गैर इनवेसिव पता लगाने के लिए प्रतिदीप्त रंगों के साथ ऑप्टिकल इमेजिंग के साथ स्टेम सेल लेबल
Summary
इस वीडियो में मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं और फ्लोरोसेंट रंजक के साथ mesenchymal स्टेम सेल की लेबलिंग के लिए तकनीक से पता चलता है. इस तकनीक vivo में एक ऑप्टिकल इमेजिंग के साथ प्रतिरोपित स्टेम कोशिकाओं की ट्रैकिंग के लिए और प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के साथ histopathological सहसंबंध के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Abstract
ऑप्टिकल इमेजिंग (पुराना) के नए स्टेम सेल आधारित चिकित्सा के vivo निगरानी में के लिए एक आसान, तेज, और सस्ती उपकरण है. एक फ्लोरोसेंट रंजक, लेबल कोशिकाओं और विशिष्ट लक्ष्य अंगों या विकृतियों में उनके संचय के दृश्य के बाद अंतःशिरा इंजेक्शन के साथ स्टेम सेल के पूर्व vivo लेबलिंग तकनीक पर आधारित है. प्रस्तुत तकनीक दर्शाता है कि कैसे हम lipophilic फ्लोरोसेंट रंजक के साथ सरल ऊष्मायन द्वारा मानव mesenchymal स्टेम सेल (hMSC) लेबल (C67H103CIN2O3S) किया है और हम कैसे के साथ मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (hESC) लेबल एफडीए को मंजूरी दी फ्लोरोसेंट डाई ग्रीन (भारतीय तट रक्षक) Indocyanine. तेज पालन और फॉस्फोलिपिड सेल झिल्ली bilayer भर lypophilic डाई के प्रसार तंत्र के माध्यम से है. लेबलिंग दक्षता आम तौर पर अगर कोशिकाओं के रूप में सीरम युक्त मीडिया में ऊष्मायन करने का विरोध किया सीरम मुक्त मीडिया में रंग के साथ incubated हैं सुधार है. इसके अलावा, अभिकर्मक एजेंट Protamine सल्फेट के अलावा काफी विपरीत एजेंट तेज सुधार.
Protocol
Discussion
पुराना एक अपेक्षाकृत नया इमेजिंग तकनीक है, प्रतिदीप्ति का पता लगाने पर आधारित है. पुराना radiotracer आधारित इमेजिंग तकनीक के रूप में के रूप में प्रति संवेदनशील है, लेकिन किसी भी विकिरण जोखिम के साथ संबद्ध नहीं है. पुर?…
Acknowledgements
यह परियोजना एक लियोन पुनर्योजी चिकित्सा के लिए कैलिफोर्निया इंस्टीट्यूट से जे थाल बीज अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था. टोबीस हेनिंग एक जर्मन रिसर्च एसोसिएशन (DFG, महामहिम 4578/1-2) से वजीफा रिसर्च द्वारा वित्त पोषित किया गया था. हम मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं की संस्कृति पर अपनी सलाह के लिए आभार Juanito Meneses को स्वीकार करना चाहते हैं.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Indocyanine Green (IR-125) | Reagent | Fisher Scientific | AC41254-1000 | |
| DMSO | Reagent | Sigma | D-2650 | |
| D-MEM High Glucose | Reagent | Sigma | D5648 | |
| Gelatin | Reagent | Sigma | G1890 | Dilute to final concentration of 0.1% in PBS |
| PBS, Mg and Ca free | Reagent | GIBCO | 14190-144 | |
| Trypsin-EDTA 0.05% | Reagent | Invitrogen | 25300-120 | |
| Trypsin-EDTA 0.25% | Reagent | Invitrogen | 25200-114 | |
| FCS, characterized | Reagent | Hyclone | SH30071.03 | |
| Cell Strainer (40 μm Nylon) | Reagent | BD Falcon | 352340 | |
| DiD | Reagent | Molecular Probes | V-22887 | |
| Knockout DMEM | Reagent | GIBCO | 10829018 | |
| Knockout Serum Replacer | Reagent | GIBCO | 10828028 | |
| b-Mercaptoethanol | Reagent | Sigma | 7522 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | GIBCO | 11140050 | |
| FGF-2 | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Glutamine 200mM | Reagent | GIBCO | 25030081 | |
| Penicillin/Streptomycin | Reagent | GIBCO | 15140-122 | |
| Protamine Sulfate | Reagent | American Pharmaceutical Partners Inc. |
Referências
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Metz, S., Piontek, G., Settles, M., Pichler, B., Heinzmann, U., Weinmann, H. J., Schlegel, J., Link, T. M., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J. Stem cell tracking with Gadophrin-2 — a bifunctional contrast agent for MR imaging, optical imaging and fluorescence microscopy. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 31, 1312-1321 (2004).
- Simon, G. H., Daldrup-Link, H. E., Kau, J., Metz, S., Schlegel, J., Piontek, G., Saborowski, O., Demos, S., Duyster, J., Pichler, B. J. Optical imaging of experimental arthritis using allogeneic leukocytes labeled with a near-infrared fluorescent probe. Eur J Nucl Med & Mol Imaging. 33, 998-1006 (2006).
- Sutton, E., Henning, T., Pichler, B., Bremer, C., Daldrup-Link, H. E. Cell Tracking with Optical imaging. Eur Radiol. 2, 350-357 (2003).
- Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging. Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).
