Gavagestrategi for afkogningsformel af traditionel kinesisk medicin i osteosarkommodelmus
Summary
Protokollen giver en detaljeret standardiseringsproces af afkogningsformel og sondeteknik med Yiqi Jiedu-afkogning i osteosarkommusemodellen som et eksempel. Det beskriver dyrebeskyttelse og forbedrer pålideligheden af forskningsdata og giver effektive strategier til undersøgelse af terapeutisk effekt og molekylære mekanismer for afkogningsformler in vivo.
Abstract
Afkogningsformel er den mest almindeligt anvendte doseringsform i traditionel kinesisk medicin og anvendt i klinisk praksis i tusinder af år ved transoral administration, som er kendetegnet ved hurtig effekt, let absorption og individualiseret behandling baseret på patienternes specifikke syndromer. Kvaliteten af afkogningsformlen er direkte ansvarlig for den kliniske effekt af traditionel kinesisk medicin; Derfor er standardiseringsprocessen for afkogningsformlen vigtig for at undgå forskelle i afkogningskvalitet forårsaget af subjektive faktorer. På grund af begrænsningerne ved at udføre kliniske forsøg anvendes små dyr, der bærer menneskelige sygdomme, såsom mus, ofte i medicinsk forskning for at undersøge den terapeutiske virkning og omfattende mekanismer for forskellige interventioner, herunder afkogningsformlen for traditionel kinesisk medicin. Som en vigtig transoral administrationsmetode er den dygtige sondeteknik derfor særlig vigtig for at undgå potentiel spiserørsskade og lægemiddelspild, hvilket vil sikre, at der administreres en lige stor mængde medicin til hvert modeldyr, hvilket fører til nøjagtige eksperimentelle resultater. Desuden er den standardiserede metode til fremstilling af afkogningsformel og dygtig sondestrategi nødvendig for at beskytte dyrevelfærden og minimere antallet af anvendte dyr. Her rapporterede vi en detaljeret standardiseringsproces af afkogningsformlen og sondeteknikken med Yiqi Jiedu-afkogning i osteosarkommusemodel som et eksempel. Effekten blev evalueret af tumorvolumen. Denne protokol vil maksimere dyrebeskyttelse og forbedre pålideligheden af forskningsdata og derfor give effektive strategier til fremtidig undersøgelse af terapeutisk effekt og molekylære mekanismer for afkogningsformel for traditionel kinesisk medicin in vivo.
Introduction
Afkogningsformel er den mest almindeligt anvendte doseringsform af den traditionelle kinesiske medicin og de flydende lægemidler 1,2. Afkogningsformlen for traditionel kinesisk medicin behandles ved at decocere urterne i vand efter at være gennemblødt, efterfulgt af filtrering for at kassere dregs.
Fordi afkogningsformlen kan individualiseres baseret på kliniske fornødenheder, især i overensstemmelse med egenskaberne ved evidensbaseret behandling i traditionel kinesisk medicin, er denne doseringsform via transoral administration blevet anvendt i klinisk praksis i tusinder af år med specifikke og uerstattelige fordele 3,4. Kvaliteten af afkogningsformlen er direkte relateret til den kliniske effekt. Derfor skal afkogningsformlen fremstilles ud fra principperne for de standardiserede afkogningsmetoder for at sikre, at de aktive ingredienser maksimalt ekstraheres og beskyttes3. I mellemtiden er afkogningsklare lægemidler den vigtigste form for rå kinesiske urter, der anvendes i klinisk praksis; kvalitetsstandarderne og produktionsmetoderne for ordinerede afkogningsklare lægemidler skal overholde bestemmelserne i den kinesiske farmakopé2. Desuden skal de foreskrevne afkogningsklare lægemidler gennemblødes i koldt drikkevand i mindst 30 minutter, før de dekokeres i en særlig farmaceutisk gryde ved opvarmning5. Undersøgelser har vist, at de fleste af de aktive ingredienser kan ekstraheres ved decocting i to gange, og adfærdskodeksen for administration af afkogningsrum for traditionelle kinesiske lægemidler i medicinske institutioner foreskriver også, at afkogning skal udføres to gange 4,6,7. Hvis der ordineres specielle kinesiske urter, såsom en med hård tekstur eller tonics, anbefales afkogningstiden at forlænges. Afkogningsredskaberne og opbevaringsbeholderne, der direkte kommer i kontakt med afkogningsformlen, startende fra beholderen, hvor de foreskrevne afkogningsklare lægemidler gennemblødes, skal være kemisk stabile og have låg, såsom gryderetter, keramik, glas og rustfrit stål. Imidlertid bør aluminium og almindelige plastprodukter ikke anvendes, mens jern og andre ætsende redskaber bør forbydes for at undgå mulige kemiske reaktioner, hvilket vil reducere terapeutisk virkning og endda producere skadelige virkninger 4,6,7.
