Células estromais mesenquimais derivadas de tecido adiposo co-cultivadas com glia mista primária para reduzir a inflamação induzida por príons

Arielle J. D. Hay; Katriana A. Popichak; Mark D. Zabel; Julie A. Moreno

doi:10.3791/65565

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Artigo de método

Células estromais mesenquimais derivadas de tecido adiposo co-cultivadas com glia mista primária para reduzir a inflamação induzida por príons

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DOI:

10.3791/65565

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11 de agosto de 2023

Arielle J. D. Hay¹^,² , Katriana A. Popichak¹^,² , Mark D. Zabel¹^,² , Julie A. Moreno¹^,³

¹Prion Research Center, Colorado State University, ²Department of Microbiology, Immunology and Pathology, College of Veterinary Medicine and Biomedical Sciences, Colorado State University, ³Department of Environmental and Radiological Health Sciences, College of Veterinary Medicine and Biomedical Sciences, Colorado State University

Neste artigo

Resumo

As células estromais mesenquimais derivadas do tecido adiposo (AdMSCs) têm propriedades imunomoduladoras potentes, úteis para o tratamento de doenças associadas à inflamação. Demonstramos como isolar e cultivar AdMSCs murinas e glia mista primária, estimular AdMSCs para regular positivamente genes anti-inflamatórios e fatores de crescimento, avaliar a migração de AdMSCs e co-cultivar AdMSCs com glia primária mista infectada por príons.

Resumo

As células estromais mesenquimais (MSCs) são potentes reguladores da inflamação por meio da produção de citocinas anti-inflamatórias, quimiocinas e fatores de crescimento. Essas células mostram uma capacidade de regular a neuroinflamação no contexto de doenças neurodegenerativas, como a doença do príon e outros distúrbios de desdobramento de proteínas. As doenças priônicas podem ser esporádicas, adquiridas ou genéticas; Eles podem resultar do desdobramento e agregação da proteína príon no cérebro. Essas doenças são invariavelmente fatais, sem tratamentos disponíveis.

Um dos primeiros sinais da doença é a ativação de astrócitos e microglia e inflamação associada, que ocorre antes da agregação de príons detectável e perda neuronal; assim, as propriedades anti-inflamatórias e regulatórias das MSCs podem ser colhidas para tratar a astrogliose na doença do príon. Recentemente, mostramos que as MSCs derivadas do tecido adiposo (AdMSCs) co-cultivadas com células BV2 ou glia mista primária reduzem a inflamação induzida por príons por meio da sinalização parácrina. Este artigo descreve um tratamento confiável usando AdMSCs estimuladas para diminuir a inflamação induzida por príons.

Uma população heterozigótica de AdMSCs pode ser facilmente isolada do tecido adiposo murino e expandida em cultura. Estimular essas células com citocinas inflamatórias aumenta sua capacidade de migrar para o homogeneizado cerebral infectado por príons e produzir moduladores anti-inflamatórios em resposta. Juntas, essas técnicas podem ser usadas para investigar o potencial terapêutico das MSCs na infecção por príons e podem ser adaptadas para outras doenças neuroinflamatórias e de desdobramento de proteínas.

Introdução

A inflamação glial desempenha um papel fundamental em uma variedade de doenças neurodegenerativas, incluindo Parkinson, Alzheimer e doença do príon. Embora a agregação anormal de proteínas seja atribuída a grande parte da patogênese da doença e da neurodegeneração, as células gliais também desempenham um papel na exacerbação disso ^1,2,3. Portanto, direcionar a inflamação induzida pela glia é uma abordagem terapêutica promissora. Na doença do príon, a proteína príon celular (PrP^C) se dobra incorretamente para a proteína príon associada à doença (PrP^Sc), q....