एक तीन-चैनल दोहरे रिपोर्टर प्रतिदीप्ति प्रवाह विश्लेषण प्रणाली का उपयोग मनका-आधारित मल्टीप्लेक्स इम्यूनोसे विकसित करने के लिए किया गया था जो एक साथ आईजीजी और आईजीएम के लिए सीरम नमूनों का मूल्यांकन करता है जो विभिन्न बोरेलिया प्रजातियों के कई एंटीजन के खिलाफ प्राप्त होता है जो यूरोप और उत्तरी अमेरिका में लाइम बोरेलीओसिस का कारण बनता है।
संक्रामक रोगों की प्रगति की निगरानी करने के लिए, विभिन्न एंटीजेनिक निर्धारकों के खिलाफ इम्यूनोरिएक्टिविटी का आकलन करना और विभिन्न एंटीबॉडी आइसोटाइप को मापना उपयोगी है क्योंकि वे मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के विभिन्न चरणों में दिखाई देते हैं। लाइम बोरेलीओसिस के साथ, रोगजनक एजेंट बोरेलिया प्रजातियों के कई सदस्यों में से एक हो सकता है। इसलिए, सही नमूना वर्गीकरण के लिए विभिन्न बोरेलिया प्रजातियों के विभिन्न एंटीजन के खिलाफ इम्यूनोरिएक्टिविटी का मूल्यांकन करने की आवश्यकता होती है। इसके अतिरिक्त, रोगज़नक़ विरोधी आईजीजी और आईजीएम प्रतिक्रियाओं में रोग की प्रगति के दौरान अलग-अलग उन्मूलन समय पाठ्यक्रम हो सकते हैं। यहां हम एक दो-रिपोर्टर मल्टीप्लेक्स इम्यूनोसे के विकास को प्रदर्शित करते हैं जो एक ही प्रतिक्रिया में विभिन्न जीवाणु एंटीजन के खिलाफ आईजीजी और आईजीएम इम्यूनोरिएक्टिविटी दोनों का मूल्यांकन करके मानव सीरम नमूनों में बोरेलिया-विशिष्ट प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की पहचान करने में उपयोगिता है। यह दोहरी-रिपोर्टर दृष्टिकोण समय और संसाधनों के संरक्षण और नमूना आकार की आवश्यकताओं को कम करते हुए एकल-रिपोर्टर विधियों के विश्लेषणात्मक प्रदर्शन को बरकरार रखता है। यह परख अनिवार्य रूप से आधे समय में रक्त के नमूने से उत्पन्न होने वाली सीरोलॉजिकल जानकारी को दोगुना करने की अनुमति देता है।
लाइम बोरेलीओसिस उत्तरी गोलार्ध 1 के मध्यम जलवायु में सबसे आम टिक-जनित संक्रामक रोगहै। यह जीनस बोरेलिया के स्पाइरोचेट बैक्टीरिया के कारण होता है, जिसमें पांच ज्ञात मानव रोगजनकों होते हैं जो भौगोलिक वितरण2 में भिन्न होते हैं। यूरोप में मुख्य रोगजनक बोरेलिया प्रजातियां हैं बी. अफजेली तथा बी. गारिनी, साथ ही बी. बर्गडोरफेरी एस.एस., बी. स्पीलमानी तथा बी. बवेरेंसिस कम बार फंसाया जाता है। उत्तरी अमेरिका में, B. burgdorferi s.s. लाइम बोरेलीओसिस 2,3 का एकमात्र प्रेरक एजेंट है। बोरेलिया रोगजनकों को टिक जीनस Ixodes के सदस्यों द्वारा प्रेषित किया जाता है, जिसमें टिक काटने के 24 घंटों के भीतर संचरण होता है4.
