Одноместный Электропорация сотовых в естественных условиях в течение Неповрежденный развивающийся мозг
Summary
Одноклеточный электропорации (SCE) является специализированной техники позволяет доставки ДНК или других макромолекул на отдельные клетки в неповрежденной ткани, в том числе в естественных препаратов. Здесь мы подробно процедура SCE из флуоресцентного красителя или плазмидной ДНК в нейроны в мозгу нетронутыми Xenopus laevis головастика.
Abstract
Одноклеточный электропорации (SCE) является специализированной техники позволяет доставки ДНК или других макромолекул на отдельные клетки в неповрежденной ткани, в том числе в естественных препаратов. Явное преимущество этого метода в том, что экспериментальные манипуляции могут быть выполнены на отдельные клетки, оставляя окружающую ткань без изменений, тем самым проводя различие клеточной автономных эффектов от тех, в результате глобального лечения. В сочетании с передовыми в естественных методов визуализации, SCE флуоресцентных маркеров позволяет прямой визуализации клеточной морфологии, рост клеток и внутриклеточных событий за сроки от нескольких секунд до нескольких дней. Хотя эта техника используется в разнообразных в естественных условиях и экс подготовки естественных условиях, мы оптимизировали эту технику для использования в Xenopus laevis головастиков. В этом видео статье мы подробно процедура SCE из флуоресцентного красителя или плазмидной ДНК в нейроны в мозгу нетронутыми альбиноса Xenopus головастика. Мы также обсудим методы для оптимизации доходности и показать примеры жить двухфотонной флуоресценции нейронов флуоресцентно помеченных SCE.
Protocol
Discussion
Одноклеточный электропорации (SCE) является мощным инструментом для определения функций генов и выполнение целевых генетических манипуляций. Прозрачность альбиноса головастика и доступности мозга делают эту модель системы идеально подходят для визуализации нейронных роста и внутриклеточных с?…
Acknowledgements
Авторы выражают благодарность Шармин Хоссейн для покадровой съемки фильма рост незрелых нейронов и Дерек Данфилд для электронных изображений микроскопии SCE советы micromicropipette.
Referências
- Bestman, J. E., Ewald, R. C., Chiu, S. L., Cline, H. T. In vivo single-cell electroporation for transfer of DNA and macromolecules. Nature Protocols. 1, 1267-1272 (2006).
- Dunfield, D., Haas, K. Single cell electroporation. Encyclopedia of Neuroscience (4th Ed.). , .
- Haas, K., Jensen, K., Sin, W. C., Foa, L., Cline, H. T. Targeted electroporation in Xenopus tadpoles in vivo–from single cells to the entire brain. Differentiation. 70, 148-154 (2002).
- Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Cline, H. T. Single-cell electroporation for gene transfer in vivo. Neuron. 29, 583-591 (2001).
