Aqui, uma abordagem simples e rápida para a realização de injeções intracerebroventriculares em camundongos usando uma abordagem à mão livre (ou seja, sem um dispositivo estereotáxico) é descrita.
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Artigo de método
Injeções intracerebroventriculares à mão livre em camundongos
Neste artigo
Resumo
Resumo
A investigação de sistemas neuroendócrinos muitas vezes requer a entrega de drogas, vírus ou outros agentes experimentais diretamente no cérebro de camundongos. Uma injeção intracerebroventricular (ICV) permite a entrega generalizada do agente experimental em todo o cérebro (particularmente nas estruturas próximas aos ventrículos). Aqui, métodos para fazer injeções de ICV à mão livre em camundongos adultos são descritos. Usando pontos de referência visuais e táteis nas cabeças de camundongos, as injeções nos ventrículos laterais podem ser feitas de forma rápida e confiável. As injeções são feitas com uma seringa de vidro mantida na mão do experimentador e colocada a distâncias aproximadas dos pontos de referência. Assim, esta técnica não requer um quadro estereotáxico. Além disso, essa técnica requer apenas uma breve anestesia com isoflurano, o que permite a avaliação subsequente do comportamento e/ou fisiologia de camundongos em camundongos acordados e com comportamento livre. A injeção de ICV à mão livre é uma ferramenta poderosa para a entrega eficiente de agentes experimentais no cérebro de camundongos vivos e pode ser combinada com outras técnicas, como amostragem frequente de sangue, manipulação de circuitos neurais ou gravação in vivo para investigar processos neuroendócrinos.
Introdução
A entrega de agentes experimentais, como drogas1, vírus2 ou células3, ao cérebro é muitas vezes necessária para a pesquisa neuroendócrina. Se o agente não atravessar prontamente a barreira hematoencefálica ou o objetivo experimental for testar especificamente os efeitos centrais do agente, é importante ter um método confiável para administrar injeções no cérebro. Além disso, a injeção no espaço intracerebroventricular (ICV) oferece a oportunidade de distribuir amplamente o agente no cérebro e fornece uma grande área alvo, aumentando assim a probabilidade de injeção bem-sucedida2<....
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Protocolo
Todos os procedimentos foram aprovados pelos Comitês Institucionais de Cuidados e Uso de Animais da Colorado State University (#3960) e da University of California San Diego, onde os dados representativos foram coletados (S13235, PI Kellie Breen Church). Os dados de cinco camundongos adultos fêmeas e dois machos adultos C57/BL6 (9-16 semanas de idade) são mostrados na seção de dados representativos. Camundongos fêmeas foram ovariectomizados 3-4 semanas antes da injeção de ICV e coleta de sangue, como descrito anteriormente7. Antes da experimentação, esses camundongos foram alojados com um ciclo de luz de 12 h / 12 h de luz escura e tiveram livr....
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Resultados
Quando realizada com sucesso, essa técnica permite a rápida liberação de um agente experimental no sistema ventricular. Um perfil de pulso do hormônio luteinizante (LH) de uma camundongo ovariectomizada que recebeu uma injeção ICV de 3 μL de solução salina isotônica estéril, o veículo para muitos compostos farmacológicos, é mostrado na Figura 2A. Este exemplo demonstra que a breve exposição à anestesia gasosa e a injeção isolada de 3 μL de líquido no sistema ventricular não alteraram a secre.......
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Discussão
Aqui, um meio simples e eficaz para fazer injeções de ICV em camundongos é descrito. Uma vez que esta técnica não requer uma estrutura estereotáxica, esta abordagem para a entrega central de drogas e agentes experimentais é acessível a mais pesquisadores. Além disso, essa abordagem é relativamente alta, uma vez que o procedimento de preparação e injeção pode ser realizado rapidamente.
Como esse procedimento requer a manipulação manual de agulhas e seringas de vidro utilizando distâncias aproxi.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Gostaríamos de agradecer à Dra. Kellie Breen Church, ao Sr. Michael Kreisman e à Sra. Jessica Jang por suas contribuições para a coleta dos dados mostrados nos resultados representativos. Este trabalho foi apoiado pelo National Institutes of Health (NIH) R00 HD104994 (R.B.M.).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Agulhas rombas de calibre 18 | SAI Infusion | B18-150 | |
| Agulhas de calibre 18 | Medical | 305195 | |
| Almofadas de álcool | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Almofada de bancada | Fisher Scientific | 14-206-62AC22 | |
| Solução de betadine | Fisher Scientific | NC1696484 | |
| Buprenorfina | Patterson Vet Supply | 07-892-5235 | Substância controlada |
| Eyelube | Seringa de vidro Fisher Scientific | 50-218-8442 | |
| Agulha de injeção | Hamilton | 7634-01 Hamilton 7803-01 | 27 gauge, agulha RN de cubo pequeno, estilo de ponta: 4, Comprimento da agulha: 10cm, Ângulo: 45 |
| Patterson Vet Supply | 07-893-8441 | ||
| Vaporizador de isoflurano | Vet Equip | V-10 | |
| Fita de laboratório | VWR | 89098-128 | |
| Oxigênio de grau médico | Airgas | OX USPEA | |
| Paraformaldeído | Millipore-Sigma | 8.18715.1000 | |
| Fosfato Tampolado Salino | Fisher Scientific | J67802. Software K2 | |
| PulsaR | Código aberto, Universidade de Otago | Veja ref 9 | |
| Régua | Fisher Scientific | 12-00-152 | |
| Tubulação Silastic (0.040" I.D.) | Tubulação de DOW | 508-005 | |
| Silastic (0,078" I.D.) | DOW | 508-009 | |
| Solução salina estéril | VWR | 101320-574 | |
| Sacarose | Fisher Scientific | S5-500 |
Referências
- Roseweir, A. K., et al. Discovery of potent kisspeptin antagonists delineate physiological mechanisms of gonadotropin regulation. Journal of Neuroscience. 29 (12), 3920-3929 (2009).
- Kim, J. Y., Grunke, S. D., Levites, Y., Golde, T. E., Jankowsky, J. L.
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Reimpressões e permissões
