Summary

من MEFs إلى 2 Matrigel : hESCs من تقسيم MEFs على Matrigel

Published: June 09, 2008
doi:

Summary

هذا الفيديو يوضح كيفية الحفاظ على نمو خلايا المنشأ الجنينية البشرية (hESCs) في ظروف خالية من الخلايا المغذية وكيفية hESCs مرور مستمرة في تغذية الخلايا خالية من الشروط. تأكيد hESC تعدد القدرات التي تزرع في تغذية الخلايا خالية من الشروط التي المجهري المناعي ويتجلى أيضا. الجزء 2 من 3.

Abstract

هذا الفيديو يوضح كيفية زراعة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) على الخلايا الليفية الماوس الجنينية (MEF) الخلايا المغذية ، وكيفية الانتقال من لوحات hESCs MEF لتغذية خالية من الخلايا لوحات Matrigel.

Protocol

hESC صيانة الثقافة اليومية يجب تغيير الثقافة وسائل الإعلام كل ساعة hESC 24. من المخزون ES زجاجة الوسائط المخزنة في 4 درجات مئوية ، واخراج كمية من محلول اللازمة (~ 20ml في 6 – جيدا لوحة) ، ضع في أنبوب الصقر 50ml ، ودافئة إلى 37 درجة مئو…

Discussion

هذا الفيديو يوضح كيفية الانتقال من لوحات hESCs MEF لوحات التغذية Matrigel خالية من الخلايا. علما بأن كثافة مستعمرة على Matrigel أعلى من كثافة المستعمرات من خلال تقسيم المعتاد على MEFs. وهناك حاجة وتلطيخ المناعي الخلوي المجهري أو تدفق للعلامات hESC تعدد القدرات ، مثل أكتوبر وSSEA – 4 – 4 ، لتأكيد الح?…

Acknowledgements

وتدعم الخلايا الجذعية الجنينية البشرية الدراسات في المختبر Teitell بواسطة معهد كاليفورنيا للطب التجديدي (CIRM) منح البذور RS1 – 00313. نشكر أعضاء المركز واسع في الطب التجديدي ، وأبحاث الخلايا الجذعية في جامعة كاليفورنيا ، وخصوصا الدكتور Amander كلارك ، والدكتور جيروم زاك ، وأعضاء معهد الجذعية في جامعة كاليفورنيا واسع مرفق الخلية الأساسية لدعمهم لدراساتنا.

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Knockout Serum Replacer (KSR) Reagent Gibco 10828-028  
DMEM/F12 Reagent Gibco 11330-057  
Non-essential Amino Acids Reagent Gibco 11140-050  
GlutaMax Reagent Gibco 35050-061  
DMEM Reagent Gibco 11995-065  
FBS Reagent Clontech 631107  
L-glutamine Reagent Gibco 25030-081  
BME Reagent Fisher BP176-100  
bFGF Reagent R&D Systems 233-FB-025  
Collagenase IV Reagent Gibco 17104-019  
Dispase Reagent Stem Cell Technologies 17105-041  
Penicillin / Streptomycin Reagent Gibco 15140-122  
Gelatin Reagent Chemicon ES-006-B  
Matrigel Reagent BD Biosciences 354277  
Oct-4 antibody Reagent Santa Cruz Biotechnology SC-9081  
anti-h/mSSEA-4 Phycoerythrin Conjugated Mouse IgG3 Reagent R&D Systems FAB1435P  
FITCI-conjugated antirabbit IgG Reagent Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc. 715-095-152  

Referências

  1. Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts . Science. 282, 1145-1147 (1998).
  2. Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells. Nature Biotechnology. 19, 971-974 (2001).
check_url/pt/831?article_type=t

Play Video

Citar este artigo
Khvorostov, I., Zhang, J., Teitell, M. From MEFs to Matrigel 2: Splitting hESCs from MEFs onto Matrigel. J. Vis. Exp. (16), e831, doi:10.3791/831 (2008).

View Video