Este trabalho apresenta um protocolo econômico e eficiente para o exame de leucócitos peroxidase positiva no sêmen. Com o auxílio de um sistema de análise seminal assistida por computador (CASA), a concentração de leucócitos positivos para peroxidase no sêmen pode ser obtida em um total de 60 min, melhorando efetivamente a eficiência do laboratório de andrologia e dos andrologistas.
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Artigo de método
O Exame de Leucócitos Peroxidase Positivos no Sêmen
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
A leucocitospermia pode levar à diminuição da motilidade dos espermatozoides, aumento das anormalidades morfológicas dos espermatozoides, índice de fragmentação do DNA dos espermatozoides elevados, comprometimento da função acrossômica dos espermatozoides e até mesmo desenvolvimento embrionário afetado. É uma doença andrológica comum na prática clínica e uma das importantes causas de infertilidade masculina. Ao determinar se a inflamação do trato reprodutivo masculino existe, os andrologistas geralmente optam por examinar as células redondas ou a elastase plasmática seminal no sêmen como base de diagnóstico clínico. No entanto, o exame de células redondas é facilmente influenciado por células espermatogênicas descamadas e células epiteliais do trato reprodutivo, que não contribuem para reduzir o uso indiscriminado e desnecessário de antibióticos. Ao mesmo tempo, o processo de detecção da elastase é relativamente complicado, demorado e lento na comunicação de resultados, o que não é benéfico para o diagnóstico precoce e tratamento de doenças como infecções do trato genital masculino (ITMG). Aplicamos de forma inovadora o exame de leucócitos peroxidase positiva em sêmen assistido por um sistema de análise seminal assistida por computador (CASA) como critério diagnóstico para leucocitospermia, resolvendo com sucesso esses problemas. Este exame requer apenas a adição do fluido operacional composto por quatro reagentes na amostra, e o tempo total de reação à temperatura ambiente pode ser controlado dentro de 20-30 min. Com o esfregaço subsequente e o exame microscópico, a concentração de leucócitos positivos para peroxidase no sêmen pode ser obtida dentro de um total de 60 min, que pode ser usado para diagnosticar se a inflamação do trato reprodutor masculino existiu.
Introdução
A infertilidade emergiu como um problema de saúde pública global que afeta aproximadamente 15% dos casais em idade reprodutiva. Os fatores masculinos são responsáveis por cerca de 50% do total de casos de subfertilidade, e cerca de 20% a 30% podem ser atribuídos exclusivamente aos fatores masculinos 1,2,3. As infecções do trato genital masculino (ITMG) constituem uma das causas significativas de infertilidade masculina, sendo responsáveis por cerca de 15% dos casos 4,5.
A maioria dos indiví....
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Protocolo
Este estudo foi revisado e aprovado pelo Comitê de Ética Médica do Terceiro Hospital Afiliado da Universidade Sun Yat-sen.
1. Preparação da solução de trabalho
- Reunir os seguintes reagentes essenciais para a preparação da solução de trabalho - solução de substrato de orto-toluidina, solução saturada de cloreto de amónio (NH4Cl), solução de sal dissódico de ácido etilenodiaminotetracético a 148 mmol/L (EDTANa 2) e solução de peróxido de hidrogénio a 6% (v/v). Coloque-os em uma bancada de laboratório à temperatura ambiente (RT) juntamente com as ferramentas necessárias, como pipetas de transfer....
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Resultados
Ao implementar o procedimento supracitado, o reagente no tubo da centrífuga frequentemente manifesta aspecto subtranslúcido e opalescente (Figura 1). A detecção de uma cor obviamente marrom revela potencial degranulação de leucócitos, o que pode resultar em coloração líquida. Consequentemente, o processo de coloração pode falhar, tornando necessário recolorir ou coletar uma nova amostra de sêmen para novo teste21.
Os leucócitos peroxidase p.......