लाइम बोरेलीओसिस निदान आमतौर पर नैदानिक लक्षणों द्वारा किया जाता है और बाद में सीरोलॉजी द्वारा पुष्टि की जाती है। यूरोप और उत्तरी अमेरिका दोनों में, नैदानिक दिशानिर्देश एक दो-चरणीय परीक्षण श्रृंखला की सिफारिश करते हैं जिसमें एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) शामिल है, जिसमें बोरेलिया विशिष्ट एंटीजन 1,5,6,7,8,9 के खिलाफ एंटीबॉडी प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करने के लिए एक रिफ्लेक्स इम्यूनोब्लॉट है . हालांकि, इस दृष्टिकोण में संवेदनशीलता का अभाव है और यह उप-इष्टतम है, विशेष रूप से संक्रमण के शुरुआती चरण में जब सेरोकोनवर्जन अधूरा हो सकता है और एंटी-बोरेलिया आईजीजी और आईजीएम टाइटर्स बहुत कम हैं6.
मल्टीप्लेक्स इम्यूनोएसे पारंपरिक इम्यूनोसे पर सुधार करते हैं जो एक समय में केवल एक लक्ष्य को मापते हैं, और एक साथ एक या अधिक एंटीजन10,11,12के खिलाफ कई एंटीबॉडी आइसोटाइप प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन कर सकते हैं। एलिसा जैसे परख प्रति प्रतिक्रिया एक एकल विश्लेषण की पहचान करने और मात्रा निर्धारित करने तक सीमित हैं, वर्तमान मामले में या तो आईजीजी या आईजीएम को बोरेलिया के संक्रमण के बाद एक एकल जीवाणु प्रतिजन के खिलाफ प्रेरित किया जाता है। यह रिपोर्ट एक मल्टीप्लेक्स इम्यूनोसे के विकास के लिए मनका-आधारित विश्लेषण प्रोफाइलिंग तकनीक का उपयोग करके दिखाती है जो एक साथ मानव सीरम नमूनों में यहां चुने गए बोरेलिया एंटीजन में से किसी के खिलाफ आईजीजी और आईजीएम एंटीबॉडी दोनों का पता लगाती है। हमने चार एंटीजन का चयन किया जो एक साथ यूरोप में मूल निवासी सबसे आम रोगजनक बोरेलिया प्रजातियों को कवर करते हैं (बी। गारिनी, बी. अफजेली, बी. बर्गडोरफेरी एस.एस.) और उत्तरी अमेरिका (बी। (तालिका 1) 2,3. यह निर्णायक रोगज़नक़ पहचान और रोगी के नमूनों में प्रारंभिक आईजीएम और बाद में, अधिक टिकाऊ, आईजीजी इम्यूनोरिएक्टिविटी को समझने की क्षमता की अनुमति देता है।
लक्ष्य आइसोटाइप | रिपोर्टर चैनल | प्रतिजन | बोरेलिया प्रजाति | मोच | एंटीजन युग्मन एकाग्रता |
आईजीएम | शारीरिक शिक्षा | ओएसपीसी | B. गरिनि | 20047 | 5.0 μg/106 मोती |
आईजीजी | बीवी421 | वीएलएसई | B. बर्गडोरफेरी एस.एस | बी31 | 1.25 μg/106 मोती |
आईजीजी | बीवी421 | डीबीपीए | B. बर्गडोरफेरी एस.एस. | जेडएस7 | 10.0 μg/106 मोती |
आईजीजी | बीवी421 | डीबीपीए | B. अफजेली | पीकेओ | 5.0 μg/106 मोती |
तालिका 1: मल्टीप्लेक्स परख विकास के लिए उपयोग किए जाने वाले प्रतिनिधि बोरेलिया एंटीजन।
हमने शुरू में एक एकल-रिपोर्टर इम्यूनोसे विकसित किया जिसने दो अलग-अलग प्रतिक्रियाओं में एंटी-बोरेलिया एंटीजन आईजीजी या आईजीएम एंटीबॉडी का पता लगाया और फिर इन परखों को एक दोहरे रिपोर्टर मल्टीप्लेक्स परख में विलय कर दिया जो एक ही प्रतिक्रिया मिश्रण में दोनों एंटीबॉडी आइसोटाइप को मापता है। चुंबकीय मोती ब्याज की एक रोगज़नक़ लक्ष्य प्रतिजन करने के लिए युग्मित कर रहे हैं, और फिर रोगी सीरम नमूने के साथ ऊष्मायन कर रहे