Subclavian vene blodprøvetagning i bevidste rotter
Summary
Her præsenterer vi en kombination af effektive rotterestriktioner og subklaviske venepunkturmetoder, der muliggør hurtig, sikker og gentagen blodindsamling hos rotter uden bedøvelse.
Abstract
Der er flere etablerede metoder til opnåelse af gentagne blodprøver fra rotter, hvor de mest almindeligt anvendte metoder er lateral haleveneprøveudtagning uden anæstesi og jugular veneprøveudtagning med anæstesi. Imidlertid kræver de fleste af disse metoder hjælp og bedøvelsesudstyr og udgør undertiden vanskeligheder med hensyn til blodindsamling eller den dårlige kvalitet af blodprøver. Desuden forbruger disse metoder til blodindsamling betydelig tid og menneskelige ressourcer, når gentagen blodprøvetagning er nødvendig for et stort antal rotter. Denne undersøgelse præsenterer en teknik til gentagen blodprøvetagning hos ikke-bedøvede rotter af et enkelt dygtigt individ. Meget tilfredsstillende blodprøver kan opnås ved at punktere den subklaviske vene. Metoden viste en imponerende samlet succesrate på 95%, med en mediantid på kun 2 minutter fra rottefastholdelse til afslutning af blodindsamling. Desuden påfører udførelse af på hinanden følgende blodsamlinger inden for det udpegede område ikke rotterne nogen skade. Denne metode er værd at fremme til blodindsamling, især i store farmakokinetiske undersøgelser.
Introduction
Rotter er et af de mest almindelige forsøgsdyr, og der er mange måder at få blodprøver på. Til forsøg, der involverer en enkelt blodindsamling i slutfasen, kan der opnås en tilstrækkelig mængde blod gennem hjertepunktur eller abdominal aorta blodindsamling1. Nogle undersøgelser kræver imidlertid gentagen blodindsamling fra rotter til rutinemæssig blod- eller biokemisk analyse, især i farmakokinetiske og toksikologiske undersøgelser, hvor gentagen blodindsamling er nødvendig for at bestemme absorption, distribution og metabolisme af lægemidler2.
I øjeblikket, selvom haleveneblodindsamling er den mest almindelige metode til blodprøvetagning fra rotter, på trods af at den ikke kræver anæstesi, kan denne metode være udfordrende for gentagne samlinger, og mængden af indsamlet blod er relativt lille 3,4. Derudover, selvom blod kan indsamles fra saphenøse og penisårer, er mængden af opnået blod begrænset, og anæstesi kræves 1,5. Desuden giver blodprøver indsamlet fra submandibulær venøs plexus såvel som sublinguelle, jugulære og subklaviske vener prøver af højere kvalitet, men kræver typisk anæstesi eller hjælp fra flere individer 1,6,7,8,9. Endelig kræver retro-orbital sinus / kanalblodindsamling ikke kun anæstesi, men kan også potentielt forårsage skade og stress på rotterne9.
Kvaliteten af blodprøver, der typisk opnås fra større vener, er generelt af højeste standard1. På nuværende tidspunkt har nogle undersøgelser vist, at kontinuerlig mikroprøveudtagning gennem halsvenen er en meget velegnet metode til toksikologisk forskning hos rotter, selvom denne metode normalt kræver jugular venekateterisering 10,11,12. Derfor er det værd at undersøge, hvordan man opnår blodprøver af høj kvalitet i overensstemmelse med 3R-princippet om dyreforsøg uden kirurgisk indgreb. Formålet med denne undersøgelse var at præsentere en metode til effektivt at ekstrahere blod fra den subklaviske vene hos rotter. Denne teknik muliggør hurtig indsamling af tilfredsstillende prøver gennem en enkeltpersons procedure uden behov for anæstesi.
Protocol
Representative Results
Discussion
Selvom haleveneblodindsamling er den mest almindelige metode til gentagen blodprøvetagning hos rotter, kan den påvirkes af anæstesilægemidler, og på grund af halevenens lille størrelse er mængden af blod, der kan indsamles i et enkelt tilfælde, begrænset, hvilket fører til en længere blodindsamlingsvarighed 4,5. Selvom højtydende væskekromatografi (HPLC) -tandem massespektrometri (MS / MS) systemer kombineret med kapillær mikroprøveudtagning (CMS) …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Denne undersøgelse blev støttet af Cuiying Plan Project fra Lanzhou University Second Hospital (bevilling nr. PR0121015) og Gansu Provincial Key Laboratory of Urinary System Disease Research (bevilling nr. 0412D2).
