JoVE Journal > Biology
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Resultados
Discussion
Declarações
Acknowledgements
Materials
Referências
Tadução automática
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Biologia

פיתוח מבחני RT-qPCR בזמן אמת לזיהוי SARS-CoV-2, שפעת A/B ו-MERS-CoV

Published: November 10, 2023
doi:
10.3791/65822
, , , , , ,
1Biological and Environmental Sciences and Engineering Division (BESE),King Abdullah University of Science and Technology (KAUST)

Summary

אנו מציגים שתי ערכות RT-qPCR חד-שלביות מבוססות בדיקה עבור וירוסים נשימתיים נפוצים. הבדיקה הראשונה היא עבור SARS-CoV-2 (N), שפעת A (H1N1 ו- H3N2) ושפעת B. השני הוא עבור SARS-Cov-2 (N) ו- MERS (UpE ו- ORF1a). בדיקות אלה ניתן ליישם בהצלחה בכל מעבדה מיוחדת.

Abstract

תסמונת הנשימה החריפה החמורה קורונה 2 (SARS-CoV-2) הגורמת למחלת נגיף הקורונה 2019 (COVID-19) מהווה איום חמור על בריאות הציבור הרחב. במהלך עונות השפעת, התפשטות SARS-CoV-2 ונגיפים נשימתיים אחרים עלולה לגרום לעומס כלל האוכלוסייה של מחלות נשימה שקשה להתמודד איתו. לשם כך, יהיה צורך להשגיח בקפידה על הנגיפים הנשימתיים SARS-CoV-2, שפעת A, שפעת B ותסמונת הנשימה המזרח תיכונית (MERS-CoV) בעונות הסתיו והחורף הקרובות, במיוחד במקרה של SARS-CoV-2, שפעת A ושפעת B, החולקים גורמים אפידמיולוגיים דומים כמו אוכלוסיות רגישות, אופן העברה ותסמונות קליניות. ללא בדיקות ספציפיות למטרה, זה יכול להיות מאתגר להבדיל בין מקרים של וירוסים אלה בשל הדמיון ביניהם. בהתאם לכך, בדיקת מולטיפלקס רגישה וממוקדת שיכולה להבדיל בקלות בין מטרות ויראליות אלה תהיה שימושית עבור אנשי מקצוע בתחום הבריאות. במחקר זה, פיתחנו בדיקה מבוססת PCR בזמן אמת באמצעות ערכת RT-qPCR חד-שלבית שפותחה על ידי R3T לזיהוי סימולטני של SARS-CoV-2, שפעת A, שפעת B ו- SARS-CoV-2, MERS-CoV. עם 10 עותקים בלבד של הרנ”א הסינתטי שלהם, אנו יכולים לזהות בהצלחה מטרות SARS-CoV-2, שפעת A, שפעת B ו- MERS-CoV בו זמנית עם 100% ספציפיות. בדיקה זו נמצאה מדויקת, אמינה, פשוטה, רגישה וספציפית. השיטה שפותחה יכולה לשמש כבדיקת אבחון אופטימלית של SARS-CoV-2, שפעת A, שפעת B ו- SARS-CoV-2, בדיקת אבחון MERS-CoV בבתי חולים, מרכזים רפואיים ומעבדות אבחון, כמו גם למטרות מחקר.

Introduction

המגיפה של מחלת הקורונה המתמשכת 2019 (COVID-19) נגרמת על ידי נגיף הקורונה החדש המכונה תסמונת הנשימה החריפה החמורה קורונה 2 (SARS-CoV-2)1. בשל ההדבקה החזקה של SAR-CoV-2 ויכולת ההעברה המהירה, מגיפת COVID-19 הופיעה בעיר ווהאן שבסין והתפשטה במהירות ברחבי העולם. זה הוביל בסופו של דבר לתחילת סימני מצוקה נשימתית ואפילו למוות 2,3,4. COVID-19 הוכרז כמגיפה ביותר מ -213 מדינות, בציפייה לעלייה תלולה במספר המקרים המאומתים, כפי שמעידים המאמרים שפורסמו על ידי מחקרים שונים 3,5. COVID-19 מועבר בעיקר על ידי טיפות נשימה קטנות שאנשים נגועים משחררים לסביבה ולאחר מכן נחשפים לאנשים פגיעים באמצעות שאיפה או מגע קרוב עם משטחים מזוהמים. כאשר טיפות אלה באות במגע עם רירית העיניים, הפה או האף, אדם עלול להידבק6. נתונים סטטיסטיים שפורסמו על ידי ארגון הבריאות העולמי (WHO) מראים כי היו יותר מ -76 מיליון מקרים מאושרים של המגיפה ברחבי העולם, עם מדהים 7 מיליון מקרי מוות7. לפיכך, האו”ם סיווג את המגפה הנגרמת על ידי מחלת COVID-19 כאסון בשל השפעתה הישירה על חייהם של מיליארדי אנשים ברחבי העולם והיו לה השפעות כלכליות, סביבתיות וחברתיות מרחיקות לכת.

