Aqui, apresentamos um protocolo para avaliar a nocicepção em camundongos infectados com Trypanosoma evansi, utilizando o aparelho eletrônico de von Frey como ferramenta, medindo limiares mecânicos da pata traseira e vísceras.
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Artigo de método
Eletrônica de von Frey associada à Escala de Cartas de Camundongos para Avaliação de Alodinia e Dor em Camundongos Infectados por Trypanosoma evansi
Neste artigo
Resumo
Resumo
A patogênese das doenças infecciosas ainda é um campo complexo de estudar. O curso de vários sinais clínicos, como alodinia e dor, pode ser observado em animais domésticos. No entanto, o conhecimento de suas vias e o tratamento correto necessitam de experimentos controlados, muitos deles utilizando animais de laboratório. A medição de alterações nos limiares mecânicos da pata traseira e das vísceras é uma técnica útil para observar mudanças na percepção da dor em roedores. A resposta de abstinência pode ser medida primeiro em testes de linha de base, o que cria um melhor controle dos grupos experimentais. Testes subsequentes podem ser realizados após a indução da infecção e adição de medicamentos ao protocolo. O uso de um aparelho eletrônico de von Frey associado ao uso de uma escala facial para observar alterações semelhantes à dor permite uma avaliação simples, precisa e consistente para avaliar a alodinia e a dor em camundongos. Assim, experimentos utilizando a presente metodologia para infecção por Trypanosoma evansi representam um método útil para avaliar alodinia e dor em animais infectados em laboratório, que pode ser aplicado ao tratamento convencional para animais de criação.
Introdução
O Trypanosoma evansi é o agente etiológico da doença denominada "surra" ou "mal-das-cadeiras" na América do Sul 1,2. Comumente acomete equinos e bovinos, mas também a fauna silvestre, sendo transmitida por morcegos hematófagos, tabanídeos e picadas de moscas estomoxas 1,3. A surra é uma doença importante em animais domésticos, que pode ser fatal na ausência do tratamento correto, exibindo sinais clínicos inespecíficos, como anemia, perda de apetite e peso, fraqueza muscular e aborto, que podem variar de acordo com o hospedeiro e a região geogr....
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Protocolo
Todos os experimentos foram realizados com camundongos Swiss fêmeas adultas de 10 semanas de idade (35-55 g). Os animais foram alojados em gaiolas de polissulfona (3-5 animais por gaiola) em uma sala com temperatura controlada (21 ± 1 °C), ciclo de 12 h de luz/12 h de escuridão e ração de laboratório padrão e água ad libitum. Dez animais foram designados para cada grupo em cada teste para demonstrar os efeitos consistentes dos tratamentos medicamentosos. O delineamento experimental foi submetido e aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade do Estado de Santa Catarina (CEUA) (número do protocolo: 6019201123). Todos os experimentos com animais obedeceram às ....
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Resultados
Diminuição do limiar mecânico devido à infecção por T. evansi avaliada pelo aparelho eletrônico de von Frey tanto na pata traseira direita quanto nos tecidos viscerais
O experimento foi conduzido ao longo de 5 dias, de acordo com dados prévios relacionados à amostra disponível de T. evansi 2. Os camundongos infectados começaram a mostrar uma diferença significativa no limiar mecânico na pata traseira direita no dia 3 após a infecção e permaneceram significativ.......
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Discussão
Uma etapa crítica em experimentos envolvendo animais infectados é o controle dos níveis de parasitemia. Diferentes cepas de T. evansi podem se comportar de maneiras divergentes em camundongos, levando de infecções agudas a crônicas 2,4,5,6. Além disso, alterações na dose de infecção podem diminuir ou prolongar o tempo de sobrevivência dos camundongos. Portanto, a obtenção de uma curva .......
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.
Agradecimentos
Os autores agradecem especialmente à Universidade do Estado de Santa Catarina pelo apoio financeiro, ao Laboratório de Farmacologia pelos animais e pelo espaço, e ao Laboratório de Bioquímica de Hemoparasitas e Vetores pela amostra de sangue criopreservado infectado com T. evansi utilizada nesses experimentos.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Agulha de 26 G 1/2" acoplada à seringa de insulina | TKL | 80288090100 | Usado para fundir soluções em animais de laboratório |
| Acessórios para analgesímetro von Frey | INSIGHT | EFF 303 | Caixa de contenção com suporte para avaliação de analgesímetro digital |
| D-(+)-Glicose | SIGMA-ALDRICH | G7021 | Um monossacarídeo que é a principal fonte de energia na forma de ATP para organismos vivos |
| Analgesímetro digital | INSIGHT | von Frey Wi-Fi | O von Frey Wi-Fi é um dispositivo portátil utilizado para avaliar a sensibilidade tecidual a estímulos mecânicos |
| Gilson tipo 10 µ Ponta de polipropileno L | CRALPLAST | 18261 | Polipropileno para ser utilizado em aparelhos electrónicos de von Frey, recomendado para avaliação da alodinia da pata traseira |
| Banho-maria de laboratório | INSTRUMENTO DE SER | BW-22P | Utilizado para aquecer substâncias líquidas e semi-sólidas contidas em recipientes apropriados a uma temperatura específica |
| Solução salina tamponada com fosfato | SIGMA-ALDRICH | 806552 | Tampão de solução salina balanceada utilizado para uma variedade de aplicações de cultura celular |
| Camundongos suíços (Mus musculus) de ambos os | sexos UFSC | suíços | Webster utilizados para experimentos controlados |
| Trypanosoma evansi criopreservada amostra | UDESC-Amostra | utilizada para infectar todos os camundongos, cedida pelo Laboratório | |
| de Bioquímica de Hemoparasitas e VetoresUniversal tipo 10 µ Ponta de polipropileno L | CRALPLAST | 18171 | Polipropileno para uso em aparelhos eletrônicos de von Frey, recomendado para avaliação de alodinia visceral |
Referências
- Desquesnes, M., et al. Trypanosoma evansi and surra: a review and perspectives on origin, history, distribution, taxonomy, morphology, hosts, and pathogenic effects. BioMed Research International. 2013, 194176(2013).
- Cipriani, D. S., et al.
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Reimpressões e permissões
