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Artigo de método

Modelo de Oclusão Transitória da Artéria Cerebral Média do Acidente Vascular Encefálico

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DOI:

10.3791/65857

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11 de agosto de 2023

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Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve o modelo de isquemia cerebral focal transitória em camundongos através da oclusão intraluminal da artéria cerebral média. Além disso, exemplos de avaliação de resultados são mostrados usando ressonância magnética e testes comportamentais.

Resumo

O AVC é uma das principais causas de morte ou incapacidade crônica em todo o mundo. No entanto, os tratamentos ideais existentes são limitados às terapias de reperfusão durante a fase aguda do acidente vascular cerebral isquêmico. Para obter informações sobre a fisiopatologia do AVC e desenvolver abordagens terapêuticas inovadoras, modelos in vivo de roedores de AVC desempenham um papel fundamental. A disponibilidade de animais geneticamente modificados tem impulsionado particularmente o uso de camundongos como modelos experimentais de AVC.

Em pacientes com acidente vascular encefálico, a oclusão da artéria cerebral média (ACM) é uma ocorrência comum. Consequentemente, o modelo experimental mais prevalente envolve a oclusão intraluminal da ACM, uma técnica minimamente invasiva que não requer craniectomia. Esse procedimento consiste em inserir um monofilamento através da artéria carótida externa (ECA) e avançá-lo através da artéria carótida interna (ACI) até atingir o ponto de ramificação da ACM. Após 45 min de oclusão arterial, o monofilamento é removido para permitir a reperfusão. Durante todo o processo, o fluxo sanguíneo cerebral é monitorado para confirmar a redução durante a oclusão e posterior recuperação após a reperfusão. Os resultados neurológicos e teciduais são avaliados por meio de testes comportamentais e estudos de ressonância magnética (RM).

Introdução

O AVC é uma doença devastadora que afeta aproximadamente 15 milhões de pessoas em todo o mundo anualmente, de acordo com a OMS. Cerca de um terço dos pacientes sucumbe à condição, enquanto outro terço experimenta incapacidade permanente. O acidente vascular encefálico (AVE) é uma patologia complexa que envolve vários tipos celulares, como células imunes neurais e periféricas, vasculatura e respostassistêmicas1. A intrincada rede de reações desencadeadas pelo AVC em nível de sistemas não pode ser replicada atualmente usando modelos in vitro . Assim, modelos animais experimentais são essenciais para aprofundar os mecanismos da doença e d....

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Protocolo

O trabalho com animais foi realizado seguindo as leis catalãs e espanholas (Real Decreto 53/2013) e as diretivas europeias, com aprovação do comitê de ética (Comité Ètic d'Experimentació Animal, CEEA) da Universidade de Barcelona, e dos órgãos reguladores locais da Generalitat de Catalunya. Os estudos são reportados em conformidade com as diretrizes ARRIVE. Este procedimento foi projetado para ser realizado em camundongos adultos, a partir de 8 semanas de idade, sem limite de idade. Exemplos do procedimento cirúrgico desenvolvido em camundongos C57BL/6 de 10-12 semanas de idade são fornecidos aqui. Diferenças anatômicas dependendo da cepa do camundongo devem ser consi....

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Resultados

Existem diferentes abordagens para avaliar o resultado do procedimento de tMCAo. Métodos de neuroimagem (RM) in vivo e testes comportamentais são utilizados aqui.

Camundongos desenvolvem lesões isquêmicas no cérebro, afetando principalmente o território suprido pela ACM ipsilateral à oclusão, como o estriado e o córtex dorsolateral. Existem vários métodos para determinar a extensão da lesão, incluindo a coloração tecidual com cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC), coloração histol.......

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Discussão

O procedimento de tMCAo intraluminal é o modelo mais comumente utilizado de isquemia cerebral focal com reperfusão em pesquisa básica. Atualmente, camundongos são o modelo animal preferido devido à disponibilidade de linhagens geneticamente modificadas. No entanto, é essencial reconhecer que camundongos geneticamente modificados e suas origens genéticas podem afetar a vascularização cerebral. A presença de circulação colateral e anastomoses entre diferentes territórios arteriais pode influenciar significativamente os res.......

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Divulgações

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

Agradecimentos

Estudo apoiado pela subvenção PID2020-113202RB-I00 financiado pelo Ministerio de Ciencia e Innovación (MCIN)/Agencia Estatal de Investigación (AEI), Gobierno de España/10.13039/501100011033 e "Fundo Europeu de Desenvolvimento Regional (FEDER). Uma forma de fazer a Europa". NCC e MAR tiveram bolsas de pré-doutorado (PRE2021-099481 e PRE2018-085737, respectivamente) financiadas pelo MCIN/AEI/ 10.13039/501100011033 e pelo "Fundo Social Europeu (FSE) Investir no seu futuro". Agradecemos a Francisca Ruiz-Jaén e Leonardo Márquez-Kisinousky pelo apoio técnico. Agradecemos o apoio do serviço de imagem por RM do Institut d'Investigacions Biomèdiques ....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Sutura 6/0AragoLigaduras vasculares
6/0 sutura com agulha curvaAragoPontos de pele
9 mg/mL Solução salinaFresenius KabiCN616003 ECPara hidratação
Sistema de anestesiaAfastadores SurgiVet
Blunt, 1 mm de larguraFerramentas de Fine Science18200-09
BuprenorfinaBuprexPara alívio da dor
braçadeira aplicação fórcepsFine Science ToolsS & T CAF4
Dumont mini fórcepsFine Science ToolsM3S 11200-10
FórcepsFine Science Tools91106-12
ColaLoctitePara colar a sonda LDF no crânio
Medidor de força de preensãoIITC Life Science Inc.#2200
IsofluranoB-BraunCN571105.8
LDF Perimed PerimedSistema Periflux 5000
Suportes de Sonda LDFPerimedPH 07-4
Fita
Ímã de ressonância magnéticaBruker BioSpin, Ettlingen, AlemanhaBioSpec 70/30 scanner horizontal para animais 
Porta-agulha com cortador de suturaFine Science Tools12002-14
Filamento de nylonDoccol701912PK5Re
Gaiola de recuperação com almofada
Tesoura SirgicalFine Science Tools91401-12
Kit de cauterizador de vaso pequenoFerramentas Fine Science18000-00
Estereomicroscópio e luz friaLeicaM60
Pinça de amarração de suturaFine Science Tools18025-10
Termostato, sonda retal e mouse padLetica Science InstrumentsLE 13206
Tesouras de mola Vannas (aresta de corte de 4 mm)Fine Science Tools15019-10
Grampos vascularesFine Science Tools00396-01
médicamagnéticade aquecimento

Referências

  1. Siddiqi, A. Z., Wadhwa, A. Treatment of acute stroke: current practices and future horizons. Cardiovascular Revascularization Medicine. 49, 56-65 (2023).
  2. Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M.

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Reimpressões e permissões

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