हैं. मनका-युग्मित एंटीजन द्वारा पहचाना जाता है, और कैप्चर करता है, दोनों सीरम में आईजीजी और आईजीएम को प्रसारित करते हैं जो उस रोगज़नक़ एंटीजन के खिलाफ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में उत्पन्न होता है। परख आईजीजी बनाम आईजीएम विशिष्टता एक माध्यमिक एंटीबॉडी के चयन से निर्धारित होती है जो आईजीजी या आईजीएम को बांधती है, प्रत्येक दो माध्यमिक एंटीबॉडी से जुड़े एक अलग फ्लोरोफोर सिग्नल के साथ। प्रत्येक फ्लोरोसेंट सिग्नल का पता उपकरण के दो रिपोर्टर चैनलों (यानी, दोहरे रिपोर्टर) में से एक में लगाया जाता है, जिसमें आईजीजी या आईजीएम (यहां ब्रिलियंट वायलेट 421 या फाइकोएरिथ्रिन क्रमशः) का पता लगाने के लिए उपयोग किए जाने वाले एकल फ्लोरोफोर के लिए एक अलग उत्तेजना लेजर और उत्सर्जन कैप्चर विशिष्ट होता है। साधन वर्गीकरण चैनल रंग-कोडित डाई की पहचान करता है जो विभिन्न मनका सेट में निहित है। इस प्रकार, कई लक्ष्य एंटीजन को अलग-अलग रंगे मोतियों के साथ जोड़ा जा सकता है, और मनका सेट एक साथ मिश्रित होते हैं और सीरम नमूनों में विविध एंटी-रोगज़नक़ इम्यूनोरिएक्टिविटी का व्यापक आकलन करने के लिए उपयोग किए जाते हैं। वर्गीकरण चैनल प्रत्येक व्यक्ति मनका सेट (यानी, विशिष्ट प्रतिजन) की पहचान करता है और उस प्रतिजन के खिलाफ आईजीजी या आईजीएम से जुड़े प्रतिदीप्ति को मापता है। परिणामी मल्टीप्लेक्स परख कम व्यापक शास्त्रीय परीक्षण बनाम समय और संसाधनों को बचाता है और सीमित नमूना संस्करणों में लाइम इम्यूनोएक्टिविटी को सटीक रूप से सूचीबद्ध करता है। जबकि एक समान दोहरे रिपोर्टर दृष्टिकोण का उपयोग पहले SARS-CoV-2 संक्रमण13 जैसे अन्य विकृति में प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को वर्गीकृत करने के लिए किया गया है, इस रिपोर्ट में लाइम बोरेलीओसिस में इम्यूनोरिएक्टिविटी को चिह्नित करने के लिए मल्टीप्लेक्स फ्लोरोसेंट परख तकनीक के अनुप्रयोग का विवरण दिया गया है।
इस रिपोर्ट में एक दो रिपोर्टर मनका आधारित Borrelia immunoassay है कि प्रजनन योग्य और संवेदनशील सीरम नमूने12 में विरोधी Borrelia immunoreactivity निर्धारित करता है के विकास पर प्रकाश डाला गया. लाइम बोरेलीओसिस का कारण बनने वाली विभिन्न रोगजनक बोरेलिया प्रजातियों को संस्करण-विशिष्ट एंटीजन विषमता 6,7,8,9 द्वारा विभेदित किया जा सकता है। मल्टीप्लेक्स परख समवर्ती रूप से आईजीजी- और आईजीएम-मध्यस्थता एंटी-बोरेलिया इम्यूनोरिएक्टिविटी का मूल्यांकन एक ही प्रतिक्रिया के भीतर अच्छी तरह से करता है, जिससे अभिकर्मकों, श्रम और नमूना सामग्री का संरक्षण होता है अन्यथा दो सिंगलप्लेक्स परख अलग-अलग करने की आवश्यकता होती है। समय के साथ आईजीएम और आईजीजी प्रतिक्रियाओं की तुलना करने से रोग की प्रगति की बेहतर ट्रैकिंग की अनुमति मिल सकती है क्योंकि संक्रमण6 के बाद आईजीएम-टू-आईजीजी सेरोकोनवर्जन होता है।
