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Artigo de método

Modelo de Infecção por Candida albicans Relacionada a Cateter em Camundongos

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DOI:

10.3791/65307

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22 de março de 2024

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Neste artigo

Resumo

Estabelecemos um modelo murino de infecção relacionada ao cateter (IRC) associada a C.albicans, no qual o biofilme se forma no cateter, e a interação entre C.albicans e hospedeiro correlaciona-se bem com a IRC clínica. Esse modelo ajuda a selecionar terapias para IRC associada ao biofilme de C.albicans , estabelecendo uma base para a transformação clínica.

Resumo

A infecção relacionada ao cateter (IRC) é uma infecção nosocomial comum causada por candida albicans durante o implante do cateter. Tipicamente, biofilmes são formados na superfície externa do cateter e levam a infecções disseminadas, que são fatais para os pacientes. Não há prevenção e manejo de tratamento efetivos nas clínicas. Portanto, é urgente o estabelecimento de um modelo animal de IRC para a triagem pré-clínica de novas estratégias para sua prevenção e tratamento. Neste estudo, um cateter de polietileno, um cateter médico amplamente utilizado, foi inserido no dorso dos camundongos BALB/c após a depilação. Candida albicans ATCC MYA-2876 (SC5314) expressando proteína fluorescente verde reforçada foi subsequentemente inoculado na superfície da pele ao longo do cateter. Intensa fluorescência foi observada na superfície do cateter sob microscópio fluorescente 3 dias depois. Biofilmes maduros e espessos foram encontrados na superfície do cateter por microscopia eletrônica de varredura. Esses resultados indicaram a adesão, colonização e formação de biofilme de candida albicans na superfície do cateter. A hiperplasia da epiderme e a infiltração de células inflamatórias nos espécimes cutâneos indicaram as alterações histopatológicas da pele associada à IRC. Em resumo, um modelo de CRI de camundongo foi estabelecido com sucesso. Espera-se que esse modelo seja útil na pesquisa e desenvolvimento do manejo terapêutico da IRC associada a candida albicans .

Introdução

Nos últimos anos, com o desenvolvimento e aplicação de materiais biomédicos, infecções relacionadas a implantes vêm emergindo como problemas clínicos difíceis 1,2. Com a ampla aplicação de cateteres médicos em clínicas, o número de infecções e mortes relacionadas é enorme a cada ano 3,4. As vias de infecção comuns de uma infecção relacionada ao cateter (IRC) incluem: (1) patógenos na superfície da pele infiltram-se no corpo e aderem à superfície externa do cateter 5,6,7

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Protocolo

Os animais experimentais, camundongos BALB/c machos (12-16 g), foram adquiridos no Laboratory Animal Center, Xi'an Jiaotong University Health Science Center. Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Ética Animal da Universidade Xi'an Jiaotong com o número de licença SCXK (Shaanxi) 2021-103.

1. Preparação do tampão e do equipamento

  1. Transfect cepas de C. albicans com plasmídeo de alta expressão pCaExp.
    1. Compre C. albicans (SC5314) da ATCC. Obter a cepa fluorescente de alta expressãoEGFP 22 transfectando C. albicans com um plasmídeo d....

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Resultados

A C. albicans e os biofilmes nos cateteres puderam ser observados pela MEV. Como mostrado na Figura 322, a superfície dos cateteres de polietileno do grupo de cateteres era lisa e nenhum microrganismo patogênico aderido foi observado. Entretanto, biofilmes maduros e densos de C. albicans foram visíveis na superfície dos cateteres de polietileno do grupo modelo, indicando que C. albicans foi capaz de colonizar e formar biofilmes na superfície.......

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Discussão

A IRC é uma das infecções hospitalares mais comuns na práticaclínica23. Patógenos nos anexos cutâneos, como epiderme, glândulas sebáceas e folículos pilosos, são possíveis causas de IRC23,24. A Candida é o terceiro maior patógeno causador da IRC, sendo a Candida albicans o tipo mais comum de infecção por biofilme25,26. Portanto, nosso objetivo foi construir um mod.......

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Divulgações

Os autores declaram não ter interesses financeiros ou relações pessoais concorrentes conhecidos que possam ter influenciado o trabalho relatado neste artigo.

Agradecimentos

Somos gratos pelo apoio financeiro da Fundação de Ciências Naturais da Província de Shaanxi (número de concessão 2021SF-118) e da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (números de concessão 81973409, 82204631).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
0,5 Mactutrius turbidibrisShanghai Lujing Technology Co., Ltd5106063
solução fixadora de glutaraldeído a 2,5%Xingzhi Biotechnology Co., LtdDF015
4 ° Refrigerador de CElectrolux (China) Co. elétrico, LtdESE6539TA
o ágarBeijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd01-023
Balanças analíticasShimadzuATX124
Autoclaves EsterilizadorSANYOMLS-3750
ButanolTianjin Chemio Reagent Co., Ltd200-889-7
CarbenicilinaMicroscópio óptico vertical AmrescoC0885
Eclipse Ci Nikon NikonEclipse Ts2-FL
GlicoseMacklin 
anel de inoculaçãoThermo Scientific251586
IsofluranoRWD20210103
ParaformaldeídoBeyotime BiotechnologyP0099
Kit de corante PASServicebioG1285
PeptoneBeijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd01-001
Cateter de polietilenoShining Plastic MallPE100
RWD R550 RWDR550
SEMHitachiTM-1000
Incubadora de TemperaturaShanghai Zhichu Instrument Co., LtdZQTY-50N
Gerador de água ultrapuraHeal ForceNW20VF
Máquina de ultrassomDo-ChromDS10260D
XyleneSinopharm  Chemical Reagent Co., Ltd10023428
Extrato de leveduraThermo Scientific  OxóideLP0021B
D823520 Máquina de anestesia multicanal para pequenos animais

Referências

  1. Kojic, E. M., Darouiche, R. O. Candida infections of medical devices. microbiology reviews. 17 (2), 255-267 (2004).
  2. Giri, S., Kindo, A. J. A review of Candida species causing blood stream infection. Indian Journal of Medical Microbiology. 30 (3), 270-278 (20....

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Reimpressões e permissões

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