चित्र 1: मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया का संगठन और आकृति विज्ञान और विधियों का अवलोकन । (ए) मक्का अंकुर का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। मक्का में एक डिस्टिकस फाइलोटैक्सी होती है, जिसमें नई पत्ती पिछली पत्ती के विपरीत स्थिति में शुरू होती है। पत्ती संख्या कालानुक्रमिक क्रम को इंगित करती है जिसमें पत्तियां अंकुरण से उभरी हैं (यानी, पहली पत्ती, एल 1; दूसरी पत्ती, एल 2; तीसरी पत्ती, एल 3; आदि)। प्रत्येक पत्ती में एक डिस्टल ब्लेड और एक बेसल म्यान होता है जिसे एक कॉलर द्वारा चित्रित किया जाता है जो लिगुल और ऑरिकल से मेल खाता है। कॉलर के साथ सबसे ऊपरी पत्ती दिखाई देती है जो वनस्पति अवस्था को दर्शाती है। इस उदाहरण में अंकुर वी 2 चरण में है, जिसमें एल 2 कॉलर (तीर) दिखाई देता है। कैंची आइकन मेसोकोटिल (मी) में उस स्थान को इंगित करता है जहां अंकुर को एकत्र करने के लिए काटा जाना चाहिए। (बी) विच्छेदित शूट का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व जिसमें अलग-थलग एल 1 से एल 4 दिखाया गया है, जिसमें पत्ती प्रिमोर्डिया एल 5 से एल 9 को (सी) में एक बढ़ी हुई छवि के रूप में दिखाया गया है। प्लास्टोक्रोन संख्या एसएएम के सापेक्ष प्राइमोडियम की स्थिति को इंगित करती है, जिसमें सबसे कम उम्र की पत्ती प्रिमोडियम (पी 1) एसएएम के सबसे करीब है और पुरानी पत्ती प्रिमोर्डिया (पी 2, पी 3, पी 4, और इसी तरह) क्रमिक रूप से2 से दूर है। (डी) पी 1 से पी 5 तक मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया की आकृति विज्ञान का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। (ई) मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया के अनुप्रस्थ खंड विश्लेषण के लिए विधि का योजनाबद्ध अवलोकन। (1) पुरानी पत्तियों को तार स्ट्रिपर से ट्रिम करें। (2) प्राइमोडियम को मापें और शूट को सेक्शन करें। (3) इमेजिंग और प्रसंस्करण के लिए एक स्लाइड पर अनुभाग माउंट करें (4, 5). (च) मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया के पूरे-माउंट विश्लेषण के लिए विधि का योजनाबद्ध अवलोकन। (1) प्राइमोडियम निकालने के लिए आसपास की पत्तियों को हटा दें। (2) नैनो टेप पर प्राइमोडियम फ्लैट को काटें और अनरोल करें। (3) इमेजिंग और प्रसंस्करण के लिए नमूना माउंट करें (4, 5). संक्षेप: एल = पत्ती; बीएल = ब्लेड; एसएच = म्यान; सीओ = कॉलर; मी = मेसोकोटिल; वी = वानस्पतिक; पी = प्लास्टोक्रॉन; एसएएम = शूट एपिकल मेरिस्टेम। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
हम सेलुलर इमेजिंग के लिए मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया तैयार करने के लिए दो तरीके प्रस्तुत करते हैं। पहली विधि (प्रोटोकॉल खंड 2) अनुप्रस्थ खंड विश्लेषण के लिए प्रिमोडियम के माप की अनुमति देती है, जबकि दूसरी विधि (प्रोटोकॉल खंड 3) पूरे-माउंट विश्लेषण के लिए प्रिमोडियम के अनरोलिंग और चपटेपन को सक्षम बनाती है। ये विधियां मक्का पत्ती प्रिमोर्डिया24 (जैसा कि चित्र 4 और चित्रा 5 में दिखाया गया है) में एफपी की सेलुलर इमेजिंग की सुविधा प्रदान करती हैं और मक्का के पत्तों को विकसित करने