Modelo de Parada Cardíaca em Camundongos para Monitoramento por Imagem e Fisiologia Cerebral durante Isquemia e Ressuscitação

Summary

Este protocolo demonstra um modelo único de parada cardíaca por asfixia em camundongos que não requer compressão torácica para ressuscitação. Esse modelo é útil para monitorar e obter imagens da dinâmica da fisiologia cerebral durante a parada cardíaca e a ressuscitação.

Abstract

A maioria dos sobreviventes de parada cardíaca (PCR) experimenta graus variados de déficits neurológicos. Para entender os mecanismos que sustentam a lesão cerebral induzida por CA e, posteriormente, desenvolver tratamentos eficazes, a pesquisa experimental de CA é essencial. Para este fim, alguns modelos de AC de mouse foram estabelecidos. Na maioria desses modelos, os camundongos são colocados em decúbito dorsal para realizar compressão torácica para ressuscitação cardiopulmonar (RCP). No entanto, esse procedimento de ressuscitação torna desafiador o imaginário/monitoramento em tempo real da fisiologia cerebral durante a AC e a ressuscitação. Para obter esse conhecimento crítico, o presente protocolo apresenta um modelo de AC por asfixia em camundongos que dispensa a etapa de RCP por compressão torácica. Esse modelo permite o estudo de alterações dinâmicas no fluxo sanguíneo, estrutura vascular, potenciais elétricos e oxigênio do tecido cerebral desde a linha de base pré-AC até a reperfusão precoce pós-AC. É importante ressaltar que esse modelo se aplica a camundongos envelhecidos. Assim, espera-se que este modelo de CA em camundongos seja uma ferramenta crítica para decifrar o impacto da AC na fisiologia cerebral.

Introduction

A parada cardíaca (PCR) continua sendo uma crise de saúde pública mundial¹. Mais de 356.000 casos de CA fora do hospital e 290.000 casos de CA intra-hospitalar são relatados anualmente apenas nos EUA, e a maioria das vítimas de CA tem mais de 60 anos. Notadamente, os comprometimentos neurológicos pós-PCR são comuns entre os sobreviventes, e representam um grande desafio para o manejo da PCR2,3,4,5. Para entender as alterações patológicas cerebrais pós-PCR e seus efeitos nos desfechos neurológicos....

Protocol

Todos os procedimentos aqui descritos foram conduzidos de acordo com as diretrizes do National Institutes of Health (NIH) para o cuidado e uso de animais em pesquisa, e o protocolo foi aprovado pelo Duke Institute of Animal Care and Use Committee (IACUC). Camundongos machos e fêmeas C57BL/6 com idades entre 8-10 semanas de idade foram utilizados para o presente estudo.

1. Preparo cirúrgico

1. Pese um mouse em uma balança digital e coloque-o em uma caixa de indução de anestesia de plexiglass 4 x 4 x 7.
2. Ajustar o vaporizador de anestesia para isoflurano a 5%, o medidor de fluxo de oxigênio para 30 e o medidor....

Results

Para induzir AC, o camundongo foi anestesiado com isoflurano a 1,5% e ventilado com nitrogênio a 100%. Essa condição levou a bradicardia grave em 45 s (Figura 1). Após 2 min de anóxia, a frequência cardíaca reduziu drasticamente (Figura 2), a pressão arterial diminuiu abaixo de 20 mmHg e o fluxo sanguíneo cerebral cessou completamente (Figura 1). Com o desligamento do isoflurano, a temperatura corporal deixou de ser controlada e cai.......

Discussion

Em estudos experimentais de AC, asfixia, injeções de cloreto de potássio ou fibrilação ventricular derivada de corrente elétrica têm sido usadas para induzir CA 16,17,18,19,20,21,22,23. Normalmente, a RCP é necessária para ressuscitação nesses modelos de AC.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Adrenalina	Par Pharmaceutical	NDC 42023-159-01
Cotonetes de álcool	BD	326895
Animal Bio Amp	ADInstruments	FE232
BP transdutor	ADInstruments	MLT0699
Bridge Amp	ADInstruments	FE117
Injeção de heparina sódica, USP	Fresenius Kabi	NDC 63323-540-05
Isoflurano	Covetrus	NDC 11695-6777-2
Monitor de perfusão Doppler a laser	Moor Instruments	moorVMS-LDF1
Sistema de imagem de manchas a laser	RWD	RFLSI III
Pomada lubrificante para os olhos	Bausch + Lomb	339081
Micro clipe	Roboz	RS-5431
Sonda retal de rato	Physitemp	RET-3
Eléctrodo de agulha	ADInstruments	MLA1213	29 Ga, soquete de 1,5 mm
Nitrogénio	Airgas	UN1066
Fibra plástica óptica	Moor Instruments	POF500
Otoscópio	Welchallyn	728	2,5 mm Espéculo
Oxigénio	Airgas	UN1072
Tubo PE-10	BD	427401	Tubo de polietileno
Iodopovidona	CVS	955338
PowerLab 8/35	ADInstruments
Rimadyl (carprofeno)	Zoetis	6100701	Injetável 50 mg/ml
Ventilador para pequenos animais	Kent Scientific	RoVent Jr.
Controlador de temperatura	Physitemp	TCAT-2DF
Triplo antibiórico e alívio da dor	CVS	NDC 59770-823-56
Vaporizador	RWD	R583S
0,25% bupivacaína	Hospira	NDC 0409-1159-18
0,9% de crirido de sódio	UTI Médica	NDC 0990-7983-03
1 mL de plástico seringa	BD	309659
4-0 sutura de seda	Look	SP116	Sutura de nylon 6-0 de seda trançada preta
	Ethilon	1698G
8,4% bicarbonato de sódio Inj., USP	Hospira	NDC 0409-6625-02
Cateter IV 20 G	BD	381534	20GA 1,6 IN
30 G Agulha PrecisionGlide	BD	305106	30 G X 1/2