आधा किण्वित बाँझ आहार के साथ Axenic Delia antiqua का पालन
Summary
आधा किण्वित बाँझ आहार के साथ कुल्हाड़ी डेलिया एंटीका को पालने की एक सरल प्रक्रिया का वर्णन किया गया है। पीसीआर का उपयोग करके एक्सनिक डी एंटीका के प्रत्येक इंस्टार में केवल एक वोल्बाचिया स्ट्रेन का पता चला था।
Abstract
अक्षीय कीड़े बाँझ मीडिया का उपयोग करके बाँझ कृत्रिम पालन प्रणालियों से प्राप्त किए जाते हैं। ये कीड़े, उनके छोटे आकार, लघु विकास चक्र और कम फ़ीड आवश्यकताओं की विशेषता है, सूक्ष्मजीवों और मेजबानों के बीच संबंधों का अध्ययन करने के लिए आदर्श हैं। आंत माइक्रोबायोटा कीट मेजबानों की शारीरिक विशेषताओं को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करता है, और कुल्हाड़ी कीड़ों में विशिष्ट उपभेदों को पेश करना आंत माइक्रोबियल कार्यों को सत्यापित करने के लिए एक विधि प्रदान करता है। डेलिया एंटीक्वा, डिप्टेरा, परिवार एंथोमाइडे और जीनस डेलिया के क्रम में एक खतरनाक कीट, मुख्य रूप से प्याज, लहसुन, लीक और परिवार लिलियासी की अन्य सब्जियों पर फ़ीड करता है। इसके लार्वा बल्बों पर फ़ीड करते हैं, जिससे पूरे पौधे सड़ जाते हैं, मुरझा जाते हैं और यहां तक कि मर भी जाते हैं। कुल्हाड़ी लार्वा का पालन करके, विकास और विकास पर आंतों के माइक्रोफ्लोरा के प्रभावों का निरीक्षण करने के लिए अनुवर्ती अध्ययन आयोजित किए जा सकते हैं डी। संबंधित रोगाणुओं के एंटीबायोटिक उन्मूलन से जुड़ी विधि के विपरीत, यह लेख अक्षीय डी को बढ़ाने के लिए कम लागत और उच्च दक्षता वाला दृष्टिकोण प्रस्तुत करता है। डी. एंटीक्वा अंडे की सतह नसबंदी के बाद, लार्वा को बढ़ाने के लिए आधा किण्वित बाँझ आहार का उपयोग किया गया था, और डी. एंटीका की कुल्हाड़ी की स्थिति को संस्कृति-निर्भर और संस्कृति-स्वतंत्र परख के माध्यम से सत्यापित किया गया था। अंत में, कीट अंडे की नसबंदी और लार्वा संस्कृति के लिए बाँझ आहार की तैयारी के संयोजन ने अक्षीय डी प्राप्त करने के लिए एक कुशल और सरल विधि के विकास को सक्षम किया है। यह विधि कीट-माइक्रोफ्लोरा इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली दृष्टिकोण प्रदान करती है।
Introduction
कुल्हाड़ी जानवरों, जानवरों में कोई व्यवहार्य सूक्ष्मजीव या परजीवी का पता लगाया जा सकता है के रूप में परिभाषित, मेजबान सूक्ष्मजीव बातचीत 1,2 का अध्ययन करने के लिए मूल्यवान प्रयोगात्मक मॉडल हैं. कीड़े, अकशेरुकी जीवों का सबसे बड़ा समूह, सूक्ष्मजीवों के साथ सहजीवी संबंध बना सकते हैं3. एक्सनिक कीड़ों का उपयोग सहजीवी प्रणालियों में मेजबान-सहजीवन बातचीत का अध्ययन करने के लिए किया जा सकताहै 4. उदाहरण के लिए, Nishide et al.5 ने मैलोडोर वर्म Plautia stali के लिए एक व्यावहारिक बाँझ पालन प्रक्रिया की स्थापना की, जिससे मॉडल सहजीवी प्रणालियों में मेजबान-सहजीवी इंटरैक्शन का विश्वसनीय और कठोर विश्लेषण सक्षम हो गया। कुल्हाड़ी कीड़े अंडे चरण निष्फल और लार्वा और वयस्कों 6,7 के लिए बाँझ भोजन प्रदान करके उत्पादन किया जा सकता है. एक्सनिक कीड़े बहुत महत्व के हैं और जैविक अनुसंधान में व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं। उदाहरण के लिए, सोमरविले एट अल 8 द्वारा किए गए एक अध्ययन से पता चला है कि एंटरोबैक्टर क्लोएक के साथ टीका लगाए गए डायमंडबैक पतंगों ने ट्रांसजेनिक पुरुषों की अनुकूलन क्षमता में सुधार किया है।
