氧化铁标记的胚胎干细胞和的hMSCs纳米粒子在体内的跟踪与非侵入性磁共振成像
Summary
对于新的干细胞疗法的评价，它是重要的非侵入性的追踪体内注射细胞。该视频将告诉你如何标注随后在体内磁共振成像体内的氧化铁造影剂的人类间质细胞和胚胎干细胞。
Abstract
近年来，干细胞研究导致了一个更好地理解，发育生物学，各种疾病和再生医学上的潜在影响。一种非侵入性的方法来监视移植的干细胞在体内反复将大大提高我们的理解能力的机制，控制干细胞死亡，并确定营养因子及信号转导通路，提高干细胞植入。磁共振成像已被证明是一个有效的工具与附近的显微解剖分辨率的干细胞在体内的描述。为了检测与议员的干细胞，细胞与细胞特异性MR造影剂标记。为此，氧化铁纳米粒子，如超顺磁性氧化铁粒子（SPIO），适用的，因为他们的细胞检测，其优良的生物相容性的高灵敏度。超顺磁性氧化铁粒子组成的氧化铁核心和葡聚糖，carboxydextran或淀粉外衣，通过创建本地的外地的不均匀性，导致减少对T2加权MR图像信号的功能。本演示将展示技术与临床应用磁共振造影剂的干细胞，随后与磁共振成像的标记细胞在体内跟踪的非侵入性标签。
Protocol
标识与Ferucarbotran HMSC 这是标签与Ferucarbotran，氧化铁磁共振成像造影剂人类间质干细胞的技术： 首先，板18-24小时前标签程序在T75烧瓶在80％汇合的细胞。如果您使用一个不同的培养皿中，这是相等于约10000细胞每平方厘米 2 。 第二天，开始准备的标签介质，加入30μLResovist无血清媒体8毫升。将标签之一T75烧瓶中，在80％汇合对应一个铁100微克/毫升媒体的?…
Discussion
一个干细胞的非侵入性的描述是监测几乎所有的干细胞为基础的治疗是至关重要的。一个更好的理解，在标记的干细胞的体内动力学MR图像的可视化，可能导致理性的方式和更有效地利用干细胞疗法。由于我们使用了临床应用的造影剂和成像技术，我们提出的协议应随时翻译患者应用。潜在的临床应用我们的方法包括比较调查的各种亚型干细胞或基因改造的干细胞植入过程，以及评估结果的干细胞植入的治疗效?…
Acknowledgements
这个项目是一个莱昂J.塔尔从加州再生医学研究所的种子批。托比亚斯亨宁是由德国研究协会（DFG，何4578/1-2）津贴一个研究。我们要感谢他对人类胚胎干细胞培养的意见的华尼托Meneses。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| D-MEM High Glucose | Reagent | Sigma | D5648 | |
| Gelatin | Reagent | Sigma | G1890 | dilute Gelatin in PBS to final concentration of 0.1 % |
| PBS (Ca++ Mg++ freed) | Reagent | GIBCO | 14190-144 | |
| Trypsin-EDTA 0.05% | Reagent | Invitrogen | 25300-120 | |
| Trypsin-EDTA 0.25% | Reagent | Invitrogen | 25200-114 | |
| FBS characterized | Reagent | Hyclone | SH30071.03 | |
| Cell Strainer (40 μm Nylon) | Tool | BD Falcon | 352340 | |
| Knockout DMEM | Reagent | GIBCO | 10829018 | |
| Knockout Serum Replacer | Reagent | GIBCO | 10828028 | |
| b-Mercaptoethanol | Reagent | Sigma | 7522 | |
| non-essential amino acids | Reagent | GIBCO | 11140050 | |
| FGF-2 | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Glutamine | Reagent | GIBCO | 25030081 | |
| Penicillin/Streptomycin | Reagent | GIBCO | 15140-122 | |
| Ferumoxides (Endorem) | Reagent | Guerbet | ||
| Ferucarbotran (Resovist®) | Reagent | Bayer Schering AG |
Referências
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Oostendorp, R. A. J., Settles, M., Piontek, G., Metz, S., Heinzmann, U., Rummeny, E. J., Schlegel, J., Link, T. M. Targeting of Hematopoietic Progenitor Cells with MR Contrast Agents. 228, 760-767 (2003).
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Piontek, G., Metz, S., Brauer, R., Debus, G., Corot, C., Schlegel, J., Link, T. M., Peschel, C., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J. Migration of iron oxide labeled human hematopoietic progenitor cells in a xenotransplant model: in vivo monitoring using clinical magnetic resonance imaging equipment. Radiology. 234, 197-205 (2005).
- Henning, T. D., Saborowski, O., Golovko, D., Boddington, S., Bauer, J. S., Fu, Y., Meier, R., Pietsch, H., Sennino, B., McDonald, D. M., Daldrup-Link, H. E. Cell labeling with the positive MR contrast agent. Gadofluorine M. Eur Radiol. 17, 1226-1234 (2007).
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LabelingHESCsHMSCsIron Oxide NanoparticlesNon-invasiveIn Vivo TrackingMR ImagingStem Cell ResearchBiologia do DesenvolvimentoRegenerative MedicineTransplanted Stem CellsMechanismsStem Cell DeathTrophic FactorsSignaling PathwaysStem Cell EngraftmentMR Contrast AgentsSuperparamagnetic Iron Oxide Particles (SPIO)BiocompatibilityDextranCarboxydextranStarch Coat
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Henning, T. D., Boddington, S., Daldrup-Link, H. E. Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging. J. Vis. Exp. (13), e685, doi:10.3791/685 (2008).