Isolamento imunomagnético das células-tronco CD34+ residentes na parede vascular de camundongos

Chuting Han; Cheng Xie; Qingya Dang; Xiaolin Zhang; Chunshu Li; Yan Yang; Jun Cheng; Pengyun Li

doi:10.3791/66193

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Artigo de método

Isolamento imunomagnético das células-tronco CD34⁺ residentes na parede vascular de camundongos

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DOI:

10.3791/66193

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22 de dezembro de 2023

Chuting Han¹ , Cheng Xie¹ , Qingya Dang¹ , Xiaolin Zhang¹ , Chunshu Li¹ , Yan Yang¹ , Jun Cheng¹ , Pengyun Li¹

¹Key Laboratory of Medical Electrophysiology of Ministry of Education and Medical Electrophysiological Key Laboratory of Sichuan Province, Institute of Cardiovascular Research, Southwest Medical University

Neste artigo

Resumo

Este estudo estabeleceu um método estável e eficiente para o isolamento, cultura e determinação funcional de células-tronco CD34⁺ residentes na parede vascular (CD34⁺ VW-SCs). Este método de isolamento fácil de seguir e eficaz em termos de tempo pode ser utilizado por outros investigadores para estudar os mecanismos potenciais envolvidos nas doenças cardiovasculares.

Resumo

As células-tronco e progenitoras residentes na parede vascular CD34⁺ residentes (VW-SCs) são cada vez mais reconhecidas por seu papel crucial na regulação da lesão e reparo vascular. Estabelecer um método estável e eficiente para cultivar VW-SCs CD34⁺ murinos funcionais é essencial para investigar ainda mais os mecanismos envolvidos na proliferação, migração e diferenciação dessas células sob várias condições fisiológicas e patológicas. O método descrito combina triagem de esferas magnéticas e citometria de fluxo para purificar VW-SCs CD34⁺ residentes em cultura primária. As células purificadas são então identificadas funcionalmente por meio de coloração por imunofluorescência e imagem de Ca²⁺ . Resumidamente, as células vasculares da adventícia da aorta murina e da artéria mesentérica são obtidas por meio da fixação de blocos teciduais, seguida de subcultura até atingir uma contagem de células de pelo menos 1 × 10⁷. Posteriormente, os VW-SCs CD34⁺ são purificados usando classificação magnética de esferas e citometria de fluxo. A identificação de VW-SCs CD34⁺ envolve a coloração por imunofluorescência celular, enquanto a multipotência funcional é determinada pela exposição das células a um meio de cultura específico para diferenciação orientada. Além disso, a liberação funcional interna de Ca²⁺ e a entrada externa de Ca²⁺ são avaliadas usando uma estação de trabalho de imagem disponível comercialmente em células carregadas com Fura-2 / AM expostas a ATP, cafeína ou tapsigargina (TG). Este método oferece uma técnica estável e eficiente para isolar, cultivar e identificar células-tronco CD34⁺ residentes na parede vascular, proporcionando uma oportunidade para estudos in vitro sobre os mecanismos regulatórios de VW-SCs e a triagem de medicamentos direcionados.

Introdução

A parede vascular desempenha um papel fundamental no desenvolvimento vascular, na regulação homeostática e na progressão de doenças vasculares. Nos últimos anos, vários estudos revelaram a presença de várias linhagens de células-tronco nas artérias. Em 2004, o grupo do professor Qingbo Xu relatou pela primeira vez a existência de células-tronco vasculares / progenitoras na periferia da parede vascular adulta, expressando CD34, Sca-1, c-kit e Flk-1¹. Essas células-tronco vasculares exibem potencial de diferenciação e proliferação multidirecional. Em condições normais, eles permanecem relativamente quiescentes; no entanto, quando ativados por fat....