डेलिया एंटीक्वा मीगेन दुनिया भर में प्याज और अन्य लिलियासी फसलों का एक आर्थिक रूप से महत्वपूर्ण कीट है, इसके लार्वा प्याज और अन्य लिलियासीफसलों के बल्बों को नुकसान पहुंचाते हैं। डी. एंटीका मुख्य रूप से समशीतोष्ण जलवायु में पाया जाता है और अमेरिका, यूरोप और एशिया के प्याज की खेती वाले क्षेत्रों में व्यापक है। यदि ठीक से नियंत्रित नहीं किया जाता है, तो यह प्याज (एलियम सेपा एल), लहसुन (एलियम सैटिवम एल), shallots (एलियम फिस्टुलोसम एल), और लीक (एलियमकोएनोप्रासम एल) में 50% से 100% 10,11 तक फसल के नुकसान का कारण बन सकता है। लार्वा पौधों के नीचे जमीन के नीचे के हिस्सों पर फ़ीड करते हैं, और इस भोजन के कारण रोपाई मुरझा जाती है और अंततः मर जाती है। इसके अलावा, क्षतिग्रस्त पौधों रोगजनकों में प्रवेश करने के लिए अनुमति दे सकते हैं, बल्ब सड़ने के लिए अग्रणी12. यहां तक कि अगर पौधों को लार्वा द्वारा पूरी तरह से भस्म नहीं किया जाता है, तो वे जो नुकसान पहुंचाते हैं, वह प्याज के पौधों को अप्राप्य बना देता है और इसके परिणामस्वरूप आर्थिक नुकसान होता है।
कीड़े बारीकी से आंत माइक्रोबायोटा के साथ जुड़े हुए हैं, और सबसे कीट हिम्मत सहजीवी बैक्टीरिया है कि मेजबान13,14 द्वारा प्रदान की पोषक तत्वों पर पनपने की एक किस्म होते हैं. जिंग एट अल 15 ने दिखाया कि आंतों के सहजीवी समुदाय का प्राथमिक कार्य आवश्यक पोषक तत्व प्रदान करना है, इसके बाद पाचन और विषहरण से संबंधित कार्य होते हैं। कुछ मामलों में, आंत बैक्टीरिया कीट प्रबंधन उद्देश्यों के लिए एक माइक्रोबियल संसाधन के रूप में काम कर सकते हैं। नतीजतन, व्यक्तिगत आंत बैक्टीरिया के प्रदर्शन और शरीर के भीतर विशिष्ट कार्यों का अध्ययन डी. एंटीका वांछनीय है। इसलिए, कुल्हाड़ी लार्वा की तैयारी विशिष्ट जीवाणु उपभेदों औरकीड़े 16 के बीच बातचीत का अध्ययन करने के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है. वर्तमान में, कीट आंत बैक्टीरिया को खत्म करने के लिए एक आम तौर पर इस्तेमाल विधि संबद्ध रोगाणुओं 17,18,19 उन्मूलन के लिए एक एंटीबायोटिक संयोजन का उपयोग है. अकेले एंटीबायोटिक दवाओं का उपयोग करने के विपरीत, जो केवल माइक्रोबियल संख्या को कम कर सकता है, कीड़ों का अक्षीय पालन सूक्ष्मजीवों की संरचना और मात्रा पर नियंत्रण की अनुमति देता है, जिससे आंत माइक्रोबायोटा कार्यक्षमता का अधिक सटीक सत्यापन सक्षम होता है।
इस प्रकार, यह लेख अक्षीय डी. एंटीका की तैयारी और पालन के लिए एक प्रोटोकॉल का परिचय देता है। एक्सेनिक लार्वा भोजन आधे-किण्वित खाद्य पदार्थों के साथ संयुक्त प्राकृतिक आहार के उच्च तापमान नसबंदी का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है। अंडों को अक्षीय अंडे प्राप्त करने के लिए एक प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल का पालन करते हुए निष्फल किया जाता है, और अंत में, अक्षीय लार्वा को अक्षीय अंडे से सुसंस्कृत किया जाता है। प्रयोग के लिए केवल एक पीढ़ी के लिए कुल्हाड़ी पालन प्रणाली की गई थी। यह कीड़े और आंत माइक्रोबायोटा के बीच बातचीत का अध्ययन करने के लिए सुविधा प्रदान करेगा।
