Первичная диссоциированных мозга Допамин клеточных культур от грызунов Новорожденные
Summary
Первичная диссоциированных культурах допамина мозга ячейки позволяют изучение характеристик пресинаптических дофаминовых нейронов. Они могут быть использованы для мониторинга в режиме реального времени высвобождение дофамина кинетики и белка / мРНК регуляторов допамина экзоцитоза. Здесь мы покажем вам, как создать эти культуры от грызунов новорожденных.
Abstract
Возможность создания первичных клеточных культур дофаминовых нейронов позволяет для изучения характеристик пресинаптических дофаминовых нейронов в отрыве от системного участии в других местах в головном мозге. В нашей лаборатории мы используем эти нейроны оценить допамина кинетики релиз использованием углеродного волокна amperometry, а также выражение уровень допамина связанных генов и белков с использованием количественных ПЦР и иммуноцитохимия. В этом видеоролике мы покажем, как мы генерируем эти культуры от грызунов новорожденных.
Процесс включает несколько этапов, в том числе покрытие корковых глиальные астроциты, кондиционирования нейронов СМИ культуре клеток глии подложки, рассечение мозга у новорожденных, пищеварение, экстракции и покрытие дофаминовых нейронов и того нейротрофических факторов обеспечить выживаемость клеток.
Применениям для таких подготовки включают электрофизиологии, иммуноцитохимия, количественный ПЦР-, видео-микроскопии (т. е. в режиме реального времени везикулярного слияния с плазматической мембраной), анализы жизнеспособность клеток и других токсикологических экранов.
Protocol
Discussion
Методы, описанные здесь, позволяют высоким разрешением морфологических и нейрохимических функций центральных нейронов допамина, которые иначе недоступны в системном или в естественных условиях подход.
Acknowledgements
Работа выполнена при поддержке DK065872 (ЕПС), Фонд Смит Семья премии передовых технологий в области биомедицинских исследований (ЕПС), F31 DA023760 (BMG, ЕПС) и P30 NS047243 (Тафтса центр в области нейронаук).
Referências
- Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats. FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).
- Pothos, E. N. Regulation of dopamine quantal size in midbrain and hippocampal neurons. Behavioural Brain Research. 130, 203-207 (2002).
- Pothos, E. N., Larsen, K. E., Setlik, W., Gershon, M. D., Krantz, D., Liu, Y. -. J., Edwards, R. H., Sulzer, D. Synaptic vesicle transporter expression regulates vesicle phenotype and quantal size. The Journal of Neuroscience. 20, 7297-7306 (2000).
- Pothos, E. N., Davila, V., Sulzer, D. Presynaptic recording of quanta from midbrain dopamine neurons and modulation of the quantal size. The Journal of Neuroscience. 18, 4106-4118 (1998).
- Sulzer, D., Pothos, E. N. Presynaptic mechanisms that regulate quantal size. Reviews in the Neurosciences. 11, 159-212 (2000).
