Cultura di cellule dendritiche mieloidi dai precursori del midollo osseo

Summary

Questo video mostra la procedura per la differenziazione delle cellule dendritiche mieloidi dal midollo osseo dei topi. Isolamento di tibia e femore del mouse, e la lavorazione del midollo osseo sono dimostrati. Immagini che dimostrano morfologia cellulare prima e dopo la differenziazione, e le figure raffiguranti fenotipo delle cellule e IL-12 maturazione di produzione utilizzando i seguenti CpG sono mostrati.

Abstract

Mieloide cellule dendritiche (DC) sono spesso usati per studiare le interazioni tra meccanismi immunitari innati e adattivi e la prima risposta alle infezioni. Perché questi sono l'antigene più potenti cellule presentanti l', DC sono sempre più usato come vettore vaccino per studiare l'induzione di risposta immunitaria antigene-specifica. In questo video, dimostriamo la procedura per la raccolta delle tibie e femori da un topo donatore, l'elaborazione del midollo osseo e differenziare DC in vitro. Le proprietà del cambiamento DC a seguito di stimolazione: le cellule dendritiche immature sono fagociti potenti, mentre DC mature sono capaci di presentazione dell'antigene e di interazione con CD4 + e CD8 + T. Questo cambiamento di attività funzionale corrisponde al upregulation dei marcatori di superficie delle cellule e la produzione di citochine. Molti agenti possono essere utilizzati per DC mature, tra cui citochine e Toll-like ligandi del recettore. In questo video, dimostriamo confronti citometria a flusso di espressione di due molecole co-stimolatorie, CD86 e CD40, e le citochine, IL-12, a seguito di stimolazione durante la notte con trattamento di CpG o modelli. Dopo la differenziazione, DC può essere ulteriormente manipolata per l'utilizzo come vettore vaccino o per generare una risposta immunitaria antigene-specifica in vitro utilizzando impulsi peptidi o proteine, o trasdotte con vettori virali ricombinanti.

Protocol

Questo protocollo è stato adattato da Lutz et al 1. Raccolta ed elaborazione di midollo osseo Isolamento della tibia e femore: eutanasia il mouse donatore e spruzzare le gambe con il 70% di etanolo. Afferrare la caviglia prima saldamente con una pinza smussato e cominciare a tagliare via la pelle e la muscolatura sottostante per esporre la tibia. Per evitare di danneggiare l'osso, tagliato lentamente e in parallelo alla tibia, lasciando intatto il …

Discussion

DC sono utili per gli studi di interazioni immune innata e adattativa, e può essere impiegato come vettore di vaccino. In questo video, abbiamo dimostrato i passi per isolare midollo osseo e differenziare cellule dendritiche mieloidi in vitro. Dopo il periodo di coltura, queste cellule possono essere visualizzate sia le cellule al microscopio come aderenti, che spesso possiedono dendriti, e non aderente cellule rotonde. La DC può essere ulteriormente manipolata per la presentazione dell'antigene da pulsante con l'antigene o stimol…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
recombinant murine GM-CSF	Reagent	Peptrotech	315-03