Rotulagem e hESCs hMSCs com óxido de ferro nanopartículas para Não-invasiva em Rastreamento vivo com ressonância magnética
Summary
Para a avaliação de terapias com células-tronco é importante não invasiva track as células injetadas in vivo. Este vídeo irá mostrar-lhe como rotular as células-tronco mesenquimais e embrionárias com óxido de ferro agentes de contraste com base in vivo para posterior ressonância magnética in vivo.
Abstract
Nos últimos anos, investigação em células estaminais tem levado a uma melhor compreensão da biologia do desenvolvimento, várias doenças e seu impacto potencial na medicina regenerativa. Um método não-invasivo para monitorar as células-tronco transplantadas repetidamente in vivo, aumentaria consideravelmente a nossa capacidade de compreender os mecanismos que controlam a morte de células-tronco e identificar fatores tróficos e vias de sinalização que melhoram o enxerto de células-tronco. RM tem sido provado ser uma ferramenta eficaz para a representação em vivo das células-tronco com resolução anatômica perto microscópica. A fim de detectar células-tronco com MR, as células têm de ser rotulados com células agentes de contraste específicos MR. Para este fim, as nanopartículas de óxido de ferro, tais como partículas superparamagnéticas de óxido de ferro (SPIO), são aplicados, por causa de sua alta sensibilidade para a detecção de células e sua excelente biocompatibilidade. SPIO partículas são compostas de um núcleo de óxido de ferro e um casaco de dextran, carboxydextran ou amido, e função, criando inomogeneidades de campo local, que causam uma diminuição do sinal em imagens ponderadas em T2 MR. Esta apresentação vai demonstrar técnicas para a rotulagem de células-tronco com agentes de contraste clinicamente aplicáveis MR para posterior não-invasiva no rastreamento vivo das células marcadas com ressonância magnética.
Protocol
Discussion
A representação não-invasivo de células-tronco é fundamental para o monitoramento praticamente qualquer terapia com células-tronco baseado. Uma melhor compreensão da na cinética in vivo de células-tronco rotulados, como visualizado nas imagens de RM, podem liderar o caminho para uma racional e uma utilização mais eficaz da haste terapias baseadas em células. Desde que nós usamos agentes de contraste clinicamente aplicáveis e técnicas de imagem, os nossos protocolos apresentados devem ser facilmente traduzíveis para apl…
Acknowledgements
Este projeto foi suportado por uma concessão SEED Leon J. Thal do Instituto de Medicina Regenerativa da Califórnia. Tobias Henning foi financiado por uma bolsa de Pesquisa do alemão Research Association (DFG, HE 4578/1-2). Queremos agradecem Meneses Juanito para o seu conselho sobre a cultura de células estaminais embrionárias humanas.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| D-MEM High Glucose | Reagent | Sigma | D5648 | |
| Gelatin | Reagent | Sigma | G1890 | dilute Gelatin in PBS to final concentration of 0.1 % |
| PBS (Ca++ Mg++ freed) | Reagent | GIBCO | 14190-144 | |
| Trypsin-EDTA 0.05% | Reagent | Invitrogen | 25300-120 | |
| Trypsin-EDTA 0.25% | Reagent | Invitrogen | 25200-114 | |
| FBS characterized | Reagent | Hyclone | SH30071.03 | |
| Cell Strainer (40 μm Nylon) | Tool | BD Falcon | 352340 | |
| Knockout DMEM | Reagent | GIBCO | 10829018 | |
| Knockout Serum Replacer | Reagent | GIBCO | 10828028 | |
| b-Mercaptoethanol | Reagent | Sigma | 7522 | |
| non-essential amino acids | Reagent | GIBCO | 11140050 | |
| FGF-2 | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Glutamine | Reagent | GIBCO | 25030081 | |
| Penicillin/Streptomycin | Reagent | GIBCO | 15140-122 | |
| Ferumoxides (Endorem) | Reagent | Guerbet | ||
| Ferucarbotran (Resovist®) | Reagent | Bayer Schering AG |
Referências
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Oostendorp, R. A. J., Settles, M., Piontek, G., Metz, S., Heinzmann, U., Rummeny, E. J., Schlegel, J., Link, T. M. Targeting of Hematopoietic Progenitor Cells with MR Contrast Agents. 228, 760-767 (2003).
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Piontek, G., Metz, S., Brauer, R., Debus, G., Corot, C., Schlegel, J., Link, T. M., Peschel, C., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J. Migration of iron oxide labeled human hematopoietic progenitor cells in a xenotransplant model: in vivo monitoring using clinical magnetic resonance imaging equipment. Radiology. 234, 197-205 (2005).
- Henning, T. D., Saborowski, O., Golovko, D., Boddington, S., Bauer, J. S., Fu, Y., Meier, R., Pietsch, H., Sennino, B., McDonald, D. M., Daldrup-Link, H. E. Cell labeling with the positive MR contrast agent. Gadofluorine M. Eur Radiol. 17, 1226-1234 (2007).
