O ultrassom Doppler revolucionou a avaliação do fluxo sanguíneo de órgãos e é amplamente utilizado em pesquisas e cenários clínicos. Embora a avaliação baseada em ultrassonografia com Doppler da contração do fluxo sanguíneo muscular da perna seja comum em estudos em humanos, a confiabilidade desse método requer investigação adicional. Portanto, o objetivo deste estudo foi investigar a confiabilidade intra-dia do teste-reteste, teste-reteste inter-dias e interexaminadores do ultrassom Doppler para avaliar o fluxo sanguíneo da perna durante o repouso e as extensões graduadas de joelho unipodal (0 W, 6 W, 12 W e 18 W), com a sonda ultrassonográfica sendo removida entre as medidas. O estudo incluiu trinta indivíduos saudáveis (idade: 33 ± 9,3, homens/mulheres: 14/16) que visitaram o laboratório em dois dias experimentais diferentes, separados por 10 dias. O estudo não controlou os principais fatores de confusão, como estado nutricional, hora do dia ou estado hormonal. Nas diferentes intensidades de exercício, os resultados demonstraram alta confiabilidade intra-dia com coeficiente de variação (CV) variando de 4,0% a 4,3%, confiabilidade aceitável entre os dias com CV variando de 10,1% a 20,2% e confiabilidade interexaminadores com CV variando de 17,9% a 26,8%. Portanto, em um cenário clínico da vida real, onde o controle de vários fatores ambientais é um desafio, o ultrassom Doppler pode ser usado para determinar o fluxo sanguíneo da perna durante o exercício submáximo de extensor do joelho unipodal com alta confiabilidade intradiária e confiabilidade aceitável entre os dias quando realizada pelo mesmo ultrassonografista.