दोहरी रिपोर्टर प्रणाली दो अलग पहचान एंटीबॉडी सिस्टम13,15 का उपयोग करता है. संबंधित प्रयोगों Borrelia विरोधी आईजीएम और विरोधी आईजीजी पहचान प्रणाली के बीच कोई महत्वपूर्ण detectable पार प्रतिक्रियाशीलता का प्रदर्शन किया जब दोनों एंटीबॉडी वर्गों एक ही प्रतिक्रिया अच्छी तरह से12 में एक साथ विश्लेषण किया गया. आईजीएम बनाम आईजीजी एंटीबॉडी16,17 के कम बाध्यकारी संबंध को ध्यान में रखते हुए, हम पीई नियमित रूप से immunoassays18 में इस्तेमाल किया सबसे मजबूत उत्सर्जक fluorophores में से एक है क्योंकि आईजीएम का पता लगाने (दोहरे रिपोर्टर साधन के पहले रिपोर्टर चैनल) के लिए एक पीई संयुग्मित पहचान एंटीबॉडी चुना. आईजीजी मूल्यांकन के लिए, हमने एक बायोटिनिलेटेड डिटेक्शन एंटीबॉडी का उपयोग किया जिसे बाद में बीवी421-संयुग्मित स्ट्रेप्टाविडिन (उपकरण का दूसरा रिपोर्टर चैनल)19के साथ प्रकाशित किया गया था। एकल-रिपोर्टर प्रणाली की तुलना में अतिरिक्त 30 मिनट इनक्यूबेशन कदम के बावजूद, दोहरी-रिपोर्टर प्रणाली प्रति प्रतिक्रिया से दोगुनी जानकारी देती है। कुल मिलाकर, दोहरे रिपोर्टर मल्टीप्लेक्स परख को दो एकल-रिपोर्टर परख चलाने की तुलना में कम संचयी समय और सामग्री इनपुट की आवश्यकता होती है।
मल्टीप्लेक्स बोरेलिया परख के मजबूत प्रदर्शन और स्थिरता को इंट्रा- और इंटर-परख सटीक अध्ययनों में उच्च प्रजनन क्षमता द्वारा उदाहरण दिया गया था, और आईजीजी और आईजीएम मूल्यांकन दोनों के लिए नमूना सांद्रता की एक विस्तृत श्रृंखला पर कमजोर पड़ने की रैखिकता और कमजोर पड़ने की समानता के प्रदर्शन द्वारा। हमने एकल-चैनल उपकरण बनाम दोहरे चैनल प्रणाली (≈1.7× पीई के साथ उच्चतर) का उपयोग करके एक ही फ्लोरोफोर्स के लिए उच्च पूर्ण प्रतिदीप्ति उत्सर्जन स्तर देखा, जो दो उपकरणों (चित्रा 4) के बीच प्रकाशिकी और अंशांकन सेटिंग्स में अंतर के कारण है। बहरहाल, दोनों फ्लोरोफोर्स के साथ प्रतिदीप्ति उत्सर्जन घटता उच्च और निम्न नमूना कमजोर पड़ने चरम सीमाओं पर दोनों उपकरणों की रैखिक सीमा के भीतर बने रहे, और मापा गया पूर्ण प्रतिदीप्ति में कोई विसंगति बोरेलिया एक्सपोजर स्थिति के वर्गीकरण को प्रभावित नहीं करती है। 12
इस मनका आधारित Borrelia मल्टीप्लेक्स परख का एक प्रमुख लाभ आसानी है जिसके साथ परख संशोधित या अलग या अतिरिक्त विश्लेषण का मूल्यांकन करने के लिए विस्तार किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, आगे Borrelia प्रजातियों के antigens के खिलाफ एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए. xMAP चुंबकीय मनका सेट साधन के वर्गीकरण चैनल में प्रतिष्ठित किया जा सकता है कि अलग डाई संयोजन होते हैं और सैद्धांतिक रूप से एक ही नमूने के भीतर 500 अद्वितीय विश्लेषण करने के लिए समवर्ती मूल्यांकन कर सकते हैं कि मल्टीप्लेक्स परख में लागू किया जा सकता है. जबकि वर्तमान अध्ययन परख कार्यक्षमता और स्थिरता का प्रदर्शन करने के लिए और एकल और दोहरे रिपोर्टर प्रणाली की तुलना करने के लिए चार प्रतिनिधि Borrelia प्रतिजनों पर प्रकाश डाला गया, अंतिम परख एक साथ यूरोप और उत्तरी अमेरिका12 भर में घूम सभी पांच नैदानिक प्रासंगिक Borrelia रोगजनकों की पहचान कर सकते हैं कि आठ antigens पूछताछ.