יוזמות בתחום בריאות הציבור, כולל בדיקות יסודיות, גילוי מוקדם, מעקב אחר מגעים ובידוד מקרים, הוכחו כולן כחיוניות בשמירה על המגיפה הזו תחת שליטה 8,9,10,11. חודשי החורף יגבירו את התפוצה של וירוסים נשימתיים אחרים כמו שפעת A ו- B עם תסמינים דמויי COVID-19 שיקשו על זיהוי, איתור ובידוד מקרי COVID-19 בשלב מוקדם. בכל שנה, התפרצות שפעת A ו- B מתחילה בסוף הסתיו או בתחילת ינואר עם עונתיות צפויה12. תכונות אפידמיולוגיות רבות משותפות לנגיפי SARS-CoV-2 ושפעת. חוץ מזה, שיתוף קווי דמיון באוכלוסיות רגישות הכוללות ילדים, קשישים, מדוכאי חיסון, ואנשים עם תחלואה נלווית כרונית כגון אסטמה, מחלת ריאות חסימתית כרונית, אי ספיקת לב וכליות, או סוכרת12,13. נגיפים אלה חולקים לא רק אוכלוסיות פגיעות אלא גם נתיבי העברה של מגע וטיפות נשימה14. הצפי הוא שחולים עלולים להידבק ביותר מנגיפים נשימתיים אחדים ככל שעונת השפעת מתקרבתל-14. לשם כך, ההקרנה של SARS-CoV-2 ונגיפי השפעת צריכה להיעשות על חולים סימפטומטיים לפני שהם מבודדים. ביצוע בדיקות נפרדות לשלושת הנגיפים (SARS-CoV-2, שפעת A ושפעת B) אינו אפשרי בשל המחסור העולמי במשאבים למיצוי ואבחון חומצות גרעין. כדי לסנן את כולם בתגובה אחת, יש לפתח שיטה או מבחן.

תסמונת הנשימה המזרח תיכונית (MERS)-CoV היא בת משפחה של נגיף הקורונה האנושי (CoV). המבודד הראשון של נגיף MERS-CoV הגיע מחולה מאושפז בערב הסעודית שמת בספטמבר 2012 עקב בעיות נשימה חריפות15. ישנן ראיות המצביעות על כך שמארח מאגר בולט עבור MERS-CoV הוא גמלים דרומטריים. הוכח כי וירוסים מגמלים דרומטריים נגועים הם זואונוטיים ולכן יכולים להדביק בני אדם16,17. בני אדם הנגועים בנגיף זה יכולים להפיץ אותו לאחרים באמצעות מגע קרוב18. נכון ל-26 בינואר 2018, היו 2143 מקרים מאושרים במעבדה של זיהום MERS-CoV, כולל 750 מקרי מוות ברחבי העולם,19. תסמיני MERS-CoV האופייניים ביותר הם שיעול, חום וקוצר נשימה. זיהומים MERS-CoV דווחו גם להציג דלקת ריאות, שלשולים ותסמינים של מחלת מערכת העיכול20. נכון לעכשיו, אין חיסון מסחרי או טיפול ספציפי עבור MERS-CoV זמין. לכן, אבחון מהיר ומדויק חיוני למניעת התפרצויות MERS-CoV נרחבות ולהבחנה בין MERS-CoV למחלת SARS-CoV-2.

