O objetivo deste artigo é examinar o uso do teste de imunofluorescência indireta da raiva para a detecção de anticorpos IgG e IgM específicos para raiva.
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Artigo de método
Detecção de anticorpos IgG e IgM antirrábicos pelo teste de imunofluorescência indireta da raiva
Neste artigo
Resumo
Resumo
O teste de imunofluorescência indireta (RIFI) antirrábica foi desenvolvido para detectar vários isotipos de anticorpos específicos contra a raiva no soro ou no líquido cefalorraquidiano. Este teste fornece resultados rápidos e pode ser usado para detectar anticorpos antirrábicos em vários cenários diferentes. O teste de IFA antirrábica é especialmente útil para a detecção rápida e precoce de anticorpos para avaliar a resposta imune em um paciente que desenvolveu raiva. Embora outros métodos para o diagnóstico antemortem da raiva tenham precedência, este teste pode ser utilizado para demonstrar a exposição recente ao vírus rábico através da detecção de anticorpos. O teste de IFA não fornece um título de anticorpos neutralizantes do vírus (VNA), mas a resposta de profilaxia pré-exposição (PrEP) pode ser avaliada através da presença de anticorpos positivos ou negativos. Este teste pode ser utilizado em várias situações e pode fornecer resultados para vários alvos diferentes. Neste estudo, usamos várias amostras de soro pareadas de indivíduos que receberam PrEP e demonstramos sua presença de anticorpos antirrábicos ao longo do tempo usando o teste de RIFI.
Introdução
O teste de anticorpos fluorescentes indiretos (RIFI) antirrábicos é usado para detectar vários isotipos de anticorpos específicos da raiva no soro ou no líquido cefalorraquidiano. É um dos muitos testes disponíveis para o acompanhamento de um paciente antirrábico antemortem. É especialmente útil para a detecção precoce de anticorpos para avaliar a resposta imune de um paciente à infecção por raiva. Quando usado em conjunto com outros testes, história do caso e status de vacinação do paciente, o teste de IFA pode ajudar a determinar a exposição ao vírus da raiva ou a uma vacina1. Como o teste de RIFI mede IgM e/ou IgG, os valores do anticorpo es....
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Protocolo
O seguinte protocolo foi aprovado para o uso ético de amostras humanas pelo New York State Department of Health Wadsworth Center para desenvolvimento de ensaios, número de aprovação do protocolo #03-019.
1. Segurança
- Use equipamentos de proteção individual (EPIs), no mínimo proteção ocular (óculos ou face shield), máscara cirúrgica e luvas sem látex.
- Certifique-se de que o pessoal está vacinado contra a raiva e que um título de ≥0,5 UI/mL foi demonstrado nos últimos 6 meses.
2. Preparação da lâmina de antígeno
NOTA: Execute toda....
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Resultados
Todas as amostras de soro foram coletadas dos pacientes aproximadamente nos mesmos períodos de tempo após a PrEP. As amostras foram testadas de cinco pacientes diferentes nos seguintes momentos: 2 semanas após a inoculação final da vacina antirrábica, 6 meses após a série de vacinas antirrábicas e 18 meses após a série de vacinas antirrábicas. Cada amostra de soro foi diluída em série e graduada para presença de IgM e IgG, conforme descrito nas etapas 5.2 e 5.3 do protocolo. O valor de anticorpos atribuído representa o f.......
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Discussão
O teste de IFA aproveita um complexo antígeno-anticorpo, permitindo um local de marcação para visualizar anticorpos específicos da raiva. Células de neuroblastoma ou BHK são semeadas em lâminas de microscópio revestidas com PTFE multipoço e inoculadas com a cepa CVS-11 de laboratório do vírus da raiva. Uma vez confluente a monocamada e atingida a infectividade desejada de aproximadamente 50%, as lâminas são armazenadas até ficarem prontas para uso6.
O soro ou o LCR do p.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Somos gratos ao Wadsworth Center do Departamento de Saúde do Estado de Nova York por apoiar este projeto.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tampa de vidro de 25x55mm com deslizamentos | Qualquer | ||
| acetona | Qualquer | ||
| conjugado rotulado com IgG anti-humano | Sigma-Aldrich | F9512 | |
| Conjugado rotulado com IgM anti-humano | SeraCare | 5230-0286 | |
| Ponta de pipeta de aspiração | Qualquer | ||
| célula BHK-21 ATCC | CCL-10 | ||
| Diluente BION IFA | MBL BION | DIL-9993 | |
| Água para Cultura de Células | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Captin Jars | Qualquer | ||
| Soro Fetal Bovino | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| com filtro FITC | Qualquer | ||
| glicerol | IgM Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
| Gullsorb | Fisher Scientific | 23-043-158 | Reagente de inativação IgG |
| L-Glutamina | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| Águia de mídia essencial mínima - com Earle ' sais, L-glutamina e aminoácidos não essenciais, sem bicarbonato de sódio | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| Células de Neuroblastoma de Camundongo | ATCC | CCL-131 | |
| Lâminas de vidro com revestimento de PTFE multi-poço | Qualquer | ||
| PBS | Qualquer | pH 7.6 | |
| Penicilina | Sigma | P-3032 | EGM |
| Raiva Direta Fluorescente Anticorpo Conjugado | Millipore Sigma | 5100, 5500, 6500, RU5100, ou RU5500 | |
| Bicarbonato de sódio | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
| Cristais de cloreto de sódio | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
| Conta-gotas estéreis | Qualquer | ||
| Sal de sulfato de estreptomicina | Sigma | S9137 | EGM |
| Trizma cristais pré-definidos pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
| BD | 260300 | EGM | |
| Mistura de vitaminas | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
Referências
- Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1. World Health Organization. , Geneva. 232-245 (2018).
- Moore, S. M. Challenges of rabies serology: defining context of interpretation. Viruses. 13 (8), 1516(2021).
- Zajac, M. D.
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Reimpressões e permissões
