Påvisning af rabies IgG- og IgM-antistoffer ved hjælp af rabies indirekte fluorescerende antistoftest
Summary
Formålet med dette manuskript er at undersøge anvendelsen af rabies indirekte fluorescerende antistoftest til påvisning af rabiesspecifikke IgG- og IgM-antistoffer.
Abstract
Rabies indirekte fluorescerende antistof (IFA) test blev udviklet til at detektere forskellige rabies-specifikke antistof isotyper i sera eller cerebral spinalvæske. Denne test giver hurtige resultater og kan bruges til at detektere rabiesantistoffer i flere forskellige scenarier. Rabies IFA-testen er især nyttig til hurtig og tidlig påvisning af antistoffer til evaluering af immunresponset hos en patient, der har udviklet rabies. Selv om andre metoder til antemortem rabies diagnose har forrang, denne test kan anvendes til at påvise nylig rabiesvirus eksponering gennem antistof påvisning. IFA-testen giver ikke en virusneutraliserende antistoftiter (VNA), men præeksponeringsprofylakseresponset (PrEP) kan evalueres gennem positiv eller negativ antistoftilstedeværelse. Denne test kan bruges i forskellige situationer og kan give resultater for en række forskellige mål. I denne undersøgelse brugte vi flere parrede serumprøver fra personer, der fik PrEP og demonstrerede deres rabiesantistoftilstedeværelse over tid ved hjælp af IFA-testen.
Introduction
Den rabies indirekte fluorescerende antistof (IFA) test bruges til at påvise forskellige rabies-specifikke antistof isotyper i sera eller cerebral spinalvæske. Det er en af et arsenal af tests til rådighed til overvågning af en antemortem rabies patient. Det er især nyttigt til tidlig påvisning af antistoffer til evaluering af patientens immunrespons på rabiesinfektion. Når IFA-testen bruges sammen med andre tests, sygehistorie og patientens vaccinationsstatus, kan den hjælpe med at bestemme eksponering for rabiesvirus eller en vaccine1. Da IFA-testen måler IgM og/eller IgG, kan værdierne for det specifikke antistof indikere en omtrentlig tidsramme fra eksponering for antigen1. Denne test kan være nyttig i de anførte applikationer eller andre, der endnu ikke er udforsket.
Der findes flere rabiesserologiske assays. Den hurtige fluorescerende fokushæmningstest (RFFIT), fluorescerende antistofvirusneutraliseringstest (FAVN) eller modifikationer af disse er de primære metoder til måling af rabiesvirusneutraliserende antistoffer (RVNA’er)1. Disse tests differentierer imidlertid ikke IgM- og IgG-antistoffer. Når differentiering af antistofisotype er vigtig i overvågningen af rabiesimmunresponsen, anvendes rabies IFA og rabiesenzymbundet immunosorbentassay (ELISA) test, men de måler ikke RVNA’er. Selvom IFA- og ELISA-testene kan bruges til at bestemme tilstedeværelsen af rabiesspecifikke antistoffer i en prøve, er der nogle forskelle i, hvordan de udføres. IFA-testen bruger en celledyrket levende virus som sit antigensubstrat, mens en typisk ELISA til rabiesdetektion bruger et eller flere af de virale proteiner. I et laboratorium, hvor rabiesvirus kan dyrkes, kan IFA-testen lettere udføres i stedet for at købe eller dyrke individuelle virale proteiner til ELISA. Formålet med testningen og de oplysninger, der indhentes fra resultaterne af enhver rabiesserologisk analyse, bør tages i betragtning, når det afgøres, hvilken der skal vælges2.
IgM er den første til at reagere og stiger, indtil klasseskift observeres omkring dag 28, på hvilket tidspunkt IgG bliver det dominerende cirkulerende antistof3. IgM forventes derfor kun i en begrænset periode efter eksponering for rabiesvirus eller vaccination. Test af både serum og cerebrospinalvæske (CSF) kan indikere, om eksponeringen var gennem vaccination, hvor antistoffer kun ville ses i sera eller fra en virusinfektion, som potentielt ville vise antistoffer i CSF1.