עד כה, גישות רבות הוצעו כדי לזהות וירוסים אלה כגון multiplex RT-PCR 21,22,23,24,25, CRISPR/Cas1226,27, CRISPR/Cas928, ו CRISPR/Cas329, זרימה צידית immunoassay30, חיישנים ביומולקולריים מבוססי נייר31, בדיקת שרלוק בסיר אחד 32, DNA aptamer33, לולאה בתיווך איזותרמי הגברה (LAMP)19,34 וכו’. לכל אחת מהשיטות הנ”ל יתרונות וחסרונות ייחודיים מבחינת רגישות וספציפיות. בין שיטות אלה, הבדיקה מבוססת הגברה של חומצות גרעין: multiplex qRT-PCR, היא הנפוצה ביותר ונחשבת לתקן הזהב לאבחון SARS-CoV-2, שפעת A, שפעת B ו- MERS-CoV.

במחקר זה, תכננו והערכנו שילובי פריימר שונים ובדיקות לזיהוי יעיל, מדויק ובו-זמני של SARS-CoV-2, שפעת A, שפעת B ו- SARS-CoV-2, MERS-CoV תוך שימוש ב- RNA נגיפי סינתטי טוויסט סטנדרטי. הבדיקות המרובות שפותחו עבור גני המטרה MERS-CoV או SARS-CoV-2 מומלצות על ידי ארגון הבריאות העולמי (WHO). גנים אלה מקודדים בדרך כלל חלבונים וקומפלקסים התורמים להיווצרות קומפלקס שכפול/שעתוק (RTC)35, כגון האזור בתוך מסגרת הקריאה הפתוחה 1a (ORF1a) המשמש לבדיקת MERS-CoV. בנוסף, חלבונים מבניים מקודדים על ידי הגנים המשמשים בבדיקות אבחון כגון האזור במעלה הזרם של גן המעטפת (upE) וגן נוקלאוקפסידים (N) המשמשים לבדיקות MERS-CoV ו- SARS-Cov-2, בהתאמה35,36. השתמשנו בערכת RT-qPCR חד-שלבית R3T כדי להקים את RT-qPCR לזיהוי וירוסים37. זיהוי וירוסים, רגישות, ספציפיות וטווח דינמי של ערכת RT-qPCR בצעד אחד R3T וערכות פריימר נבדקו והוערכו באמצעות דילולים סדרתיים פי 10 של RNA סינתטי עם טוויסט סטנדרטי. מגבלת הזיהוי המעשית הנמוכה ביותר הייתה כ-10 עותקי תמלילים לכל תגובה. כתוצאה מכך, ניתן להשתמש בהצלחה בערכת RT-qPCR החד-שלבית R3T ובערכות פריימר/בדיקה וליישום לאבחון שגרתי בו זמנית של SARS-CoV-2, שפעת A, שפעת B ו- SARS-CoV-2, MERS-CoV.

Protocol

1. ביטוי וטיהור Taq פולימראז בנו פלסמיד עם תג הקסה-היסטידין ב-C-terminus של האנזים. המר 50 ננוגרם של וקטור הביטוי לזן E. coli BL21-(DE3) בהתאם לפרוטוקול הסטנדרטי38. חסן את התאים שעברו טרנספורמציה בארבע צלוחיות 6 L שכל אחת מהן מכילה 2 L של מרק מדיה 2YT ב 37 ° C עם ניעור ב 170…

Representative Results

בשנים האחרונות חלה התקדמות משמעותית בגישת האבחון לאיתור נגיפים נשימתיים נפוצים בגישותPCR 21,22,23,24,25. עם זאת, למרות התקדמות זו, גישת המרובב, המאפשרת זיהוי וירוסים מרובים בבדיקה אחת, לא יושמה באופן נרחב, ב?…

Discussion

קיים נטל כלכלי כבד על מערכת הבריאות בעולם כתוצאה משיעורי ההדבקה והתמותה הגבוהים עקב התפשטות וירוסים נשימתיים נפוצים כגון SARS-CoV-2, שפעת A/B וגרסאות MERS-CoV 12,19,20. מתוך תחושת אחריות להקלת נטל זה, הבנו את הצורך בבדיקת אבחון מהירה, מדויקת ונגישה כגו…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי אוניברסיטת המלך עבדאללה למדע וטכנולוגיה באמצעות מימון ליבה והאתגר הגדול של המונח הלאומי (NTGC) ל- S.M.H.

