Sondstrategi för avkoksformel för traditionell kinesisk medicin i osteosarkommodellmöss
Summary
Protokollet ger en detaljerad standardiseringsprocess av avkoksformel och sondmatningsteknik med Yiqi Jiedu-avkok i osteosarkommusmodellen som exempel. Den beskriver djurskydd och förbättrar tillförlitligheten hos forskningsdata, vilket ger effektiva strategier för att undersöka terapeutisk effekt och molekylära mekanismer för avkoksformler in vivo.
Abstract
Avkoksformeln är den mest använda doseringsformen i traditionell kinesisk medicin och har tillämpats i klinisk praxis i tusentals år genom transoral administrering, som kännetecknas av snabb effekt, enkel absorption och individualiserad behandling baserad på patienternas specifika syndrom. Kvaliteten på avkoksformeln är direkt ansvarig för den kliniska effekten av traditionell kinesisk medicin; Därför är det viktigt att standardisera avkoksformeln för att undvika skillnader i avkokets kvalitet som orsakas av subjektiva faktorer. Samtidigt, på grund av begränsningarna med att utföra kliniska experiment, används små djur som bär på mänskliga sjukdomar, såsom möss, ofta i medicinsk forskning för att utforska den terapeutiska effektiviteten och de omfattande mekanismerna för olika interventioner, inklusive avkoksformeln för traditionell kinesisk medicin. Följaktligen, som en viktig transoral administreringsmetod, är den skickliga sondmatningstekniken särskilt viktig för att undvika potentiella matstrupsskador och läkemedelsspill, vilket kommer att säkerställa att en lika stor mängd läkemedel administreras till varje modelldjur, vilket leder till exakta experimentella resultat. Dessutom är den standardiserade metoden för beredning av avkoksformel och skicklig sondmatningsstrategi nödvändiga för att skydda djurens välbefinnande och minimera antalet djur som används. Här rapporterade vi en detaljerad standardiseringsprocess av avkoksformeln och sondmatningstekniken med Yiqi Jiedu-avkok i osteosarkommusmodell som exempel. Effekten utvärderades med hjälp av tumörvolymen. Detta protokoll kommer att maximera djurskyddet och förbättra tillförlitligheten hos forskningsdata, vilket ger effektiva strategier för framtida undersökning av terapeutisk effekt och molekylära mekanismer för avkoksformel för traditionell kinesisk medicin in vivo.
Introduction
Avkoksformeln är den vanligaste doseringsformen för den traditionella kinesiska medicinen och de flytande läkemedlen 1,2. Avkoksformeln i traditionell kinesisk medicin bearbetas genom att örterna avkokas i vatten efter att de blötlagts, följt av filtrering för att kasta drägget.
Eftersom avkoksformeln kan individualiseras baserat på kliniska behov, särskilt i linje med egenskaperna hos evidensbaserad behandling i traditionell kinesisk medicin, har denna doseringsform via transoral administrering tillämpats i klinisk praxis i tusentals år med specifika och oersättliga fördelar 3,4. Kvaliteten på avkoksformeln är direkt relaterad till den kliniska effekten. Därför måste avkoksformeln beredas baserat på principerna för de standardiserade avkoksmetoderna för att säkerställa att de aktiva ingredienserna extraheras och skyddas maximalt3. Samtidigt är avkoksfärdiga läkemedel den huvudsakliga formen av råa kinesiska örter som används i klinisk praxis; Kvalitetsnormerna och produktionsmetoderna för receptbelagda avkoksfärdiga läkemedel måste överensstämma med bestämmelserna i den kinesiska farmakopén2. Dessutom måste de ordinerade avkoksfärdiga läkemedlen blötläggas i kallt dricksvatten i minst 30 minuter innan de avkokas i en speciell läkemedelskanna genom upphettning5. Studier har visat att de flesta av de aktiva ingredienserna kan extraheras genom avkok två gånger, och uppförandekoden för administrering av avkoksrum för traditionell kinesisk medicin i medicinska institutioner föreskriver också avkok som ska göras två gånger 4,6,7. Om speciella kinesiska örter, t.ex. en med hård konsistens eller tonika, ordineras, rekommenderas att avkokstiden förlängs. Avkoksredskap och förvaringsbehållare som direkt kommer i kontakt med avkoksformeln, med början från behållaren i vilken de föreskrivna avkoksfärdiga läkemedlen blötläggs, ska vara kemiskt stabila och ha lock, såsom grytor, keramik, glas och rostfritt stål. Aluminium och vanliga plastprodukter bör dock inte användas, medan järn och andra frätande redskap bör förbjudas för att undvika eventuella kemiska reaktioner, vilket kommer att minska den terapeutiska effekten och till och med ge skadliga effekter 4,6,7.
