Laserfangstmikrodissektion af oral submucøs fibrosevæv muliggør præcis ekstraktion af celler fra histologiske områder af interesse for analyse af multi-omics-data med morfologisk og rumlig information.
Oral submucøs fibrose (OSF) er en almindelig type potentielt ondartet lidelse i mundhulen. Atrofi af epitel og fibrose af lamina propria og submucosa findes ofte på histopatologiske dias. Epiteldysplasi, epitelatrofi og senescerende fibroblaster er blevet foreslået at være forbundet med den ondartede transformation af OSF. På grund af heterogeniteten af potentielt maligne orale lidelser og oralt pladecellekarcinom er det imidlertid vanskeligt at identificere de specifikke molekylære mekanismer for malign transformation i OSF. Her præsenterer vi en metode til at opnå et lille antal epitel- eller mesenkymale celler, der bærer morfologiske data og rumlig information ved laserfangstmikrodissektion på formalinfikserede paraffinindlejrede vævsdias. Ved hjælp af et mikroskop kan vi præcist fange mikroskala (~ 500 celler) dysplastisk eller atrofisk epitelvæv og fibrotisk subepitelvæv. De ekstraherede celler kan evalueres ved genom- eller transkriptomsekventering for at erhverve genomiske og transkriptomiske data med morfologisk og rumlig information. Denne tilgang fjerner heterogeniteten af bulk OSF-vævsekventering og interferensen forårsaget af celler i ikke-læsionerede områder, hvilket muliggør præcis rumlig omics-analyse af OSF-væv.
Oral submucøs fibrose (OSF) er en kronisk, lumsk sygdom, der hovedsageligt udvikler sig i bukkalslimhinden og resulterer i begrænset mundåbning1. Mens OSF er en multifaktoriel sygdom, er arecanødder eller betelnødder den vigtigste årsag til OSF 2,3. På grund af denne geografisk specifikke vane er OSF overvejende koncentreret i befolkninger i Sydøst- og Sydasien3. De almindelige histologiske træk ved OSF inkluderer unormal kollagenaflejring i bindevævet under mundslimhindepitelet, vaskulær stenose og okklusion1. OSF-epitelvæv kan forekomme med manifestationer af atrofi eller hyperplasi og endda dysplasi, når det er samtidig med oral leukoplaki 4,5.
OSF er defineret af Verdenssundhedsorganisationen som en almindelig oral potentielt malign lidelse (OPMD), der udviser potentialet til at udvikle sig til oralt pladecellekarcinom med en ondartet transformationshastighed på 4% -6% 6,7,8,9. Mekanismen bag den ondartede transformation af OSF er kompleks10. Unormal vækst af epitelet, herunder både dysplasi og atrofi, øger potentialet for carcinogenese, og senescerende fibroblaster i stroma kan være involveret i den ondartede progression af OSF ved at inducere epitel-mesenkymal overgang (EMT) gennem reaktive iltarter (ROS) og andre molekyler10.
Teknologier til rumlige-omiske analyser genererede multi-omiske data med morfologisk og rumlig information, der har givet indsigt i kræftmekanismer11,12,13. Her præsenterer vi en protokol til at fange morfologirelaterede cellepopulationer fra formalinfikseret paraffinindlejret OSF-væv ved lasermikrodissektion. Multi-omiske analyser af disse prøver kan overvinde udfordringer med intratissue heterogenitet og øge forståelsen af molekylær patologi og mekanismer for ondartet transformation i OSF14.
Denne protokol rapporterede en pipeline til at fange OSF-vævsprøver med morfologisk og rumlig information til yderligere rumlige analyser gennem lasermikrodissektion. Fra de repræsentative resultater identificerede vi forskellige CNA-mønstre blandt forskellige morfologirelaterede prøver.
OSF, en type OPMD, er en almindelig precancerøs tilstand af oral pladecellekarcinom6. Genomisk ustabilitet er rapporteret at være forbundet med udvikling og ondartet transformati…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af forskningsbevillinger fra National Nature Science Foundation of China (81671006, 81300894), CAMS Innovation Fund for Medical Sciences (2019-I2M-5-038), National clinical key discipline construction project (PKUSSNKP-202102), Innovation Fund for Outstanding Doctoral Candidates of Peking University Health Science Center (BMU2022BSS001).
Adhesion microscope slides | CITOTEST | REF.188105 | |
Div-haematoxylin | YiLi | 20230326 | |
Eosin solution | BASO | BA4098 | |
Ethanol | PEKING REAGENT | No.32061 | |
Harris hematoxylin dye solution | YiLi | 20230326 | |
Hot plate | LEICA | HI1220 | |
Laser capture microdissection system | LEICA | LMD7 | Machine |
Laser microdissection microsystem | LEICA | 8.2.3.7603 | Software |
Micromount mounting medium | LEICA | REF.3801731 | |
Microscope cover glass | CITOTEST | REF.10212450C | |
Microtome | LEICA | RM2235 | |
PCR tubes | AXYGEN | 16421959 | |
PEN-membrane slides | LEICA | No.11505158 | |
Re-blue solution | YiLi | 20230326 | |
Ultrapure distilled water | Invitrogen | REF.10977-015 | |
Xylene | PEKING REAGENT | No.33535 |