Materials

0.45 μm filter cups Thermo Scientific 291-4545
10X Tris-Glycine SDS running buffer Novex LC2675
6-well tissue culturing plates Corning 353046
Ammonium sulfate Fisher Scientific A701-3
Ampicillin Corning 61-238-RH
Cation exchange (HiTrap SP HP) 5 mL Cytiva 17-1152-01
D-(+)-Biotin, 98+% Thermo Scientific A14207.60
DH10Bac competent cells Fisher Scientific 10361012
Dialysis bag (Snakeskin 10,000 MWC) Thermo Scientific 68100
Dithiothreitol (DTT) Thermo Scientific R0862
Dnase/Rnase Free Distilled Water Ambion AM9930
dNTPs Thermo Scientific R0192
E. coli BL21(DE3) competent cells Invitrogen C600003
EDTA Fisher Scientific BP120-1
Elution Buffer Qiagen 19086
ESF 921 insect cell culture medium (Insect cells media) Expression Systems 96-001-01
FBS Solution Gibco A38400-01
Fugene (transfection reagent) Promega E2311
Gentamicin Fisher Scientific 15750060
Glycerol Sigma Aldrich G5516-500
IGEPAL CA-630 Sigma Aldrich I8896-100ml
Imidazole Sigma Aldrich 56750-1Kg
Influenza A (H1N1) synthetic RNA Twist Bioscience 103001
Influenza A (H3N2)  synthetic RNA Twist Bioscience 103002
Influenza B synthetic RNA Twist Bioscience 103003
IPTG Gold Biotechnology I3481C100
Kanamycin Gibco 11815-032
LB Agar Fisher Scientific BP1425-500
LB Broth media Fisher Scientific BP1426-500
Lysozyme Sigma Aldrich L6876-10G
Magnesium Chloride Sigma Aldrich 13152-1Kg
MERS-CoV synthetic RNA Twist Bioscience 103015
MicroAmp Fast Optical 96-well Reaction plates with Barcode (0.1 mL) Applied Biosystems 10310855
Mini- PROTEAN TGX Precast Gel Bio-Rad 456-1093
Miniprep kit Qiagen 27106
Ni-NTA Excel (HisTrap Excel) 5 mL Cytiva 17-3712-06
Ni-NTA HP (HisTrap HP) 5 mL Cytiva 17-5248-02
Optical Adhesice Covers (PCR Compatible,DNA/Rnase/PCR Inhibitors Free Applied Biosystems 4311971
Potassium Chloride Fisher Bioreagents BP366-1
Primers and Probes Integrated DNA Technologies, Inc.
Protease Inhibitor Mini tablets EDTA-Free Thermo Scientific A32955
Protein marker Fermentas 26616
RT-qPCR machine (QuantStudio 7 Flex) Applied Biosystems
S.O.C medium Fisher Scientific 15544034
SARS-CoV-+A2:C442 synthetic RNA Twist Bioscience 102024
Sf9 insect cells Gibco A35243
Sodium Chloride Sigma Aldrich S3014-1Kg
StrepTrap XT 5 mL Cytiva 29401323
Tetracycline IBI Scientific IB02200
Tris Base Molecular Biology Grade Promega H5135
Tris-HCl Affymetrix 22676
Tween 20 Sigma Aldrich P1379-100ml
X-Gal Invitrogen B1690
DOWNLOAD MATERIALS LIST