अर्ध-स्वचालित परख प्रारूप में मानक 384-अच्छी तरह से माइक्रोटिटर प्लेटों का उपयोग करके उच्च-थ्रूपुट प्रदर्शन संभव है। दोनों 96- और 384 अच्छी तरह से प्लेटों के साथ परख और साधन संगतता Borrelia मल्टीप्लेक्स परख तेजी से राष्ट्रीय अध्ययन20 के रूप में बड़े नमूना सेट का विश्लेषण करने के लिए एक कुशल स्क्रीनिंग उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया जा करने की अनुमति देता है. परख के मैनुअल प्रदर्शन छोटे 96 अच्छी तरह से प्लेटों का उपयोग छोटे नमूना सेट के लिए संभव रहता है.
अध्ययन सीमाओं में मानव सीरम नमूनों की एक छोटी संख्या में केवल कुछ बोरेलिया इम्यूनोएक्टिविटी लक्ष्यों का तुलनात्मक मूल्यांकन शामिल है। हालांकि, मूल अध्ययन ने पुष्टि की कि आईजीजी और आईजीएम दोनों के लिए परख प्रदर्शन को बनाए रखा गया था जब एक बड़े नमूना सेट12 के भीतर सभी पांच ज्ञात बोरेलिया प्रजातियों से आठ एंटीजन का विश्लेषण किया गया था। इसके अलावा, दोहरे रिपोर्टर साधन केवल प्रत्येक प्रतिक्रिया के भीतर एक साथ दो एंटीबॉडी आइसोटाइप का आकलन कर सकते हैं, इसलिए पूर्ण आइसोटाइप प्रोफाइलिंग के लिए अतिरिक्त परख प्रतिक्रियाओं13 के प्रदर्शन की आवश्यकता होगी।
अंत में, यह रिपोर्ट मनका-आधारित एकल-रिपोर्टर इम्यूनोएसे के दोहरे रिपोर्टर परख में सफल विलय और रूपांतरण का विवरण देती है जो एक साथ मानव सीरम नमूनों में रोगजनक बोरेलिया-विशिष्ट आईजीजी और आईजीएम एंटीबॉडी का मूल्यांकन कर सकती है। यह संयुक्त दृष्टिकोण दो स्वतंत्र एकल-रिपोर्टर परख के समान डेटा वॉल्यूम उत्पन्न करने के लिए कुल समय, सामग्री और श्रम इनपुट बचाता है। मल्टीप्लेक्स परख को 96-अच्छी तरह से 384-अच्छी तरह से माइक्रोटिटर प्लेट प्रारूप तक बढ़ाया जा सकता है और रोबोट प्लेट और तरल हैंडलिंग इंस्ट्रूमेंटेशन के उपयोग से अर्ध-स्वचालित किया जा सकता है, जिससे यह बड़ी जनसंख्या सर्वेक्षण जैसे उच्च-थ्रूपुट अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त हो जाता है। मनका आधारित दोहरी रिपोर्टर परख प्रणालियों पहले मूल्यांकन में उपयोगिता का प्रदर्शन किया है, उदाहरण के लिए, अन्य वायरल और बैक्टीरियल रोगजनकों13,21 के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं, अंग प्रत्यारोपण22 में एचएलए एपिटोप्स के खिलाफ एलोजेनिक एंटीबॉडी प्रतिक्रियाओं का आकलन, और ऑटोइम्यून रोग23 के तंत्र की खोज. वर्तमान रिपोर्ट में लाइम रोग का कारण बनने वाले बोरेलिया रोगजनकों के संपर्क की पहचान करने के लिए मल्टीप्लेक्स तकनीक के उपयोग का विवरण दिया गया है, उदाहरण के रूप में कि प्रयोगशालाएं विभिन्न विकृति में जटिल प्रतिरक्षा तंत्र की खोज के लिए इस दृष्टिकोण को कैसे अनुकूलित कर सकती हैं।
The authors have nothing to disclose.