की इमेजिंग की चुनौतियों के लिए सरल समाधान प्रदान करती हैं। प्रोटोकॉल खंड 2 विच्छेदन समय को कम करता है और केवल स्टेजिंग पैरामीटर9,16 पर निर्भर होने के बजाय सेक्शनिंग से पहले प्रिमोर्डिया को मापकर नमूना सटीकता में सुधार करता है। व्यावसायिक रूप से उपलब्ध नैनो टेप के साथ, प्रोटोकॉल खंड 3 मक्का में पूरे पत्ते के प्रिमोर्डिया की इमेजिंग की लंबे समय से चली आ रही समस्या को हल करता है। यह प्रोटोकॉल पिछली विधि पर सुधार करता है, जिसमें डायलिसिस ट्यूबिंग 31 का उपयोग किया गया था, और सीटी और एमआरआई11,32,33 का बहुत सस्ता विकल्प है। हालांकि, जब पत्ती शारीरिक लक्षणों को देखने और इष्टतम परिणाम उत्पन्न करने की बात आती है, तो दोनों प्रोटोकॉल की कुछ सीमाएं होती हैं, जिन्हें तालिका 2 में उल्लिखित किया गया है और नीचे अधिक विस्तार से चर्चा की गई है।
प्रोटोकॉल खंड 2 में, हमें पत्ती प्रिमोर्डिया के मोटे अनुप्रस्थ वर्गों में सेल की रूपरेखा को देखने में कठिनाई का सामना करना पड़ा, और सेल की दीवार- या प्लाज्मा झिल्ली-बाध्यकारी फ्लोरोसेंट रंगों के साथ काउंटरस्टेनिंग ने संतोषजनक परिणाम प्रदान नहीं किए। उदाहरण के लिए, एफएम 4-64 ने प्लाज्मा झिल्ली एफपी मार्कर की तुलना में उप-मानक परिणाम उत्पन्न किए, पी जेडएम पीआईपी 2-1::जेडएमपीआईपी 2-1: सीएफपी39 (पीआईपी 2-1-सीएफपी; चित्रा 3 ए-डी)। इस सीमा को दूर करने के लिए, हम पतले ऊतक वर्गों (~ 0.1 मिमी)58 का उत्पादन करने के लिए एक वाइब्रेटोम का उपयोग करने की सलाह देते हैं जो सेल की रूपरेखा की ज्वलंत उज्ज्वल-क्षेत्र इमेजिंग या काउंटरस्टेनिंग प्रोटोकॉल47,59 को अनुकूलित करने की अनुमति देगा।
प्रोटोकॉल खंड 3 में, मुख्य सीमा फाड़ने, क्षति, या हवा के बुलबुले के बिना पत्ती को ऊपर उठाने की कठिनाई है, जैसा कि प्रोटोकॉल चरण 3.2.5-3.2.6 (चित्रा 3 ई-के) में विस्तृत है। चूंकि मक्का का पत्ता द्विपक्षीय रूप से सममित होता है, इसलिए पूरे पत्ते वाले पर्वत के बजाय आधा पत्ती वाला पर्वत विज़ुअलाइज़ेशन9 के लिए पर्याप्त हो सकता है। ऐसा करने के लिए, प्राइमोडियम को अनुदैर्ध्य अक्ष के साथ रेजर ब्लेड से काटा जा सकता है, इसे मिडरिब तक घुमाने के बाद, पत्ती के केवल आधे हिस्से को लगाया जा सकता है। प्रोटोकॉल खंड 3 की एक और सीमा यह है कि पत्ती की मोटाई गहरी इमेजिंग के दौरान फ्लोरोफोरे सिग्नल के ऑप्टिकल रिज़ॉल्यूशन को सीमित कर सकती है। इस मुद्दे को हल करने के लिए, ऊतक समाशोधन तकनीक60 को नियोजित करना संभव है। हालांकि, हमने पाया कि ClearSee61, आमतौर पर पौधों के ऊतकों की इमेजिंग के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला समाशोधन अभिकर्मक, प्रोटोकॉल के साथ संगत नहीं है क्योंकि यह नमूना और कवरस्लिप को नैनो टेप से अलग करने का कारण बनता है। इस समस्या का एक संभावित समाधान पत्ती के नमूने पर एक अर्धपारगम्य झिल्ली31 लागू करना हो सकता है, जिससे इसे नैनो टेप द्वारा जगह पर रखते हुए समाशोधन समाधान के साथ इलाज किया जा सके। ऐसी विधि जो तरल समाधानों को अनरोल्ड पत्ती पर लागू करने की अनुमति देती है, का उपयोग सीटू संकरण और इम्यूनोलोकलाइजेशन तकनीकों में पूरे-माउंट आरएनए के लिए भी किया जा सकता है, जिन्हें पहले मक्का पुष्पक्रम विकसित करने के लिए अनुकूलित किया गया था, लेकिन पूरे पत्ती प्रिमोर्डिया62,63 के लिए नहीं।