Protocol
Representative Results
Discussion
कीड़ों के पास एक अत्यधिक जटिल आंत माइक्रोबायोटा20,21 होता है, जिससे कीट-सूक्ष्मजीव इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए विशिष्ट आंत माइक्रोबियल उपभेदों के साथ टीका लगाए गए अक्षीय कीड़ो…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (32272530), जिनान परियोजना में विश्वविद्यालय के लिए नई बीस नीतियां (2021GXRC040), शेडोंग प्रांत में प्रमुख वैज्ञानिक और तकनीकी नवाचार परियोजनाएं (2021TZXD002), और किलू प्रौद्योगिकी विश्वविद्यालय की विज्ञान और शिक्षा एकीकरण परियोजना (2022PYI009, 2022PY016, 2022PT105) द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| 0.22 μM filter bottle | Thermo Scientific | 450-0045 | |
| 0.22 μM Syringe Filter | Biosharp | BS-QT-011 | |
| 100-mesh sieve | Zhejiang Shangyu Jinding Standard Sieve Factory | No Catalog numbers | |
| 1x PBS solution | Solarbio | P1020 | |
| 2x Taq PCR Master Mix | GENVIEW | GR1113-1ML | |
| 5.2% NaClO solution | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 80010428 | |
| 500 mL Conical flask | Thermo Scientific | 4103-0500 | |
| 50 mL vented centrifuge tube | JET BIOFIL | BRT-011-050 | |
| 50x TAE buffer | GENVIEW | GT1307 | |
| Agar powder | Ding Guo | DH010-1.1 | |
| Biochemical incubator | STIK | 21040121500010 | |
| Cell sieve | SAINING | 5022200 | |
| Choline chloride | Sangon Biotech | A600299-0100 | |
| ddH2O | Ding Guo | PER018-2 | |
| Disposable grinding pestle | JET BIOFIL | CSP-003-002 | |
| DNA extraction kit | Sangon Biotech | B518221-0050 | |
| DNA Marker | Sangon Biotech | B600335-0250 | |
| Ethanol absolute | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 10009218 | |
| Filter paper | NEWSTAR | 1087309025 | |
| Food processor | Guangdong Midea Life Electric Appliance Manufacturing Co., Ltd. | WBL25B26 | |
| Illuminated incubator | Shanghai ESTABLISH Instrumentation Co., Ltd. | A16110768 | |
| L-Ascorbic acid | Sangon Biotech | A610021-0100 | |
| L-shaped spreader | SAINING | 6040000 | |
| Nutrient agar medium | Hope Bio | HB0109 | |
| Scissors | Bing Yu | BY-103 | Purchase on Jingdong |
| Shock incubator | Shanghai Zhichu Instrument Co., Ltd. | 2020000014 | |
| Sucrose | GENVIEW | CS326-500G | |
| Super Green nucleic acid dye | Biosharp | BS355A | |
| Super-clean table | Heal Force | AC130052 | |
| TSB | Hope Bio | HB4114 | |
| Vacuum pump | Zhejiang Taizhou Seeking Precision Vacuum Pump Co., Ltd. | 22051031 | |
| Yeast extract | Thermo Scientific | LP0021B |
Referências
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