Vi præsenterer en protokol for Tuina-manipulation udført på gips-immobiliserede-inducerede knæartroserotter. Baseret på de foreløbige resultater foreslog det, at metodens effektivitet var afhængig af reduktion af inflammation og brusktab.
Kliniske forsøg tyder på, at Tuina manipulation er effektiv til behandling af knæ slidgigt (KOA), mens yderligere undersøgelser er nødvendige for at opdage dens mekanisme. Derfor er manipulation af dyremodeller af knæartrose kritisk. Denne protokol giver en standardproces for Tuina-manipulation på KOA-rotter og en foreløbig udforskning af Tuina-mekanismen for KOA. Presse- og æltemanipulationsmetoden (en slags Tuina-manipulation, der refererer til presning og æltning af det specifikke område af kropsoverfladen) påføres på 5 akupunkter omkring knæleddet hos rotter. Manipulationens kraft og frekvens blev standardiseret ved fingertrykoptagelser, og rottens position under manipulation er beskrevet detaljeret i protokollen. Effekten af manipulation kan måles ved smerteadfærdstest og mikroskopiske fund i synovial og brusk. KOA rotter viste signifikant forbedring i smerteadfærd. Den inflammatoriske infiltration af synovialvæv blev reduceret i Tuina-gruppen, og ekspressionen af tumornekrosefaktor (TNF)-α var signifikant lavere. Sammenlignet med kontrolgruppen var chondrocytapoptose mindre i Tuina-gruppen. Denne undersøgelse giver en standardiseret protokol for Tuina-manipulation på KOA-rotter og foreløbigt bevis for, at de terapeutiske virkninger af Tuina kan være relateret til reduktion af synovial inflammation og forsinket chondrocytapoptose.
Knæartrose (KOA) er en degenerativ sygdom, der hovedsageligt manifesteres i ledsmerter. Fibrose, revner, sårdannelse og tab af ledbrusk er hovedårsagerne til denne sygdom1. KOA har en høj prævalens og kan resultere i en dybtgående indvirkning på patienternes dagligdag og forårsage handicap i alvorlige tilfælde. Blandt personer i alderen 45-84 år stiger forekomsten af KOA med alderen, og forekomsten blandt personer i alderen 85 år og derover er 15%, med en overvægt hos kvinder 2,3. Derudover kan KOA medføre en alvorlig økonomisk byrde for både den enkelte og samfundet. En undersøgelse viste, at direkte sundhedsomkostninger på KOA pr. Indbygger nåede op til $ 8.858 ± $ 5.120 om året4. Med samfundets aldring er KOA blevet et verdensomspændende sundhedsproblem og et stort socialt problem samt et aktuelt emne for videnskabelig forskning.
Evidensbaserede undersøgelser har vist effektiviteten af Tuina-manipulation til behandling af KOA5. Tuina manipulation kunne lindre smerter og forbedre dysfunktion hos KOA-patienter, hvis mekanisme er relateret til antiinflammatoriske virkninger 6,7. Forskere fandt, at Tuina-manipulation effektivt hæmmede ekspressionen af inflammatoriske faktorer interleukin (IL)-β og 5-hydroxytryptamin og bremsede degenerationen af ledbrusk i en kanin KOA model8. Det foreslog, at Tuina kunne fremme blodcirkulationen og stofskiftet på læsionsstedet, hvilket hjalp med at fjerne inflammatoriske faktorer som IL-1, IL-6 og tumornekrosefaktor (TNF)-α og derved lindre de kliniske symptomer på KOA9. Derudover kan den passive bevægelse af leddet gennem Tuina-manipulation fremme penetration og diffusion af synovialvæske i ledbrusk og forbedrer vævets næringsstofmetabolisme10. Andre undersøgelser antydede, at Tuina-manipulation effektivt kan forbedre de biomekaniske indekser hos KOA-patienter11. Manipulationer anvendt på blødt væv kan forbedre stressfordelingen over lemmer og forbedre balancefunktionen12,13. På samme tid, med nogle fælles justeringsmanipulationer, kan justeringen af underekstremiteterne også justeres for at korrigere unormale gangarter14,15.