हमने मक्का के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन किया, जिसमें अंकुर चरण में भी बड़ी पत्ती प्रिमोर्डिया है। चावल, जौ, गेहूं, सेतारिया और ब्रैकीपोडियम 16,23,64,65,66 जैसे बहुत छोटे पत्ती प्रिमोर्डिया के साथ अन्य घास प्रजातियों को इन प्रोटोकॉल को प्रभावी ढंग से लागू करने के लिए अतिरिक्त सटीक उपकरणों के उपयोग की आवश्यकता हो सकती है। इसके अलावा, ये प्रोटोकॉल लाइव सेल इमेजिंग के लिए अभिप्रेत नहीं थे, जो ऊतक गठन और सेलुलर प्रतिक्रियाओं की वास्तविक समय की गतिशील प्रक्रियाओं को कैप्चर करता है। हालांकि, जैसा कि फ्लोरोसेंट जांच, इमेजिंग प्रौद्योगिकियां और कंप्यूटिंग क्षमताएं पौधोंके लिए लाइव सेल इमेजिंग में आगे बढ़ रही हैं, भविष्य के शोध घास पत्ती प्रिमोर्डिया की अनूठी विशेषताओं के अनुरूप लाइव सेल इमेजिंग रणनीतियों को विकसित करने के लिए इन प्रोटोकॉल पर निर्माण कर सकते हैं।
The authors have nothing to disclose.
लेखक मक्का जेनेटिक्स कोऑपरेशन, मक्का सेल जीनोमिक्स प्रोजेक्ट, डेव जैक्सन (कोल्ड स्प्रिंग हार्बर लेबोरेटरी, एनवाई), ऐनी डब्ल्यू सिल्वेस्टर (समुद्री जैविक प्रयोगशाला, शिकागो विश्वविद्यालय, आईएल), एंड्रिया गैलावोटी (रटगर्स विश्वविद्यालय, एनजे), और कैरोलिन जी रासमुसेन (कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, रिवरसाइड) को उत्परिवर्ती और ट्रांसजेनिक स्टॉक प्रदान करने के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं। मिसौरी-कोलंबिया कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी के साथ उनकी सहायता के लिए। जेएमआर को जे विलियम फुलब्राइट फैलोशिप, द डायने पी और रॉबर्ट ई शार्प फंड और नेशनल साइंस फाउंडेशन के प्लांट जीनोम रिसर्च प्रोग्राम (आईओएस -1546873) द्वारा पीएम द्वारा समर्थित किया गया था। सीडीटीसी, ईडीसीडीपी और आरजेआरआर को डीओएसटी-एसईआई एस एंड टी अंडरग्रेजुएट स्कॉलरशिप द्वारा समर्थित किया जाता है। डीओडीएल फादर थॉमस स्टीनबुगलर एसजे अकादमिक छात्रवृत्ति द्वारा समर्थित है। आरजेआरआर को एडकेशन इंटरनेशनल-पाथवेज टू हायर एजुकेशन स्कॉलरशिप द्वारा समर्थित किया गया है। इस काम को स्कूल ऑफ साइंस एंड इंजीनियरिंग और रिजाल लाइब्रेरी, एटेनियो डी मनीला विश्वविद्यालय द्वारा समर्थित किया गया था।
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Glycerol | Thermo Scientific | PI17904 | 1 liter |
ImageJ/FIJI with EDF plugin (version 17.05.2021) and Grid/Collection Stitching plugin | National Institutes of Health (NIH) USA | version 2.9.0/1.54s | The EDF plugin was developed by Alex Prudencio, Jesse Berent, and Daniel Sage for the Biomedical Imaging Group, École Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL; http://bigwww.epfl.ch/demo/edf/). The grid/collection stitching software was developed by Stephan Preibisch for the Max Planck Institute of Molecular Cell Biology and Genetics (MPI-CBG). |
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