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Discussão
A orto-toluidina e o peróxido de hidrogênio têm propriedades fotossensíveis e podem se decompor quando expostos à luz. Para garantir a eficácia dos reagentes de teste, recomenda-se que o fluido de trabalho preparado seja armazenado em um local escuro.
As amostras de sêmen naturalmente exibem características heterogêneas. No processo de preparação de amostras de sêmen, julgar corretamente o estado de liquefação do sêmen e homogeneizar completamente as amostras de sêmen antes de cada amostragem.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Os autores são gratos ao Laboratório de Andrologia do Centro de Medicina Reprodutiva, o Terceiro Hospital Afiliado da Universidade Sun Yat-sen, por fornecer as instalações para este estudo. Nenhum financiamento foi envolvido na elaboração deste artigo.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Solução de ácido etilenodiaminotetracético (Na2EDTA) de 148 mmol/ | ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD | 20230301 | Agentia B |
| 6% (v/v) solução de peróxido de hidrogênio | ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD | 20230301 | Agentia D |
| Analisador Automático de Classe de Esperma • ESCOPO DA SCA | Microptic S.L. | 1222996; Tipo de modelo: Equipamento de | análise de sêmen assistido por computador (CASA) |
| Tubo centrífugo descartável (1,5 mL) | Zhejiang Gongdong Medical Equipment Co., LTD | 2210009 | Tubo centrífugo para processo de coloração |
| Pipeta de transferência descartável (3 mL) | Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD | 20221101 | Pipeta à base de polímero |
| Contador eletrônico | Nenhum | Nenhum | A contador multicanal |
| Balanças eletrônicas | Shanghai Liangping Instrument Co., LTD | D9008084 | MAX = 100 g, e = 10 d, d = 0,01 g |
| Câmara de contagem Makler | Makler | MQ30004 | 0,01 sq.mm, 10 μ m de profundidade |
| óptico | Olympus | 3G41067201307 | CX31, 10× 40 |
| Orto-toluidina solução de substrato | ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co.,LTD | 20230301 | Agentia C |
| Pontas de pipeta(1 mL) | Coming Life Sciences (Wujiang) Co.,Ltd | 02923205 | 1000 pontas/unidade, 5 unidades/caixa |
| Pontas de pipeta(10 µ L) | Coming Life Sciences (Wujiang) Co., Ltd | 00323961 | 1000 pontas/unidade, 20 unidades/caixa |
| Pontas de pipeta (200 µ L) | Coming Life Sciences (Wujiang) Co., Ltd | 32822810 | 1000 pontas/unidade, 20 unidades/caixa |
| Solução saturada de cloreto de amônio (NH4Cl) | ShenZhen HuaKang Biomedical Engineering Co., LTD | 20230301 | Agentia A |
| SCA câmara de contagem | Microptic S.L. | 102230608 | 10 & micro; m, 2 Câmaras |
| O recipiente para amostra de sêmen | Jiangsu Kangjian Medical Supplies Co., LTD | 20230701 | Receptáculo à base de polímero para amostra de sêmen |
| Mesa termostática | Shenzhen MIAOQUAN Instrument Co., LTD | MQ30004 | Pipeta de transferência MQ-300 |
| (10 µ L) | Eppendoff | 3121000.015 | |
| Pipeta de transferência (1000 µ L) | Eppendoff | 3121000.12 | |
| Pipeta de transferência (200 µ L) | Eppendoff | 3121000.082 | |
| Agitador bidimensional | DragonLab | 822000010000 | VC5A002205 |
Referências
- Agarwal, A., Mulgund, A., Hamada, A., Chyatte, M. R. A unique view on male infertility around the globe. Reprod Biol Endocrinol. 13, 37(2015).
- Sharlip, I. D., et al. Best practice policies for male infertility. Fertil Steril. 77 (5), 873-882 (2002).
- Choy, J. T., Ei....
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Reimpressões e permissões
