光イメージングによる非侵襲的検出のための蛍光色素で標識幹細胞
Summary
このビデオでは、蛍光色素を持つヒト胚性幹細胞と間葉系幹細胞のラベリングのテクニックを示しています。この手法は、生体内で光学イメージングを、蛍光顕微鏡による病理組織学的相関の移植された幹細胞の追跡に使用することができます。
Abstract
光イメージング（OI）は、新しい幹細胞ベースの治療のin vivoモニタリングのための簡単、迅速かつ安価なツールです。技術は、蛍光色素、標識細胞と特定の標的臓器や病態におけるその蓄積の可視化のその後の静脈注射による幹細胞のex vivoでの標識に基づいています。紹介したテクニックは、我々は脂溶性蛍光色素を使って簡単なインキュベーションすることによりヒト間葉系幹細胞（hMSCの）ラベルを付ける方法を示していました（C67H103CIN2O3S）と我々はラベル付け方法FDAによるヒト胚性幹細胞（ヒトES細胞）蛍光色素はグリーン（ICG）をインドシアニン承認した。取り込み機構は、リン脂質の細胞膜の脂質二重層でlypophilic染料の付着と拡散を介してです。細胞を、血清含有培地でのインキュベーションとは対照的に無血清培地中の色素とインキュベートされている場合の標識効率は、通常、改善されています。さらに、トランスフェクション剤、硫酸プロタミンの添加は、造影剤の取り込みを大幅に向上させます。
Protocol
Discussion
OIは、蛍光の検出に基づいて、比較的新しいイメージング技術です。 OIは、放射性トレーサーベースのイメージング技術と同じくらい敏感ですが、任意の照射への暴露に関連付けられていない。 OIは、それによって標的部位への細胞移動への洞察を提供する、非侵襲的かつ反復的に追跡する細胞の効果的な手段を提供します。テクニックの一つの主要な制限は、in vivoでの蛍光プローブの限られた組織の浸透…
Acknowledgements
このプロジェクトは、再生医療のためのカリフォルニア工科大学からレオンJ.タールのSEEDの助成金によってサポートされていました。トビアスヘニングは、ドイツ研究協会（DFG、HE 4578/1-2）から奨学金研究によって資金を供給された。我々は感謝してヒト胚性幹細胞の培養上彼のアドバイスをファニートのMenesesを確認応答したい。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Indocyanine Green (IR-125) | Reagent | Fisher Scientific | AC41254-1000 | |
| DMSO | Reagent | Sigma | D-2650 | |
| D-MEM High Glucose | Reagent | Sigma | D5648 | |
| Gelatin | Reagent | Sigma | G1890 | Dilute to final concentration of 0.1% in PBS |
| PBS, Mg and Ca free | Reagent | GIBCO | 14190-144 | |
| Trypsin-EDTA 0.05% | Reagent | Invitrogen | 25300-120 | |
| Trypsin-EDTA 0.25% | Reagent | Invitrogen | 25200-114 | |
| FCS, characterized | Reagent | Hyclone | SH30071.03 | |
| Cell Strainer (40 μm Nylon) | Reagent | BD Falcon | 352340 | |
| DiD | Reagent | Molecular Probes | V-22887 | |
| Knockout DMEM | Reagent | GIBCO | 10829018 | |
| Knockout Serum Replacer | Reagent | GIBCO | 10828028 | |
| b-Mercaptoethanol | Reagent | Sigma | 7522 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | GIBCO | 11140050 | |
| FGF-2 | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Glutamine 200mM | Reagent | GIBCO | 25030081 | |
| Penicillin/Streptomycin | Reagent | GIBCO | 15140-122 | |
| Protamine Sulfate | Reagent | American Pharmaceutical Partners Inc. |
Referências
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Metz, S., Piontek, G., Settles, M., Pichler, B., Heinzmann, U., Weinmann, H. J., Schlegel, J., Link, T. M., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J. Stem cell tracking with Gadophrin-2 — a bifunctional contrast agent for MR imaging, optical imaging and fluorescence microscopy. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 31, 1312-1321 (2004).
- Simon, G. H., Daldrup-Link, H. E., Kau, J., Metz, S., Schlegel, J., Piontek, G., Saborowski, O., Demos, S., Duyster, J., Pichler, B. J. Optical imaging of experimental arthritis using allogeneic leukocytes labeled with a near-infrared fluorescent probe. Eur J Nucl Med & Mol Imaging. 33, 998-1006 (2006).
- Sutton, E., Henning, T., Pichler, B., Bremer, C., Daldrup-Link, H. E. Cell Tracking with Optical imaging. Eur Radiol. 2, 350-357 (2003).
- Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging. Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).
