라이트의 전체 세포 레코딩은 망막 통에 흥분성의 시냅틱 전류를 Evoked
Summary
이 동영상은 수생 호랑이 도롱뇽의 망막 통에 전체 셀 전압 클램프 레코딩 과정을 보여줍니다. 우리는뿐만 아니라 망막의 시각적인 자극하는 동안 패치 클램프 레코딩을 수행하는 방법으로 슬라이스의 준비를 보여줍니다.
Abstract
우리는 시냅스 회로 망막에 underlies 시각 정보 처리 연구를 전체 세포 패치 클램프 기법을 사용합니다. 이 비디오에서는, 우리는 망막 슬라이스 준비에서 개별 세포의 빛을 evoked 흐름 전체 세포 레코딩을 수행하는 과정을 통해 여러분을 안내할 것입니다. 우리는 동물 모델로 수생 호랑이 도롱뇽을 사용합니다. 우리는 눈 해부를 설명함으로써 시작하고 조각이 electrophysiological 레코딩을위한 마운트하는 방법 보여줍니다. 슬라이스가 기록 챔버에 배치되면, 우리는 전체 셀 전압 클램프 레코딩을 수행하는 방법을 보여줍니다. 우리는 빛이 – evoked 현재 답변을 이끌어내는 수있는 통에 photoreceptors에 시각적 자극이 프로젝트를 만듭니다. 8 채널 재관류 시스템을 우리가 신속하게 다른 에이전트 사이를 전환할 수있게 의하여 기록하는 동안 우리는 약리 요원으로 슬라이스를 perfuse. 망막 슬라이스 준비 널리 특히 전체 마운트 준비에 액세스할 수 없습니다 amacrine 또는 바이폴라 세포를 연구, 망막의 패치 클램프 녹음에 사용됩니다.
Protocol
솔루션 신경절 세포에 대한 세포 솔루션 (MM)를 100 K – 글루 콘 산, 8 KCl, 1 MgCl 2, 1 EGTA, 10 HEPES, 4 ATP, 0.5 GTP, 90 μm의 Sulforhodamine B는 (얼룩)을 함께 산도 = 7.4로 조정 코 양극성 세포 (MM)을위한 세포 솔루션 : 90 K – 글루 콘 산, 8 KCl, 1 MgCl 2, 10 BAPTA, 10 HEPES, 4 ATP, 0.5 GTP, 90 μm의 Sulforhodamine B는 (얼룩)을 함께 산도 = 7.4로 조정 코 세포외 링어의 솔루션 (MM)을 : 112 NaCl, 5 포?…
Discussion
장점 :
- 모든 세포 유형은 액세스할 수 있습니다
- 셀 유형을 쉽게 식별은 특히 형광 염료는 전극 솔루션에 추가하는 경우
- 약리 요원들은 쉽게 표적 세포에 도달할 수
- 패치 클램프 기술은 망막 계산 서로 다른 이온 채널의 역할을 조사 할 수 있습니다. 동일한 정보는 날카로운 전극과 extracelluar 스파이크 녹음하거나 녹음을 통해 얻을 수 없습니다.
- 이 기술은 ?…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Multiclamp 700A | Patch Clamp Amplifier | Molecular Devices | ||
| SZX9 | Dissection Micropscope | Olympus | ||
| BX50WI | Upright Microscope | Olympus | Equipped with 40x, 10x water immersion objective, fluorescent filters and mercury lamp | |
| P-97 | Micropipette Puller | Sutter Instruments | ||
| Lucivid | Microscope image injector | Mbf bioscience | ||
| 8-channel perfusion system | Microperfusion | Parker Hannfin corporation | ||
| Bits++ | Digital Video Processor | Cambridge Research Systems | ||
| Infrared Oculars | Outro | ITT | ||
| Adhesive silicone wells | Outro | Molecular Probes | 20mm diameter, 1.0mm deep | |
| Membrane Filters | Filter | Milipore | HAWPO1300 | .45µm HA |
| Borosilicate Glass Capillaries | Electrode glass | World Precision Instruments | 1B150-4 | |
| Syringe Filters | Filter | Whatman | 6789-0402 | 4mm filters, .2um Nylon Membrane, Polypropylene housing |
| IR camera | Micropscope mounted camera | Sony | SPT-M324 | Extrawave HAD, B7W video camera |
| Picrotoxin | Reagent | Sigma | P1675 | |
| Strychnine | Reagent | Sigma | S0532 | |
| Imidazole-4-acetic acid sodium salt | Reagent | Sigma | I7013 | |
| Larval tiger salamanders | Animal | Charles E. Sullivan (Nashville, TN) |
Referências
- Cook, P. B., Lukasiewicz, P. D., McReynnolds, J. S. GABA(C) receptors control adaptive changes in a glycinergic inhibitory pathway in salamander retina. Journal of Neuroscience. 20, 806-812 (2000).
- Heflin, S. J., Cook, P. B. Narrow and wide field amacrine cells fire action potentials in response to depolarization and light stimulation. Visual Neuroscience. 24, 197-206 (2007).
- Ichinose, T., Shields, C. R., Lukasiewicz, P. D. Sodium Channels in the Transient Retinal Bipolar Cells Enhance Visual Responses in Ganglion Cells. J Neurosci.. 25, 1856-1865 (2005).
Tags
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Citar este artigo
Werner, B., Cook, P. B., Passaglia, C. L. Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice. J. Vis. Exp. (17), e771, doi:10.3791/771 (2008).