Etablering av en modell for oronasal fistelmus

Summary

Denne artikkelen skisserer en trinnvis prosedyre for å etablere en musmodell med en oronasal fistel. Den oronasale fistel ble opprettet ved å benytte oppvarmet oftalmologisk cautery for å skade midtlinjen delen av den harde ganen, noe som resulterer i dannelsen av en åpning mellom munnhulen og nesehulen.

Abstract

Denne studien presenterer en metode som benytter oppvarmet oftalmologisk kauteri for å utvikle en levedyktig modell for å undersøke oronasale fistler. C57BL/6-mus ble brukt til å etablere modellen for oronasal fistel (ONF). For å lage ONF ble musene bedøvet, immobilisert og deres harde ganer ble utsatt. Under det kirurgiske inngrepet ble det indusert en 2,0 x 1,5 mm slimhinneskade i midtlinjen av den harde ganen ved hjelp av oftalmologisk kauteri. Det var avgjørende å kontrollere størrelsen på ONF og minimere blødning for å sikre suksessen til eksperimentet. Verifikasjon av ONF-modellens effektivitet ble utført 7. dag etter operasjonen, og omfattet både anatomiske og funksjonelle vurderinger. Tilstedeværelsen av neseseptum i munnhulen og utstrømningen av sterilt vann fra neseborene ved injeksjon i munnhulen bekreftet vellykket etablering av ONF-modellen. Modellen viste en praktisk og vellykket oronasal fistel, karakterisert ved lav dødelighet, signifikante vektendringer og minimal variasjon i ONF-størrelse. Fremtidige studier kan vurdere å vedta denne metoden for å belyse mekanismene for gane sårheling og utforske nye behandlinger for oronasale fistler.

Introduction

Oronasal fistel (ONF), en unormal åpning mellom munn- og nesehulen, manifesterer seg klinisk som en defekt i et strukturelt område fra alveolarprosessen til drøvelen, som vanligvis oppstår som en komplikasjon etter ganespaltereparasjon¹. Pasienter med ONF opplever matrefluks, artikulasjonsforstyrrelser og nedsatt velofaryngeal funksjon, som påvirker livskvaliteten betydelig ^2,3,4. Frekvensen av postoperativ ONF varierer fra 2,4% til 55% på grunn av faktorer som spaltbredde, Veau-type og kirurgisk metode 5,6,7,8. I tillegg er gjentakelsesraten etter ONF-reparasjon høy, fra 0% til 43%⁹.

Flere nye behandlinger har nylig vist løfte innen ONF, inkludert forskjellige materialer, medisiner og nye teknikker 10,11,12,13,14,15,16,17. Nøyaktig evaluering av terapeutiske effekter er viktig da det gir grunnlag for valg og videreutvikling av ONF-behandlinger. Det er imidlertid utfordrende å få en gyldig vurdering på kort sikt for andre terapeutiske effekter enn kirurgi, da egenskapene til ONF varierer mellom ulike pasienter. Derfor er det nødvendig å etablere en ONF-sykdomsmodell for å verifisere effektiviteten av disse behandlingsmetodene.

I flere tiår har forskere generert oronasal fistel (ONF) -modellen i forskjellige dyrearter, inkludert rotter^18,19, gris 20,21, minigriser²² og hunder ^23, da disse artene har en betydelig hard gane egnet for kirurgisk manipulasjon. Imidlertid har mus en genetisk sekvens og hele genom som ligner på mennesker, noe som gjør dem til en viktig modell for forskning og utvikling av nye stoffer^24,25,26. Videre gir mus liten variasjon fra batch til batch, noe som gjør dem til et gunstig valg for å etablere ONF-modellen^12,13,27.

Imidlertid ble de detaljerte trinnene for å lage ONF ikke beskrevet, og stabiliteten til ONF-størrelsen ble ikke tatt i betraktning. I tillegg baserte verifikasjonen av ONF-dannelse seg utelukkende på observasjon²⁸, uten å sikre direkte kommunikasjon mellom munn- og nesehulen. Det ble ikke demonstrert på andre måter, for eksempel musens tap av kroppsvekt på grunn av vanskeligheter med å spise forårsaket av ONF. Videre ble normal variasjon i sårstørrelse ikke vurdert, noe som er avgjørende for studier på legemidler eller materialer som fremmer eller hemmer sårtilheling. Derfor er det et sterkt behov for å etablere en stabil og validert ONF-modell.

Målet med denne studien var å utvikle en praktisk ONF-modell som adresserer de nevnte problemene, med håp om at denne protokollen vil tjene som grunnlag for fremtidig forskning på mekanismene for palatal sårheling og nye behandlinger for ONF.

Protocol

Alle dyreprosedyrer i denne studien ble gjennomgått og godkjent av den etiske komiteen ved West China School of Stomatology, Sichuan University. Voksne C57BL/6-mus (hunner) ble brukt i denne studien. 1. Kirurgisk forberedelse Samle de nødvendige kirurgiske instrumentene for prosedyren: germinator, oftalmologisk kauteri, mikrokirurgisk saks, mikrokirurgisk pinsett, sprøyter og nåler (26 g x 0,63 tommer) (figur 1A,B) (…

Representative Results

For å vurdere gjennomførbarheten og stabiliteten til denne eksperimentelle metoden ble samme prosedyre utført på ti mus, og observasjoner ble gjort angående dødelighet, endringer i sårstørrelse, kroppsvekt og histologisk analyse. Musene ble avlivet på dag 7. Prosedyren viste lav dødelighet. Den oftalmologiske kauterien og spiratoren, avbildet i figur 1A-C, var nøkkelinstrumentene som ble brukt i dette eksperimentet. ONF…

Discussion

Forskere har utforsket ulike materialer, stoffer og nye teknikker for behandling av ONF 10,11,12,13,14,15,16,17. Med fremskritt i kirurgiske prosedyrer har forekomsten og tilbakefallet av ONF blitt redusert. På grunn av sykdommens unike egenskaper er imidl…

Materials

Germinator	Electron Microscopy Sciences	66118-20	Heating and disinfection equipment
Latex gloves	Allmed		or similar
Lights	Olympus	A1813
Meloxicam	MedChemExpress	HY-B0261	crushed; 5 mg/kg
Microsurgical instruments (scissors and tweezers)	Jiangsu Tonghui Medical Devices Co.	M-Y-0087	Surgical instrument
Ophthalmologic cautery	Suqian Wenchong Medical Equipment Co.	1.00234E+13	Surgical instrument
Sterile cotton,	Yancheng Begu Technology Co.		or similar
Sterile metal foil	Biosharp		or similar
Sterile sheets	3M	XH003801129	or similar
Surgical drapes	Yancheng Begu Technology Co.		or similar
Syringes	Yancheng Begu Technology Co.	S-015301	or similar
Tape	Bkmamlab		or similar
Temperature maintenance device	Harvard Apparatus	LE-13-2104
Zoletil50	Virbac		80 mg/kg