इस रिपोर्ट को ल्यूमिनेक्स (ऑस्टिन, TX) द्वारा वित्त पोषित किया गया था। लेखक विश्लेषणात्मक और वैज्ञानिक संपादन सहायता के लिए मैथ्यू सिल्वरमैन पीएचडी (बायोमेडिकल पब्लिशिंग सॉल्यूशंस, पनामा सिटी, एफएल; mattsilver@yahoo.com) को धन्यवाद देते हैं। लेखक अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले बोरेलिया एंटीजन प्रदान करने के लिए tgcBIOMICS GmbH (Bingen, जर्मनी) के हेराल्ड क्लेन और क्रिस्टोफ वॉन आइचेल-स्ट्रीबर को भी धन्यवाद देते हैं। तकनीकी परख सत्यापन और गुणवत्ता नियंत्रण के लिए मानव सीरम नमूने यहां से प्राप्त किए गए थे: 1) महामारी विज्ञान विभाग, हेल्महोल्त्ज़ सेंटर फॉर इंफेक्शन रिसर्च, ब्राउनश्वेग, जर्मनी के माध्यम से जर्मनी में SARS-CoV-2 के खिलाफ एंटीबॉडी पर मल्टीलोकल और सीरियल प्रचलन अध्ययन; और 2) न्यूरोलॉजी विभाग, Sächsisches Krankenhaus Rodewisch (Rodewisch, जर्मनी)। मानव नमूनों के उपयोग के लिए अनुमोदन हनोवर मेडिकल स्कूल, जर्मनी (9086_BO_S_2020) की आचार समिति द्वारा प्रदान किया गया था।
Antibodies and Detection Reagents | Source | Catalog Number | |
Biotinylated Goat Anti-Human IgG | Jackson ImmunoResearch (Dianova) | 109-066-098 | |
Brilliant Violet 421-Streptavidin | BD Biosciences | 563259 | |
Donkey Anti-Human IgM | Jackson ImmunoResearch (Dianova) | 709-116-073 | |
Borrelia Antigens | tgcBIOMICS (Bingen, Germany) | ||
Coupling Reagents | |||
1-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride (EDC) | Thermo Scientific Pierce | 77149 ProteoChem (100 mg) | |
10x PBS | Fisher Scientific | BP399-4 | |
BSA | Carl Roth | T844.3 | |
MES (2-ethanesulfonic acid; zwitterionic buffer) | Carl Roth | 4256.2 | |
Na2HPO4 | Carl Roth | 4984.1 | |
ProClin300 | Sigma | 48914-U | |
Sulfo-NHS (N-hydroxysulfosuccinimide) | Thermo Scientific Pierce | 24510 (500 mg) | |
Triton X-100 | Thermo Scientific | 85111 | |
Instrumentation and Ancillary Lab Supplies | Source | ||
384-well plate | Corning, Cat# 3570 | ||
96-well deep-well plates | ThermoFisher Scientific, Cat# 95040450 | ||
96-well half-area plates | Corning, Cat# 3690 | ||
BioTek 405 TS Plate Washer | BioTek Instruments/Agilent Technologies, Santa Clara, CA | ||
BioTek MultiFlo FX Plate Washer | BioTek Instruments/Agilent Technologies, Santa Clara, CA | ||
DynaMag Spin Magnet (for isolating beads in microcentrifuge tubes) | ThermoFisher, Cat# 12320D | ||
Flexmap 3D (two-channel, single-reporter instrument) | Luminex Corp., Austin, TX | ||
KingFisher Magnetic Particle Processor (for isolating beads in 96-well plates) | ThermoFisher, Cat# A31508 | ||
MagPlex Microspheres (magnetic, fluorescent, 6.5-µm-diameter beads) | Luminex Corp., Austin, TX | ||
SmartBlock Plates | Eppendorf, Cat# 5363000039 | ||
ThermoMixer C | Eppendorf, Cat# 5382000015 | ||
ThermoTop | Eppendorf, Cat# 5308000003 | ||
xMAP Intelliflex (three-channel, dual-reporter instrument) | Luminex Corp., Austin, TX |