Virkningsmekanismen for Tuina-manipulation ved behandling af KOA skal stadig undersøges, og derfor er en eksperimentel undersøgelse nødvendig. Nøglen til anvendelsen af Tuina i forsøgsdyr er standardisering af modellering, dyrefiksering og interventionsmetoder16. Modelleringsmetoden bestemmer, om forsøgsdyret kan udvise sygdommens egenskaber. I mellemtiden kan passende fikseringsmetoder lette interventionen af Tuina-manipulationen og bedre afspejle effekten af Tuina. Standardiseringen af interventionsmetoder er den sværeste del af Tuina-manipulation. I 2010 nævnte det grundlæggende system af kinesiske akupunkturstandarder akupunkturpunktstandarderne for forsøgsdyr, hvilket gav mulighed for akupunktur- og Tuina-operationer i dyreforsøg17. Der er dog stadig vanskeligheder med at standardisere Tuina-manipulation. Der er flere typer Tuina-manipulation18. Valget af den specifikke manipulation afhænger hovedsageligt af den sygdom, der skal behandles, og de terapeutiske teorier, som udøveren foretrækker. I undersøgelsen af Tuina for KOA er der blevet lagt mere vægt på punktpressende manipulation (tryk på de specifikke akupunkter med tommelfingeren eller albuen), Yizhichan-skubbemanipulation (en skubbemanipulation ved at vrikke tommelfingeren) og tryk- og æltningsmanipulation (som refererer til at trykke og ælte det specifikke område af kropsoverfladen med finger eller håndflade)19. Presse- og æltningsmanipulation er en af de mest anvendte Tuina-manipulationer, der kombinerer presning og æltning for at bevæge det subkutane væv20. Tryk og æltning manipulation anvendt på akupunkter kan fremme blodcirkulationen og lindre smerter og repræsenterer den terapeutiske virkning af Tuina på KOA19.
I denne protokol vil virkningen af presse- og æltemanipulation på KOA-rotter blive beskrevet detaljeret, herunder udvalgte akupunkter, intensitet og hyppighed af manipulationen og rottens kropsposition, således at der kan gives reference for fremtidig forskning.
Denne undersøgelse giver en protokol for Tuina manipulation på KOA rotter. Gennem smerteadfærdstest og histomorfologiske fund antydede det, at en sådan række Tuina-manipulationer anvendt på KOA-rotter kunne reducere synovial inflammation og bruskapoptose, hvilket kunne være en reference til Tuina-manipulation på dyremodeller af KOA.
Der er flere kritiske procedurer under protokollen. For det første er det vigtigt at vælge en passende metode til at inducere KOA-modellen. Der er forske…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af Shanghai Critical Clinical Specialties Construction Project (bevillingsnummer: Shslczdzk04001); Shanghai Science and Technology Commissions sejlprogram (bevillingsnummer: 22YF1444300); Projekter inden for budgettet for Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (bevillingsnummer: 2021LK091).
absolute ethanol | Supelco | PHR1070 | For making specimen |
ALMEMO admeasuring apparatus | ahlborn | 2450-1 | For Mechanical Withdrawal Threshold test |
Anti-Digoxin antibody | Sigma-Aldrich | SAB4200669 | For HE stain IHC or TUNEL |
Anti-IL-1 beta | abcam | ab283818 | For HE stain IHC or TUNEL |
DAB Substrate kit | Solarbio | DA1010 | For HE stain IHC or TUNEL |
Denture base materials | Shanghai New Century | 20000356 | For model making |
eosin | bioswamp | PAB180016 | For HE stain IHC or TUNEL |
Finger pressure recordings | Suzhou Changxian Optoelectronic Technology | CX1003w | For Tuina manipulation |
formic acid solution | Sigma-Aldrich | 695076 | For decalcification |
H2O2 | Sigma-Aldrich | 386790-M | For HE stain IHC or TUNEL |
hematoxylin | bioswamp | PAB180015 | For HE stain IHC or TUNEL |
Isoflurane | Shanghai Yuyan Scientific Instrument Company | S10010533 | For gas anesthesia |
neutral resins | bioswamp | PAB180017 | For HE stain IHC or TUNEL |
Paraformaldehyde Fix Solution | Sigma-Aldrich | 100496 | For histology |
PBS | Sigma-Aldrich | P3813 | For HE stain IHC or TUNEL |
Plantar Test Apparatus | IITC Life Science | / | For Paw Withdrawal Latency test |
plaster of Paris bandage | WANDE | 20150023 | For model making |
Proteinase K | Sigma-Aldrich | 124568 | For HE stain IHC or TUNEL |
TNF Alpha Monoclonal antibody | Proteintech | 60291-1-Ig | For HE stain IHC or TUNEL |
TUNEL | Servicebio | GDP1042 | For HE stain IHC or TUNEL |
Wax | Sigma-Aldrich | 327204 | For making specimen |
xylene | Shanghai Sinopharm Group | 100092 | For making specimen |