Det er blevet fastslået, at rabiesantistoffer vedvarer i flere år efter profylakse før eksponering (PrEP)4. IFA-testen kan være et nyttigt værktøj til at demonstrere dette på forskellige tidspunkter efter vaccination eller eksponering.
Protocol
Representative Results
Discussion
IFA-testen udnytter et antigen-antistofkompleks, hvilket giver mulighed for et mærkningssted til at visualisere rabiesspecifikke antistoffer. Neuroblastom- eller BHK-celler podes på PTFE-belagte mikroskopglas med flere brønde og podes med rabiesviruslaboratoriestamme CVS-11. Når monolaget er sammenflydende, og cellerne når den ønskede infektivitet på ca. 50%, opbevares diasene, indtil de er klar til brug6.
Patientserum eller CSF påføres det inficerede cellemono…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vi er taknemmelige for New York State Department of Health Wadsworth Center for at støtte dette projekt.
Materials
| 25x55mm glass cover slips | Any | ||
| Acetone | Any | ||
| Anti-Human IgG Labeled Conjugate | Sigma-Aldrich | F9512 | |
| Anti-Human IgM Labeled Conjugate | SeraCare | 5230-0286 | |
| Aspirating pipette tip | Any | ||
| BHK-21 Cells | ATCC | CCL-10 | |
| BION IFA Diluent | MBL BION | DIL-9993 | |
| Cell Culture water | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Coplin Jars | Any | ||
| Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| Fluorescent microscope with FITC filter | Any | ||
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
| Gullsorb IgM inactivation reagent | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG Inactivation Reagent |
| L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| Mouse Neuroblastoma Cells | ATCC | CCL-131 | |
| Multi-well Teflon coating glass slides | Any | ||
| PBS | Any | pH 7.6 | |
| Penicillin | Sigma | P-3032 | EGM |
| Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate | Millipore Sigma | 5100, 5500 or 6500 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
| Sodium Chloride crystals | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
| Sterile dropper | Any | ||
| Streptomycin sulfate salt | Sigma | S9137 | EGM |
| Trizma pre-set crystals pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
| Tryptose Phosphate Broth | BD | 260300 | EGM |
| Vitamin mix | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
Referências
- Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1. World Health Organization. , 232-245 (2018).
- Moore, S. M. Challenges of rabies serology: defining context of interpretation. Viruses. 13 (8), 1516 (2021).
- Zajac, M. D. Development and evaluation of a rabies enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) targeting IgM and IgG in human sera. Viruses. , 40-49 (2019).
- Mills, D. J., Lau, C. L., Mills, C., Furuya-Kanamori, L. Long-term persistence of antibodies and boostability after rabies intradermal pre-exposure prophylaxis. Journal of Travel Medicine. 29 (2), (2022).
- Ramakrishnan, M. A. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World Journal of Virology. 5 (2), 85-86 (2016).
- Rudd, R. J., Appler, K. A., Wong, S. J. Presence of cross-reactions with other viral encephalitides in the indirect fluorescent-antibody test for diagnosis of rabies. Journal of Clinical Microbiology. 51 (12), 4079-4082 (2013).
- Fooks, A. R., Jackson, A. C. . Rabies: scientific basis of the disease and its management. , (2020).
- Paldanius, M., Bloigu, A., Leinonen, M., Saikku, P. Measurement of Chlamydia pneumoniae-specific immunoglobulin A (IgA) antibodies by the microimmunofluorescence (MIF) method: comparison of seven fluorescein-labeled anti-human IgA conjugates in an in-house MIF test using one commercial MIF and one enzyme immunoassay kit. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 10 (1), 8-12 (2003).
- Rodriguez, M. C., Fontana, D., Garay, E., Prieto, C. Detection and quantification of anti-rabies glycoprotein antibodies: current state and perspectives. Applied Microbiology and Biotechnology. 105 (18), 6547-6557 (2021).
- Katz, I. S. S., Guedes, F., Fernandes, E. R., Dos Ramos Silva, S. Immunological aspects of rabies: a literature review. Archives of Virology. 162 (1), 3251-3268 (2017).
- Moore, S. M., Hanlon, C. A. Rabies-specific antibodies: measuring surrogates of protection against a fatal disease. PLoS Neglected Tropical Diseases. 4 (3), 595 (2010).