Materials
| 0.75% normal saline | Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd. | —— | Prepared heparin sodium solution |
| 1 mL Pasteur pipette | Biosharp | BS-XG-01-NS | Blood collection |
| 1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm) | Shinva Medical Instrument Co.,Ltd. | 0.45*12RWLB | Blood collection |
| 1.5 mL Eppendorf tube | Biosharp | BS-15-M | Blood storage and collection |
| 75% medical alcohol | Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd. | —— | Disinfection of rat blood collection site |
| Centrifuge tube holder | Biosharp | BS-05/15-SM60 | —— |
| Electronic scale | Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd. | JE1002 | Weigh |
| Heparin sodium injection | Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd. | —— | Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL |
| Low temperature centrifuge | HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument Co., Ltd. | H1750R | Separation of serum |
Referências
- . Blood collection: The rat IACUC Guideline Available from: https://iacuc.ucsf.edu/sites/g/files/tkssra751/f/wysiwyg/GUIDELINE%20-%20Blood%20Collection%20-%20Rat.pdf (2022)
- Hattori, N., Takumi, A., Saito, K., Saito, Y. Effects of serial cervical or tail blood sampling on toxicity and toxicokinetic evaluation in rats. The Journal of Toxicological Sciences. 45 (10), 599-609 (2020).
- Liu, X., et al. Modified blood collection from tail veins of non-anesthetized mice with a vacuum blood collection system and eyeglass magnifier. Journal of Visualized Experiments. (144), e65513 (2019).
- Zou, W., et al. Repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system. Journal of Visualized Experiments. (130), e55852 (2017).
- Charlès, L., et al. Modified tail vein and penile vein puncture for blood sampling in the rat model. Journal of Visualized Experiments. (196), e65513 (2023).
- Wang, L., et al. Repetitive blood sampling from the subclavian vein of conscious rat. Journal of Visualized Experiments. (180), e63439 (2022).
- Yang, H., et al. Subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats. Journal of Visualized Experiments. (141), e58499 (2018).
- Tochitani, T., et al. Effects of microsampling on toxicity assessment of hematotoxic compounds in a general toxicity study in rats. The Journal of Toxicological Sciences. 47 (7), 269-276 (2022).
- Harikrishnan, V. S., Hansen, A. K., Abelson, K. S., Sørensen, D. B. A comparison of various methods of blood sampling in mice and rats: Effects on animal welfare. Laboratory Animals. 52 (3), 253-264 (2018).
- Yokoyama, H., et al. Lack of toxicological influences by microsampling (50 µL) from jugular vein of rats in a collaborative 28-day study. The Journal of Toxicological Sciences. 45 (6), 319-325 (2020).
- Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
- Lu, W., et al. Microsurgical skills of establishing permanent jugular vein cannulation in rats for serial blood sampling of orally administered drug. Journal of Visualized Experiments. (178), e63167 (2021).
- National Research Council of the National Academies, Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. . Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , (2011).
- Perciedu Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. The Journal of Physiology. 598 (18), 3793-3801 (2020).
- Charan, J., Kantharia, N. D. How to calculate sample size in animal studies. Journal of Pharmacology & Pharmacotherapeutics. 4 (4), 303-306 (2013).
- Turner, P. V., Pang, D. S., Lofgren, J. L. A review of pain assessment methods in laboratory rodents. Comparative Medicine. 69 (6), 451-467 (2019).
- Kurata, M., Misawa, K., Noguchi, N., Kasuga, Y., Matsumoto, K. Effect of blood collection imitating toxicokinetic study on rat hematological parameters. The Journal of Toxicological Sciences. 22 (3), 231-238 (1997).
- Zeller, W., Weber, H., Panoussis, B., Bürge, T., Bergmann, R. Refinement of blood sampling from the sublingual vein of rats. Laboratory Animals. 32 (4), 369-376 (1998).