På grund af begrænsningerne ved at udføre kliniske eksperimenter bruges små dyr, der bærer de menneskelige sygdomme, såsom mus, ofte i medicinsk forskning til at undersøge den terapeutiske virkning og omfattende mekanismer ved forskellige interventioner, herunder afkogningsformlen for traditionel kinesisk medicin 8,9; I modsætning til mennesker bør afkogningsformlerne imidlertid fremstilles hver dag, blandes sammen og administreres frisk 2x om dagen i klinisk praksis. Dyr er ikke i stand til frivilligt at tage deres medicin til tiden med den krævede dosis, og de fleste dyreforsøg relateret til traditionel kinesisk medicin er sondebaseret oral administration af afkogningsformlerne på nuværende tidspunkt. De afkogningsformler, der anvendes til in vivo-dyreforsøg, bør forberedes på forhånd, annulleres, opbevares ved -20 °C og optøes umiddelbart før anvendelse 3,4,10. Desuden øger substandard dyreimmobilisering og sondenålmanipulation risikoen for unødvendige skader og negative følelser. Derfor er den dygtige sondeteknik som en vigtig metode til transoral lægemiddelafgivelse særlig vigtig for at undgå mulig spiserørsskade og lægemiddelspild og dermed sikre, at hvert modeldyr får en lige stor mængde ordineret urtemedicin for at opnå nøjagtige eksperimentelle resultater. Her leverer vi en gavageprotokol til afkogningsformlen for traditionel kinesisk medicin.
Protocol
Representative Results
Discussion
Den kliniske effekt af de foreskrevne urter i traditionel kinesisk medicin er i vid udstrækning forbundet med den administrerede dosis og doseringsform; Derfor er etableringen af en standardiseret afkogningsstrategi og en dygtig administrationsproces nødvendig i klinisk praksis samt forbedring af pålideligheden af eksperimentelle resultater.
I denne undersøgelse gav vi først en detaljeret strategi for standardiseret afkogning af kinesiske urter, der anvendes i klinisk praksis med traditio…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Det nuværende arbejde støttes af tilskud fra (1) National Nature Science Foundation (81973877 og 82174408), (2) National Key R&D Program of China (2020YFE0201600), (3) Shanghai Top Priority Research Center byggeprojekt (2022ZZ01009), (4) Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation og (5) Forskningsprojekter inden for budgettet for Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (2021LK047).
Materials
| 143B cell line | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoma cell line |
| Anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | The Equipment of Anesthesia mice |
| Automatic cell counter | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Counting cells |
| BALB/c athymic mice | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Male | Animal |
| Barbed skullcap herb | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Decoction-ready medicines |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Component of gastric perfusion device |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Decoction filter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Decoction-ready medicines |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Decoction-ready medicines |
| isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesia mice |
| Micro-volume syringe | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Inject precise cells into the tibia |
| Phosphate-buffered saline | Beyotime Biotechnology | ST447 | wash the human osteosarcoma cells |
| Rubber bands | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Fixing gauze on the measuring cup |
| Syringe (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Component of gastric perfusion device |
| Trypsin (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsin treatment of cells |
Referências
- Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12 (2005).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. . Pharmacopoeia of the People’s Republic of China. , (2015).
- An, Y., et al. Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction. Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).
- Chen, S., et al. Research strategies in standard decoction of medicinal slices. China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).
- Luo, F. Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components. Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).
- Liu, F., Chen, M. On the standardization of decocting methods of modern decoction. Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).
- Li, X., et al. Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction. J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).
- Li, X., et al. Herbal decoctosome is a novel form of medicine. Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).
- Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. Reflections on PK – PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine. Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).
- Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica. Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).
- . Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers Available from: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers (2005)
- Chang, J., et al. Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models. J Vis Exp. (176), 63072 (2021).
- He, C. Laboratory animal science. , (2006).
- Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors. Fronti Pedia. 2, 93 (2014).
- Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized. J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).
- Recena Aydos, L., et al. Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models. Nutrients. 11 (12), 3067 (2019).
