Embriões de vespas Nasonia foram dissecados de pupas de Lucillia sericata após parasitização por 12-24 h e lavados com álcool e solução de hipoclorito de sódio a 10% para obtenção de embriões livres de germes. Após a criação dos embriões livres de germes e fornecimento de meio de criação de Nasonia para crescimento e desenvolvimento in vitro, adultos de Nasonia livres de germes foram obtidos.
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Artigo de método
Otimizando o procedimento de criação de vespas livres de germes
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Neste artigo
Resumo
Resumo
A tecnologia de criação asséptica é um método de cultivo de insetos em condições estéreis ou quase estéreis, que pode efetivamente eliminar a influência de microrganismos externos na microbiota de insetos e, assim, promover o rápido desenvolvimento da pesquisa da microbiota de insetos. Nasonia (gênero vespa) é um inseto vespa parasita que tem muitas vantagens, como uma vida curta, alta variação genética, fácil operação, etc., e é amplamente utilizado como um sistema modelo de insetos. Ao contrário do tratamento com antibióticos, que só pode reduzir o número de microrganismos em animais, as técnicas de criação asséptica podem controlar tanto a composição quanto a quantidade de microrganismos em animais, facilitando ainda mais o estudo das interações hospedeiro-micróbio. No entanto, as versões anteriores do meio de criação Nasonia (NRM) têm alguns defeitos e problemas, como um processo de preparação complexo e demorado, fácil contaminação por bactérias ou fungos e curto tempo de armazenamento. Portanto, este estudo resolve esses problemas otimizando as ferramentas usadas no processo de preparação da NRM, as condições de armazenamento e as proporções de componentes. O meio otimizado pode permitir o armazenamento a -20 °C por pelo menos 3 meses e eliminar a possibilidade de contaminação por NRM durante a alimentação de vespas estéreis. Isso melhora ainda mais a taxa de sobrevivência e o nível de saúde da nasonia asséptica, que é importante para o uso de Nasonia como um modelo para a pesquisa microbiana.
Introdução
Animais livres de germes são animais que não apresentam microrganismos vivos e parasitas detectáveis1. Embriões livres de germes podem ser obtidos dissecando a mãe em condições assépticas e posteriormente criados em sistemas de barreira2. Esses animais podem ser utilizados para estudar os efeitos de microrganismos em animais, como na microbiota intestinal, no sistema imunológico e no metabolismo1. Com certos meios técnicos, muitos insetos e até mamíferos podem se tornar estéreis 3,4. Animais livres de germes têm um pa....
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Protocolo
1. Preparação de meio de criação de Nasonia livre de germes
- Coloque as pupas de L. sericata disponíveis comercialmente (ver Tabela de Materiais) em uma superfície que possa acomodar todas as pupas, como uma bandeja ou uma folha de papel. Descarte quaisquer larvas subdesenvolvidas, pupas velhas escuras, conchas de pupas vazias, serragem ou outras impurezas. Mantenha apenas pupas jovens de cor vermelho-acastanhada e transfira-as para um copo (aproximadamente 3.000-4.000 pupas).
NOTA: Depois de realizar muitos experimentos, descobriu-se que o meio feito a partir das pupas velhas escuras fa....
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Resultados
A eficiência de preparação do NRM foi muito melhorada através da melhoria das ferramentas de preparação. Além disso, o problema da poluição por NRM no processo de alimentação foi eliminado otimizando a estratégia e o método de preservação. Ao mesmo tempo, o MRN ajustado apresentou uma razão nutricional mais adequada para o crescimento e desenvolvimento de vespas livres de germes com L. sericata como hospedeiros. A taxa de sobrevivência de vespas livres de germes de larvas para pupas foi significativamente melhor.......
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Discussão
Com a aplicação de tecnologias de detecção de alto rendimento, como genômica e metabolômica, os pesquisadores gradualmente perceberam que há uma enorme diversidade genética e complexidade metabólica na microbiota intestinal16. Essas bactérias simbióticas estão intimamente relacionadas a vários estados fisiológicos ou patológicos, como metabolismo nutricional do hospedeiro, tumores, imunidade e envelhecimento por meio de interações complexas com o hospedeiro17. No entanto, a.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Financiamento: este trabalho foi apoiado pela National Science Foundation of China (32270538), pelo National Key R&D Program of China (2022YFF0710603), pela Natural Science Foundation of Beijing (6222046) e pelo financiamento estratégico do CAS através do esquema de financiamento CAS-CSIRO (152111KYSB20210011) concedido a G.H.W. Contribuições dos autores: todos os autores desenvolveram o escopo e o foco da revisão e contribuíram para a redação do manuscrito.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 0,22 Filtro de vácuo estéril | NEST | 331011 | |
| 10% de hipoclorito de sódio | LIRCON | XB-84BS-1 | |
| 1x solução PBS | Solarbio | P1020 | |
| Rede de nylon de 200 mesh | BIOBYING | BY-378Z | |
| 24 placa de poço | NEST | 702001 | |
| 8, 1,2, 0,8 e 0,45 µ Filtros | m Shanghai Xingya Fábrica de Material de Purificação | HN-AA-JT-10079 | |
| Álcool etílico absoluto | Macklin | E809057-500ml | |
| Filtro de células | BIOLOGIX | 15-1100 | |
| Drosophila comercial Médio | Boer | B645446-500ml | |
| Agulha de dissecação | Bioroyee | 17-9140 | |
| Espremedor | de alhoTaobao | Sem números de catálogo | Compre em Taobao |
| Lucillia sericata pupae | Hefei Dayuan Biotechnology Co., Ltd. | Sem números de catálogo | Compre no Taobao |
| Pincel de escrita pequeno | Cestidur | BL0508 | |
| Estereoscópio | SOPTOP | RX50 | |
| Pinças | SALMART | A109001-56 |
Referências
- Diviccaro, S., et al. Exploring the impact of the microbiome on neuroactive steroid levels in germ-free animals. International Journal of Molecular Sciences. 22 (22), 12551(2021).
- Pang, X., et al. Inter-specie....
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Reimpressões e permissões