Referências

  1. Hu, B., Guo, H., Zhou, P., Shi, Z. L. Characteristics of SARS-CoV-2 and COVID-19. Nat Rev Microbiol. 19 (3), 141-154 (2021).
  2. Zhu, N., et al. A novel Coronavirus from patients with Pneumonia in China, 2019. N Engl J Med. 382 (8), 727-733 (2019).
  3. Huang, C., et al. Clinical features of patients infected with 2019 novel coronavirus in Wuhan, China. Lancet. 395 (10223), 497-506 (2020).
  4. Wu, F., et al. A new coronavirus associated with human respiratory disease in China. Nature. 579 (7798), 265-269 (2020).
  5. Yang, S., et al. Deep learning for detecting corona virus disease 2019 (COVID-19) on high-resolution computed tomography: a pilot study. Ann Transl Med. 8 (7), 450 (2020).
  6. El Hassan, M., et al. A review on the transmission of COVID-19 based on cough/sneeze/breath flows. Eur Phys J Plus. 137 (1), 1 (2022).
  7. . WHO Coronavirus (COVID-19) Dashboard Available from: https://covid19.who.int (2023)
  8. Kucharski, A. J., et al. Effectiveness of isolation, testing, contact tracing, and physical distancing on reducing transmission of SARS-CoV-2 in different settings: a mathematical modelling study. Lancet Infect Dis. 20 (10), 1151-1160 (2020).
  9. Reddy, K. P., et al. Cost-effectiveness of public health strategies for COVID-19 epidemic control in South Africa: a microsimulation modelling study. Lancet Glob Health. 9 (2), e120-e129 (2021).
  10. Cheng, H. Y., et al. Contact tracing assessment of COVID-19 transmission dynamics in Taiwan and risk at different exposure periods before and after symptom onset. JAMA Intern Med. 180 (9), 1156-1163 (2020).
  11. Kretzschmar, M. E., et al. Impact of delays on effectiveness of contact tracing strategies for COVID-19: a modelling study. Lancet Public Health. 5 (8), e452-e459 (2020).
  12. Krammer, F., et al. Influenza. Nat Rev Dis Primers. 4 (1), 3 (2018).
  13. Yang, J., et al. Prevalence of comorbidities and its effects in patients infected with SARS-CoV-2: a systematic review and meta-analysis. Int J Infect Dis. 94, 91-95 (2020).
  14. Lansbury, L., Lim, B., Baskaran, V., Lim, W. S. Co-infections in people with COVID-19: a systematic review and meta-analysis. J Infect. 81 (2), 266-275 (2020).
  15. Zaki, A. M., van Boheemen, S., Bestebroer, T. M., Osterhaus, A. D., Fouchier, R. A. Isolation of a novel coronavirus from a man with pneumonia in Saudi Arabia. N Engl J Med. 367 (19), 1814-1820 (2012).
  16. Azhar, E. I., et al. Evidence for camel-to-human transmission of MERS coronavirus. N Engl J Med. 370 (26), 2499-2505 (2014).
  17. Ling, Y., Qu, R., Luo, Y. Clinical analysis of the first patient with imported Middle East respiratory syndrome in China. Zhonghua Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue. 27 (8), 630-634 (2015).
  18. Nazer, R. I. Outbreak of Middle East Respiratory Syndrome-Coronavirus causes high fatality after cardiac operations. Ann Thorac Surg. 104 (2), e127-e129 (2017).
  19. Huang, P., et al. A rapid and specific assay for the detection of MERS-CoV. Front Microbiol. 9, 1101 (2018).
  20. Ezhilan, M., Suresh, I., Nesakumar, N. SARS-CoV, MERS-CoV and SARS-CoV-2: A diagnostic challenge. Measurement (Lond). 168, 108335 (2021).
  21. Ulloa, S., et al. A simple method for SARS-CoV-2 detection by rRT-PCR without the use of a commercial RNA extraction kit. J Virol Methods. 285, 113960 (2020).
  22. Kudo, E., et al. Detection of SARS-CoV-2 RNA by multiplex RT-qPCR. PLoS Biol. 18 (10), e3000867 (2020).
  23. Norz, D., Hoffmann, A., Aepfelbacher, M., Pfefferle, S., Lutgehetmann, M. Clinical evaluation of a fully automated, laboratory-developed multiplex RT-PCR assay integrating dual-target SARS-CoV-2 and influenza A/B detection on a high-throughput platform. J Med Microbiol. 70 (2), 001295 (2021).
  24. Yun, J., et al. Evaluation of three multiplex real-time reverse transcription PCR assays for simultaneous detection of SARS-CoV-2, Influenza A/B, and Respiratory Syncytial virus in nasopharyngeal swabs. J Korean Med Sci. 36 (48), e328 (2021).
  25. Lu, X., et al. Real-time reverse transcription-PCR assay panel for Middle East respiratory syndrome coronavirus. J Clin Microbiol. 52 (1), 67-75 (2014).