På grund av begränsningarna med att utföra kliniska experiment används ofta små djur som bär på mänskliga sjukdomar, såsom möss, i medicinsk forskning för att utforska den terapeutiska effektiviteten och de omfattande mekanismerna för olika interventioner, inklusive avkoksformeln för traditionell kinesisk medicin 8,9; Men till skillnad från människor bör avkoksformlerna beredas varje dag, blandas ihop och administreras 2 gånger om dagen i klinisk praxis. Djur kan inte frivilligt ta sina mediciner i tid med den nödvändiga dosen, och de flesta djurförsök relaterade till traditionell kinesisk medicin är för närvarande sondbaserad oral administrering av avkoksformlerna. De avkoksformler som används för in vivo-djurförsök bör beredas i förväg, alikvoteras, lagras vid -20 °C och tinas upp strax före användning 3,4,10. Dessutom ökar undermålig immobilisering av djur och manipulering av sondnålar risken för onödiga skador och negativa känslor. Därför, som en viktig metod för transoral läkemedelstillförsel, är den skickliga sondmatningstekniken särskilt viktig för att undvika eventuell matstrupsskada och läkemedelsspill, vilket säkerställer att varje modelldjur får en lika stor mängd ordinerad örtmedicin för att uppnå exakta experimentella resultat. Här tillhandahåller vi ett sondmatningsprotokoll för avkoksformeln för traditionell kinesisk medicin.
Protocol
Representative Results
Discussion
Den kliniska effekten av de förskrivna örterna i traditionell kinesisk medicin är till stor del förknippad med den administrerade dosen och doseringsformen; Därför är det nödvändigt att upprätta en standardiserad avkoksstrategi och en skicklig administreringsprocess i klinisk praxis, liksom för att förbättra tillförlitligheten hos experimentella resultat.
I denna studie tillhandahöll vi först en detaljerad strategi för standardiserat avkok av kinesiska örter som används i kl…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Det nuvarande arbetet stöds av bidrag från (1) National Nature Science Foundation (81973877 och 82174408), (2) National Key R&D Program of China (2020YFE0201600), (3) Shanghai Top Priority Research Center byggprojekt (2022ZZ01009), (4) Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation och (5) forskningsprojekt inom budgeten för Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (2021LK047).
Materials
| 143B cell line | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoma cell line |
| Anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | The Equipment of Anesthesia mice |
| Automatic cell counter | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Counting cells |
| BALB/c athymic mice | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Male | Animal |
| Barbed skullcap herb | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Decoction-ready medicines |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Component of gastric perfusion device |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Decoction filter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Decoction-ready medicines |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Decoction-ready medicines |
| isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesia mice |
| Micro-volume syringe | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Inject precise cells into the tibia |
| Phosphate-buffered saline | Beyotime Biotechnology | ST447 | wash the human osteosarcoma cells |
| Rubber bands | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Fixing gauze on the measuring cup |
| Syringe (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Component of gastric perfusion device |
| Trypsin (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsin treatment of cells |
Referências
- Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12 (2005).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. . Pharmacopoeia of the People’s Republic of China. , (2015).
- An, Y., et al. Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction. Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).
- Chen, S., et al. Research strategies in standard decoction of medicinal slices. China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).
- Luo, F. Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components. Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).
- Liu, F., Chen, M. On the standardization of decocting methods of modern decoction. Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).
- Li, X., et al. Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction. J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).
- Li, X., et al. Herbal decoctosome is a novel form of medicine. Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).
- Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. Reflections on PK – PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine. Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).
- Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica. Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).
- . Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers Available from: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers (2005)
- Chang, J., et al. Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models. J Vis Exp. (176), 63072 (2021).
- He, C. Laboratory animal science. , (2006).
- Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors. Fronti Pedia. 2, 93 (2014).
- Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized. J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).
- Recena Aydos, L., et al. Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models. Nutrients. 11 (12), 3067 (2019).