  26. Broughton, J. P., et al. CRISPR-Cas12-based detection of SARS-CoV-2. Nat Biotechnol. 38 (7), 870-874 (2020).
  27. Ali, Z., et al. iSCAN: An RT-LAMP-coupled CRISPR-Cas12 module for rapid, sensitive detection of SARS-CoV-2. Virus Res. 288, 198129 (2020).
  28. Ali, Z., et al. Bio-SCAN: A CRISPR/dCas9-based lateral flow assay for rapid, specific, and sensitive detection of SARS-CoV-2. ACS Synth Biol. 11 (1), 406-419 (2022).
  29. Yoshimi, K., et al. CRISPR-Cas3-based diagnostics for SARS-CoV-2 and Influenza virus. iScience. 25 (2), 103830 (2022).
  30. Chen, Z., et al. Rapid and sensitive detection of anti-SARS-CoV-2 IgG, using Lanthanide-doped nanoparticles-based lateral flow immunoassay. Anal Chem. 92 (10), 7226-7231 (2020).
  31. Kasetsirikul, S., et al. Detection of the SARS-CoV-2 humanized antibody with paper-based ELISA. Analyst. 145 (23), 7680-7686 (2020).
  32. Joung, J., et al. Detection of SARS-CoV-2 with SHERLOCK One-Pot testing. N Engl J Med. 383 (15), 1492-1494 (2020).
  33. Chen, Z., Wu, Q., Chen, J., Ni, X., Dai, J. A DNA aptamer based method for detection of SARS-CoV-2 nucleocapsid protein. Virol Sin. 35 (3), 351-354 (2020).
  34. Jang, W. S., et al. Development of a multiplex Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) assay for on-site diagnosis of SARS CoV-2. PLoS One. 16 (3), e0248042 (2021).
  35. McBride, R., Fielding, B. C. The role of Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS)-Coronavirus accessory proteins in virus pathogenesis. Viruses-Basel. 4 (11), 2902-2923 (2012).
  36. AlBalwi, M. A., et al. Evolving sequence mutations in the Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus (MERS-CoV). J Infection Public Health. 13 (10), 1544-1550 (2020).
  37. Takahashi, M., et al. Quick and easy assembly of a One-Step qRT-PCR Kit for COVID-19 diagnostics using In-House enzymes. ACS Omega. 6 (11), 7374-7386 (2021).
  38. Sambrook, J., Fritsch, E. R., Maniatis, T. . Molecular cloning: A laboratory manual (2nd ed.). , (1989).
  39. Simpson, R. J. SDS-PAGE of Proteins. CSH Protoc. 2006 (1), (2006).
  40. Simpson, R. J. Staining proteins in gels with Coomassie blue. CSH Protoc. 2007, (2007).
  41. Takumi Yano, J. M. L., et al. Expression of the thermostable Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase by silkworm-baculovirus expression system. J Asia-Pac Entomol. 22 (2), 453-457 (2019).
  42. van Kasteren, P. B., et al. Comparison of seven commercial RT-PCR diagnostic kits for COVID-19. J Clin Virol. 128, 104412 (2020).
  43. Shu, B., et al. Multiplex Real-Time reverse transcription PCR for Influenza A virus, Influenza B virus, and Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2. Emerg Infect Dis. 27 (7), 1821-1830 (2021).
  44. Engelke, D. R., Krikos, A., Bruck, M. E., Ginsburg, D. Purification of Thermus aquaticus DNA polymerase expressed in Escherichia coli. Anal Biochem. 191 (2), 396-400 (1990).
  45. Pabbaraju, K., Wong, A. A., Ma, R., Zelyas, N., Tipples, G. A. Development and validation of a multiplex reverse transcriptase-PCR assay for simultaneous testing of Influenza A, Influenza B and SARS-CoV-2. J Virol Methods. 293, 114151 (2020).
  46. Hirotsu, Y., et al. Analysis of COVID-19 and non-COVID-19 viruses, including Influenza viruses, to determine the influence of intensive preventive measures in Japan. J Clin Virol. 132, 104634 (2020).
  47. Sellner, L. N., Coelen, R. J., Mackenzie, J. S. Reverse-Transcriptase inhibits Taq Polymerase-Activity. Nucleic Acids Res. 20 (7), 1487-1490 (1992).

Tags

SARS-CoV-2Influenza AInfluenza BMERS-CoVMultiplex Real-time RT-qPCRRespiratory VirusesIn-house Developed R3T One-step RT-qPCR KitDiagnostic AssaySimultaneous DetectionSensitivitySpecificity
check_url/pt/65822?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citar este artigo
Althobaiti, A., Hamdan, K., Sobhy, M. A., Rawas, R., Takahashi, M., Artyukh, O., Tehseen, M. Development of Multiplex Real-Time RT-qPCR Assays for the Detection of SARS-CoV-2, Influenza A/B, and MERS-CoV. J. Vis. Exp. (201), e65822, doi:10.3791/65822 (2023).
Baixar citação
Reimpressões e Permissões

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image